鲤源嗜水气单胞菌分离鉴定、耐药性及毒力基因检测

为查明贵州某鲤鱼养殖厂鲤鱼死亡的病因,本试验进行了细菌分离培养、菌体形态观察、细菌生理生化鉴定、16S rRNA基因测序分析、药敏试验、耐药基因检测、动物感染试验、毒力基因检测等。结果显示,从死亡鲤鱼病变组织中分离到的细菌呈圆形凸起、表面光滑的灰白色菌落,为革兰氏阴性短杆菌;生化鉴定结果显示,分离菌具有运动性,能发酵葡萄糖产酸产气,精氨酸双水解酶、赖氨酸脱羧酶、M-R和V-P试验阳性;应用细菌16S rRNA基因通用引物进行PCR扩增获得大小为1 421 bp的片段,测序发现,该分离菌与16株嗜水气单胞菌相应序列同源性达75.3%~100.0%;药敏试验结果显示,该分离菌对氟苯尼考、头孢曲松、妥布霉素、氧氟沙星、恩诺沙星5种药物呈现高度敏感,对复方新诺明、磺胺异噁唑、羧苄西林等药物呈现耐药,经耐药基因PCR检测显示,该分离菌携带Sul1、Sul2和Intl1 3种耐药基因,与药敏表型相符;人工感染试验显示,该分离菌有致病力,经毒力基因检测显示,该分离菌携带aer、hly和act 3种毒力基因。上述试验结果表明,本研究分离得到了一株耐磺胺类药物的鲤源嗜水气单胞菌,为该鲤鱼养殖厂的鲤鱼疾病防治与合理用药提供了科学依据。

地基GNSS大气水汽探测遥感研究进展和展望

大气水汽是表征极端天气事件和气候变化的重要参数,准确监测与分析水汽含量对于精准预测各类灾害性天气事件与研究气候变化具有显著意义。作为新兴的大气水汽探测方法,GNSS大气水汽探测技术得到了广泛的关注与应用研究,随着多频多模GNSS系统的发展,全球服务能力的逐步完备和地面基础设施的不断加强,地基GNSS大气水汽探测遥感技术水平得到显著提升,为基于空间大数据揭示气候变化、极端天气过程提供了强有力的数据支撑和发展契机。本文首先系统阐述了GNSS大气水汽探测遥感技术及其应用的发展过程;然后介绍了近年来包括对流层延迟、大气可降水量等多类型GNSS大气参数高精度反演的研究进展,特别是对GNSS大气反演在极端天气短临预报及气候变化现象解释两个方向的研究工作进行了科学探析;最后,阐明了GNSS大气水汽探测遥感技术面临的主要挑战及未来研究展望。

杂交鲟类志贺邻单胞菌的分离鉴定及耐药性分析

试验旨在对鲟体内分离菌进行鉴定、致病力探究和耐药性分析。本研究从濒死鲟体内分离到1株细菌(NZ-2017),通过形态学观察、生理生化特性鉴定、16SrRNA基因分析及系统进化树构建等方法对分离菌种属进行确定,并采用纸片扩散法进行药敏试验,PCR方法检测耐药基因,人工感染小鼠试验确定分离菌的致病力。结果显示,NZ-2017为革兰氏阴性杆菌,其16SrRNA基因经测序及BLAST比对,显示其与类志贺邻单胞菌的同源性达99.70%,结合生理生化鉴定结果确定分离菌为类志贺邻单胞菌。药敏试验结果显示,分离菌对氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、多西环素4种药物敏感,对卡那霉素、阿莫西林、泰乐菌素、复方新诺明4种药物耐药;5种耐药基因检测结果显示,该菌携带3种耐药基因:Sul1、Sul2和Intl1,与药敏表型相符。人工感染试验结果显示,该菌对小鼠有致病力。本研究对贵州地区鲟发病流行的病因作出了准确诊断,为该地区细菌性鱼病预防和合理用药提供依据。

