微卫星标记位点的分离及其在美洲剑线虫群体分类鉴定上的应用

在美洲剑线虫群体 (Xiphinemaamericanumgroup)上 ,应用简并寡核苷酸引物聚合酶链式反应 (DOP -PCR)技术 ,克服了基因组DNA样本不足的难题 ,成功在微量基因组DNA条件下分离和标记了微卫星重复子 (Mi crosatellite)。研究中 ,目标DNA片段被克隆前 ,DOP -PCR产物首先被连接到载体上 ,然后通过寡核苷酸 (CA) 9和载体上游引物 ,对包含微卫星位点的左侧DNA片段进行PCR扩增 ,该过程后的产物用于克隆和DNA序列分析 ;依据已分析的部分左侧序列 ,设计引物并与载体下游引物一起 ,对DOP -PCR产物再进行PCR扩增 ,使包含整个微卫星及其右侧连接部分被扩增 ,重复克隆和DNA序列分析并结合已分析的左侧序列 ,获得了包含全部微卫星重复子的DNA片段的完整序列。这种分离含微卫星标记位点DNA片段的路径新颖、高效 ,有效克隆率提高到了 93.3%。研究中 ,发现和分析了 9个包含微卫星重复子的片段 ,美洲剑线虫 (X .americanumsensustricto)和美洲剑线虫亚群组(X .americanumsubgroup)的标记性引物被设计和检测。