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Twist调控骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭 被引量:7
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作者 何昀 方姝煜 +3 位作者 毕杨 何通川 王佚 洪思琦 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期554-560,共7页
目的探讨增强或降低Twist表达对不同恶性程度的骨肉瘤细胞体外增殖、迁移、侵袭及体内成瘤的作用。方法 Real-time PCR及Western blot检测Twist在143B、MG63及TE85三种不同骨肉瘤中的基础表达。采用Ad-Twist及Ad-si Twist腺病毒感染细胞... 目的探讨增强或降低Twist表达对不同恶性程度的骨肉瘤细胞体外增殖、迁移、侵袭及体内成瘤的作用。方法 Real-time PCR及Western blot检测Twist在143B、MG63及TE85三种不同骨肉瘤中的基础表达。采用Ad-Twist及Ad-si Twist腺病毒感染细胞,细胞生长曲线检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞的平行迁移能力,Transwell实验检测细胞的垂直迁移及侵袭能力。Ad-Twist及Ad-si Twist感染Luc标记的143B细胞,制备胫骨近端骨肉瘤模型,活体成像动态观察细胞在体内的生长。结果在骨肉瘤细胞中Twist的基础表达显著高于C3H10细胞(P<0.05),其中在143B细胞表达最高,MG63细胞次之,TE85细胞中最低,Twist的表达水平与骨肉瘤细胞的恶性程度呈正相关。Ad-Twist及Ad-si Twist感染细胞分别能显著提高或降低骨肉瘤细胞中Twist的m RNA及蛋白水平的表达(P<0.05)。生长曲线结果显示Twist过表达能显著促进骨肉瘤细胞的增殖,而抑制Twist的表达后,骨肉瘤细胞的增殖能力降低(P<0.05)。Transwell实验发现Twist过表达后,3种骨肉瘤细胞迁移或侵袭至小室的细胞数明显增多,而抑制Twist的表达可降低骨肉瘤细胞的迁移侵袭能力(P<0.05)。143B细胞具有良好的体内成瘤能力,Twist过表达促进143B细胞在裸鼠体内生长,活体成像动态观察荧光信号显著高于对照组,抑制Twist表达可显著抑制细胞在裸鼠体内生长,信号明显弱于对照组。结论 Twist可增强骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及体内成瘤能力。 展开更多
关键词 骨肉瘤 TWIST 增殖 迁移 侵袭
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支架载体在BMP-9转导干细胞成骨基因治疗中特性的研究
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作者 陈亮 刘渤 +6 位作者 罗小辑 陈富 柯珍勇 尹良军 he tongchuan 蒋电明 邓忠良 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1449-1453,共5页
目的:比较3种可能的支架载体在以骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic protein 9,BMP-9)介导细胞为基础的裸鼠成骨基因治疗模型中的不同促成骨特性。方法:4~6周龄雌性裸鼠40只,体重15~20 g,随机分为4组。3种支架载体分别为I:型胶... 目的:比较3种可能的支架载体在以骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic protein 9,BMP-9)介导细胞为基础的裸鼠成骨基因治疗模型中的不同促成骨特性。方法:4~6周龄雌性裸鼠40只,体重15~20 g,随机分为4组。3种支架载体分别为I:型胶原纤维,羟基磷灰石—磷酸三钙,脱钙基质骨(Demineralized bone matrix,DBM)。分别将表达BMP-9重组腺病毒Ad-BMP-9感染后的小鼠成肌细胞系C2C12细胞注入埋植于皮下一侧的3种载体。将表达绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)重组腺病毒Ad-GFP感染后的C2C12细胞分别注入埋置于其对侧皮下的3种载体作为对照。第4组仅在双侧皮下分别注入Ad-BMP-9或Ad-GFP感染后的C2C12细胞。4周后处死实验裸鼠,行X线检查和组织学分析。结果:X线检测显示:Ⅰ型胶原纤维组90%样本出现新骨形成,HA-TCP组、DMB组和皮下注射组的新骨形成率分别为89%、50%和44%。组织学分析显示:Ⅰ型胶原纤维组和HA-TCP组新骨质量和数量更佳;Ⅰ型胶原纤维组样本中干细胞及新骨分布较其它组更趋均匀;DBM组样本中存活干细胞数量少于其它组。结论:在以BMP-9基因转导细胞为基础的基因治疗中,使用Ⅰ型胶原纤维或HA-TCP载体较脱钙基质骨载体可更有效成骨。同时,Ⅰ型胶原纤维和HA-TCP载体可为基因治疗中使用的细胞提供更好的组织工程环境。 展开更多