3株维氏气单胞菌耐药性及毒力基因的比较

为探究不同地区的维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)耐药性及毒力基因是否存在区别,本研究从生长形态、生化试验、药敏试验、人工感染试验、16S rDNA基因测序同源性分析及毒力基因等方面比较了草鱼源菌株GZCY2019、杂交鲟源菌株GZXY2018及斑点叉尾鮰源菌株GZBD2017的差异。结果显示,3株不同源维氏气单胞菌在鲜血平板上均为圆形、表面湿润光滑、边缘整齐半透明的灰白色菌落,菌落周围均有β溶血环;革兰氏染色镜检均为两端钝圆短小阴性杆菌;药敏试验显示,3株菌对丁胺卡那、多西环素等药物均敏感,而对复方新诺明、头孢他啶、多黏菌素B等药物均中度敏感,对其他药物则表现出不同程度的敏感性或者耐药性;人工感染试验显示,菌株GZCY2019与GZBD2017对小鼠累计死亡率为100%,菌株GZXY2018的累计死亡率为80%;16S rDNA同源性分析显示,菌株GZCY2019与菌株GZBD2017同源性为99.9%,二者与菌株GZXY2018同源性均为97.1%;毒力基因检测结果显示,3株菌均携带热不稳定性肠毒素(Alt)、溶血素(hlyA)与鞭毛(Fla)等毒力基因,而对细胞毒性肠毒素(Act)及其热稳定性肠毒素(Ast)毒力基因的携带则表现不同。本研究通过不同源维氏气单胞菌的对比发现,3株菌在生长形态、染色镜检结果、生化结果上基本相似,但耐药性和毒力基因的携带存在较大差异。

一株草鱼维氏气单胞菌的分离鉴定及毒力基因分析

为了鉴定贵州芩巩县某养殖场草鱼发病死亡的病原,本研究通过临床解剖观察、细菌分离培养、革兰氏染色镜检、生化鉴定、药敏试验、动物回归试验、16S rDNA与gyr B基因测序及系统分析进行鉴定。结果显示,本研究从发病草鱼体内分离到1株致病菌GZQG2019,分离菌在培养基中呈圆形、表面湿润光滑、边缘整齐半透明的灰白色菌落,菌落周围呈现β-溶血环;革兰氏镜检显示,分离菌呈两端钝圆短小阴性杆菌;16S rDNA、gyr B基因序列分析显示,分离菌与维氏气单胞菌聚为一支,同源性均在99%以上;药敏试验结果显示,在使用的20种抗菌药物中,该菌对四环素、丁胺卡那、多黏菌素B和头孢曲松等10种药物敏感,对苯唑西林、青霉素、阿莫西林和庆大霉素等8种药物中度敏感,对头孢氨苄、复方新诺明2种药物耐药;动物回归试验显示,该菌对健康草鱼具有强致病性;10种毒力基因扩增结果显示,分离菌携带气溶素、热不稳定性肠毒素、溶血素、核酶、丝氨酸蛋白酶、弹性蛋白酶和酯酶7种毒力基因。本试验成功分离到1株草鱼源维氏气单胞菌,具有较强毒力,且携带多种毒力因子;对四环素、丁胺卡那等药物敏感,对四环素、丁胺卡那等耐药,为维氏气单胞菌病临床用药提供参考依据。

9味中药及其组方对鱼源弗氏柠檬酸杆菌体外抑菌试验的研究

为筛选能有效抑制鱼源弗氏柠檬酸杆菌生长的单味中药及其组方,选取具有抑菌效果的9味中药,按常规方法制备水提取物,以单方或组方进行鱼源弗氏柠檬酸杆菌的体外抑菌试验。结果表明:9味中药及其组方对鱼源弗氏柠檬酸杆菌均有不同程度的抑菌效果,其中,在9种单味中药中,五倍子的抑菌效果最好,抑菌圈直径为18.20 mm,最低抑菌浓度(MIC)为62.50 mg·mL^-1,最低杀菌浓度(MIB)为125.00 mg·mL^-1;在中药组方中,以组方Ⅳ的抑菌效果最好,抑菌圈直径为14.37 mm, MIC值为125.00 mg·mL^-1, MIB值为500.00 mg·mL^-1。这一研究提示,单味中药五倍子和中药组方Ⅳ对鱼源弗氏柠檬酸杆菌具有良好的抑菌效果,可用于鱼类弗氏柠檬酸杆菌病的防治。

杀鲑气单胞菌对鲟的杂交致病性及病理变化分析

为初探虹鳟鱼源杀鲑气单胞菌对杂交鲟是否具有感染性及人工感染后的主要临床症状及病理变化。本研究使用虹鳟鱼源杀鲑气单胞菌对杂交鲟进行人工感染,通过对半数致死量的测定、临床症状观察、发病杂交鲟解剖学变化观察及组织病理切片观察(HE染色)来确定杀鲑气单胞菌对杂交鲟是否具有致病性及致死性。结果显示:虹鳟鱼源杀鲑气单胞菌对杂交鲟具有感染性且存在致死性,臀鳍注射半数致死量为7.9×10^(6)CFU/mL;杂交鲟体表黏液分泌量增多,腹壁有大量出血点及溃疡灶,体内多器官伴随有出血点,严重者有溃疡灶形成,病理切片观察发现,感染后杂交鲟的鳃、肌肉、脂肪、肠道和心脏等组织均有明显的病理变化,其中病理变化较明显的为鳃丝的扭曲脱落,肠绒毛的脱落及肝脏细胞的空泡化变性。结果表明,杀鲑气单胞菌能引起杂交鲟发病,且具有致死性,其主要临床症状与疖疮病相同。

鲤源杀鲑气单胞菌无色亚种的分离鉴定及毒力基因检测

为了解引起鲤鱼皮肤溃疡的病原分子分型特征及其毒力基因,从患溃疡症鲤鱼体内分离到1株致病性菌株GZGY2019,鉴定其为气单胞菌,并运用多位点序列分型(MLST)方法进行分类研究,利用PCR和测序方法分析6种毒力基因Aer、Ser、Alt、Lip、Act和Hly。通过对分离株的16S rDNA基因进行分析,确认其属于杀鲑气单胞菌。分离株对复方新诺明等9种抗菌药物耐药,毒力基因扩增结果显示:分离菌能检出气溶素基因(Aer)等6种毒力基因。基于气单胞菌6个管家基因分析,与MLST数据库中等位基因序列比对,发现其属于新的序列型(ST),隶属于杀鲑气单胞菌无色亚种。这一研究对发病鲤鱼的病因进行了准确诊断,为该病的防治与分子流行病学研究提供了依据。

机器学习在地震紧急预警系统震级预估中的应用

地震预警是地震减灾工作的重要途径,而震级预估是整个地震紧急预警系统中重要且较为困难的一个环节.目前,世界上多个国家和地区都已建立了各自的地震预警系统,并且形成了特征频率(τp和τc等)相关和特征振幅(Pd等)相关的两类震级紧急预警的方法,但各有局限性.本文在已有的方法和理论基础上,运用机器学习算法,将日本KIK和KNET台网从2015年至2017年所记录到的843条地震目录,55426条记录作为全数据集,设计、训练出一套用于常见震级范围的机器学习震级预估模型.与已有方法的预估结果相比,机器学习方法不仅使预估的整体误差和方差下降,同时多台联合评估单一地震事件的截面方差也更低.本研究的结果显示了机器学习算法在震级紧急预估问题上具有较广阔的应用前景,同时也为较为复杂的深度学习类算法框架下端到端模型提供了实践基础和研究可能.

基于H6蛋白禽流感抗体间接ELISA检测方法建立与应用

为临床H6亚型禽流感抗体检测提供技术支撑,通过克隆得到的H6亚型禽流感病毒H6基因并与原核表达载体pET-32α连接,经PCR、酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌进行诱导表达和Western blotting鉴定,以纯化的表达产物为包被抗原,通过反应条件优化,建立检测禽流感病毒H6抗体的间接ELISA方法并对临床鸡血清样本检测评价。结果表明:该方法最佳反应条件是,包被抗原浓度为10μg/mL,4℃过夜;5%脱脂奶粉37℃封闭2 h;血清稀释度为1∶20,37℃孵育30 min;酶标二抗稀释度为1∶5000,37℃作用30 min;显色时间为37℃10 min。该ELISA方法可特异性检测H6亚型禽流感抗体,阳性血清稀释至1∶320仍可检出,与其他禽病阳性血清均无交叉反应,检测变异系数均小于10%。以该ELISA方法检测2017年至2019年收集的1837份家禽临床血清样本,H6亚型禽流感抗体阳性率为10.45%。这些结果表明,建立的基于H6蛋白禽流感抗体间接ELISA检测方法,具有良好的特异性、敏感性、重复性和可靠性,能为H6亚型禽流感血清流行病学调查提供技术手段。