关键词 BMP-9 骨再生 支架载体 基因治疗
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重组腺病毒过表达Notch1受体胞内结合域(NICD1)外源性激活Notch信号通路 被引量:1
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作者 廖军义 杜婷婷 +2 位作者 黄伟 何通川 徐伟 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期320-325,共6页
目的:构建Notch1受体胞内结合域(Notch1 intracellular domain,NICD1)的重组腺病毒AdNICD1,探讨外源性过表达AdNICD1对Notch信号通路激活的影响。方法:利用高保真PCR(high fidelity PCR,Hi-Fi PCR)扩增NICD1编码区,并通过Gibson Assembl... 目的:构建Notch1受体胞内结合域(Notch1 intracellular domain,NICD1)的重组腺病毒AdNICD1,探讨外源性过表达AdNICD1对Notch信号通路激活的影响。方法:利用高保真PCR(high fidelity PCR,Hi-Fi PCR)扩增NICD1编码区,并通过Gibson Assembly方法将其克隆至腺病毒载体中,经过菌落PCR、测序鉴定后,在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,再次通过质粒PCR鉴定,然后运用PacⅠ酶切线性化后用重组腺病毒载体转染过表达pTP基因的人胚肾293细胞(human embryo kidney 293 cell line,HEK293)中进行包装,收取病毒后使用过表达pTP基因的HEK293细胞扩增重组腺病毒AdNICD1。运用AdNICD1感染脂肪来源的间充质干细胞(immortalized multipotent adipose-derived mesenchymal stem cells,iMAD),检测病毒感染效率;通过Q-PCR检测NICD1和Notch下游基因表达情况;利用Westernblot检测NICD1在蛋白水平的表达情况。结果:成功构建过表达NICD1的重组腺病毒并有效感染iMAD;利用AdNICD1可明显增加NICD1在基因和蛋白水平的表达,并激活Notch信号下游基因的表达。结论:成功构建过表达NICD1的重组腺病毒,并有效激活Notch信号通路。 展开更多
关键词 Notch1受体胞内结合域 重组腺病毒 NOTCH信号通路
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过表达FGD6对肝干细胞分化的调控作用
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作者 余师师 沙鸥 +3 位作者 李宛玲 胡倩 何通川 张秉强 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2019年第10期1958-1966,共9页
该文主要探讨过表达FGD6(faciogenital dysplasia 6)基因对肝干细胞分化的调控作用及其可能的机制。将FGD6基因插入腺病毒载体使其过表达,并包装成腺病毒(Ad-FGD6),感染小鼠胚胎肝干细胞HP14.5,以空载体腺病毒(Ad-null组)和未感染腺病毒... 该文主要探讨过表达FGD6(faciogenital dysplasia 6)基因对肝干细胞分化的调控作用及其可能的机制。将FGD6基因插入腺病毒载体使其过表达,并包装成腺病毒(Ad-FGD6),感染小鼠胚胎肝干细胞HP14.5,以空载体腺病毒(Ad-null组)和未感染腺病毒组(Blank control组)作为对照;半定量PCR和Western blot分别检测FGD6、肝干细胞标志物(AFP)、肝细胞标志物(ALB)、胆管上皮细胞标志物(CK19、SOX9)及Wnt经典通路中的标志物(β-catenin、wnt3a)的m RNA和蛋白表达水平;并通过糖原染色法(PAS染色)检测细胞内糖原合成的变化情况;CCK8检测各组细胞增殖情况。结果显示,感染Ad-FGD6腺病毒后,与Ad-null组及Blank control组相比,HP14.5细胞中的FGD6的m RNA和蛋白表达水平升高(P<0.05),肝干细胞标志物(AFP)及胆管上皮标志物(CK19、SOX9)的m RNA及蛋白的表达水平降低(P<0.05),而肝细胞标志物ALB及Wnt经典通路中的标志物(β-catenin、wnt3a)的m RNA和蛋白的表达水平均升高(P<0.05);PAS染色发现,Ad-FGD6组存在紫红色颗粒,呈阳性反应,这说明有糖原合成。CCK8检测发现,Ad-FGD6组能促进肝干细胞增殖(P<0.05)。因此,过表达HP14.5细胞的FGD6会使HP14.5细胞向肝细胞分化并促进细胞增殖,而这一过程可能通过Wnt经典信号通路实现。 展开更多
关键词 FGD6基因 肝干细胞 分化调控 重组腺病毒 Wnt经典信号通路
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