三种竹鼠源致病性细菌混合感染病例的组织病理学变化分析

实验旨在研究竹鼠混合感染致病性大肠杆菌、致病性棒状杆菌和致病性绿色气球菌所引起的组织病理学变化。通过剖检、组织切片、苏木素—伊红(H.E)染色及图像观察分析法观察混合感染3种致病性细菌的组织器官的病理及组织病理学变化。结果显示:患病竹鼠下牙脱落,被毛杂乱无光泽,后发现心包有严重无色透明液体、心脏质地柔软凹陷、可见淤血,肝脏表面光滑分布红色细血丝、有明显出血点,肺脏表面可见深红色斑块;脾脏颜色较为暗沉、表面不粗糙、边缘呈锯齿状、肾脏呈大理石色,表面凹凸不平等;心肌细胞胞质疏松淡染肥大细胞浸润;肝索结构不清,肝细胞淀粉样变,呈嗜酸性均质状汇管区周围胆管增生,炎性细胞浸润;脾小结数量减少,红髓淋巴细胞减少,并可见大面积淀粉样变,呈嗜酸性均质状,髓窦可见淤血及出血。肺脏肺泡壁明显增厚,肺泡出血;肾脏肾小管上皮细胞空泡变性,胞质内可见微小空泡肾小管扩张,形状不规则,肾小球内可见炎性细胞浸润,少量肾小球萎缩,肾小囊内充满嗜酸性蛋白液等病理变化。本研究对混合感染致病性大肠杆菌、致病性棒状杆菌和致病性绿色气球菌的竹鼠病例组织进行了组织病理学观察和分析,以期为竹鼠细菌病的研究提供病理学参考资料。

引起某蛋鸡场产蛋率下降的病原分离鉴定

贵州省某鸡场2019年11月以来,蛋鸡产蛋率不断下降,零星出现死亡,该实验室通过流行病学调查、临床症状和解剖观察、细菌培养鉴定和病毒PCR检测等方法,对该鸡场送检鸡只进行了实验室诊断与病原的分离鉴定。解剖主要病理变化:肝脏肿大,质地变脆,并伴有出血点,脾脏肿大,法氏囊透明化且内充满乳白色液体,盲肠端充气肿胀。细菌分离得到1株形态整体呈蜡滴状,为不透明有溶血环的白色菌落,经细菌菌落形态、革兰氏染色镜检、生化鉴定和16S rDNA PCR,鉴定为蜡样芽孢杆菌。病毒PCR检测未扩增出相应目的条带。可见,此次引起蛋鸡产蛋率降低及死亡的病原为蜡样芽孢杆菌,研究结果对蛋鸡产蛋率下降及死亡提供了新的数据支持。

基于RNA-seq技术鱼类转录组学研究的文献分析

近年来转录组测序技术即RNA-seq技术在鱼类研究中备受关注,为探究当前鱼类转录组领域研究热点,本文检索、处理分析了2010—2018年Web of Science核心合集数据库收录相关文献。结果发现:从2010—2018年共检索到有关鱼类转录组学研究论文687篇,论文发表数量快速上升;论文发表数量排名前三位的国家是中国、美国和德国,但中国发表的论文中心性偏低;鱼类转录组研究的主要内容是转录组注释、新转录本鉴定、转录后修饰(RNA剪接)、单核苷酸多态性鉴定和转录水平量化。这些文献分析结果可为今后鱼类转录组研究提供有益的参考。

猪蓝耳病与葡萄球菌病混合感染的诊断

为确诊某养猪场死亡病例的病因,采集病死猪内脏组织进行细菌分离鉴定和猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪蓝耳病病毒PCR检测。结果:(1)送检猪肝脏样本分离培养出呈金黄色的菌落,染色镜检可见菌体呈葡萄串状排列的革兰氏阳性球菌,经生化试验鉴定为金黄色葡萄球菌;(2)送检猪组织样本检出猪蓝耳病病毒特异性DNA片段,未检出猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒特异性DNA片段。综合诊断为猪蓝耳病病毒与金黄色葡萄球菌混合感染。

蛋鸡禽白血病的实验室诊断

对开阳县某蛋鸡场发生的疫病通过发病情况调查、剖检病变观察、细菌分离培养和相关病毒PCR检测。结果:疫病主要发生于160日龄以上鸡群,病变以肝脏和脾脏显著肿大为特征;细菌分离培养未见菌落生长; PCR检测可见禽白血病病毒特异性DNA片段,但未检出鸡马立克氏病病毒特异性DNA片段。综合诊断为禽白血病病毒感染。

水生动物维氏气单胞菌病概述

文章从维氏气单胞菌病的病原、临床症状、病理变化、诊断及防治方面进行概述,为该病的防治提供参考。

3种免疫增强剂对鲟鱼生长性能及血清生化指标的影响试验

为探究免疫增强剂在鲟鱼养殖中的应用效果,选取月龄、体重相近的鲟鱼200尾,按照试验设计分为4组,其中3个试验组分别添加胸腺肽、绿原酸、壳寡糖200 mg/kg于基础饲料中,对照组只饲喂基础饲料,分别于正试验开始后第14、28、42 d采集样品,测定鲟鱼生长性能及血清生化指标。结果:(1)与对照组相比,试验组增重率及特定生长率均不同程度提高。28 d时绿原酸组和壳寡糖组增重率及特定生长率均显著提高(P<0.05);42 d时胸腺肽组和绿原酸组增重率及特定生长率均显著提高(P<0.05),壳寡糖组增重率及特定生长率均极显著提高(P<0.01);28、42 d时壳寡糖组肝脏指数均显著降低(P<0.05)。(2)与对照组相比,14 d时试验组血清总蛋白、白蛋白、球蛋白含量极显著升高(P<0.01)。42 d时胸腺肽组球蛋白含量显著降低(P<0.05),绿原酸组和壳寡糖组血清尿酸、尿素氮、谷丙转氨酶、谷草转氨酶含量显著降低(P<0.05);14 d时胸腺肽组血清尿素氮含量显著降低(P<0.05),42 d时谷丙转氨酶含量显著升高(P<0.05)。结论:在基础饲料中分别添加胸腺肽、绿原酸、壳寡糖200 mg/kg均能促进鲟鱼生长,增加蛋白质合成速率,提高机体代谢水平,增强机体免疫能力;但长期使用胸腺肽可对肝脏造成一定损伤,表现为42 d时球蛋白含量显著降低,谷丙转氨酶显著升高。

黄土改性与机理研究

为解决黄土地区因黄土本身的易崩解和抗水性能差而无法满足各类水利工程建设的问题,采用G2固化剂对黄土进行改性,通过静水崩解与吸水率、无侧限抗压强度、抗冻融循环试验来研究固化剂对黄土的改性效果。结果表明,G2固化剂均能改善黄土的工程性质,黄土改性后强度指标和水稳性优于黄土本身;固化黄土的强度特性受龄期影响明显,随着龄期的增长,抗压强度相应提升;经固化剂改性后黄土的强度受吸水率影响,改性黄土的强度随吸水率增加而减小;G2改性黄土的软化系数在0.8以上,冻融循环30次后改性黄土仍具有较高的强度,试件的整体性良好。研究结果可为黄土地区渠道、土坝护坡、边坡等工程的加固改良提供依据和指导。

鹅大肠杆菌病的实验室诊断

为确诊某养鹅场雏鹅发病死亡的病因,采集4日龄发病雏鹅的肝脏组织,采用细菌分离鉴定和相关病毒核酸PCR检测方法进行病原学诊断。结果:(1)在肝脏样本中分离出细菌,经染色镜检、生化鉴定、动物感染试验,鉴定为致病性大肠杆菌;(2)鹅细小病毒PCR检测试剂盒检测未发现鹅细小病毒特异性DNA片段。综合诊断为鹅大肠杆菌病。

黄芪多糖对杂交鲟用嗜水气单胞菌灭活疫苗的影响

【目的】探究黄芪多糖对嗜水气单胞菌灭活疫苗在杂交鲟鱼上的应用效果,以期发掘黄芪多糖用作疫苗佐剂的应用潜力。【方法】选取健康杂交鲟鱼140尾,随机分为4组(对照组、疫苗组、黄芪多糖组和联用组)并做相应免疫处理,分别于第0、7、14、21和28天采集血液,进行抗氧化指标(超氧化物歧化酶(SOD))和免疫相关指标(溶菌酶(LYZ)、酸性磷酸酶(ACP)、免疫球蛋白M(IgM)及补体C3(C3))检测;免疫结束时进行攻毒试验,观察鲟鱼死亡情况及其免疫组织病理变化。【结果】第7、14、21和28天时,与对照组相比,联用组和疫苗组杂交鲟鱼血清SOD、LYZ、ACP活性及IgM、C3含量均显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),黄芪多糖组SOD、ACP活性及IgM、C3含量均显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),LYZ活性无显著差异(P>0.05);与疫苗组相比,黄芪多糖组血清LYZ、ACP活性均显著降低(P<0.05),SOD活性及IgM、C3含量均无显著差异(P>0.05);与黄芪多糖组或疫苗组相比,联用组血清SOD、LYZ活性及ACP含量均显著增加(P<0.05),IgM含量显著降低(P<0.05),C3含量无显著差异(P>0.05)。黄芪多糖与灭活疫苗联用能有效增强鲟鱼的抗病力,相对免疫保护率达100%,对鲟鱼肝脏、脾脏和肠道组织无明显病理损伤。【结论】黄芪多糖与杂交鲟用嗜水气单胞菌灭活疫苗联用时能有效提升疫苗的抗体效价,增强该灭活疫苗接种后的保护力,从而诱导杂交鲟鱼产生免疫应答,提高自身抗病力,为嗜水气单胞菌引起的鱼类疾病防控提供了理论参考。