TNF-α诱导人肝细胞系HepG2细胞释放HMGB1的研究

目的:观察小剂量TNF-α刺激下非坏死HepG2细胞是否存在HMGB1移位及释放。方法:以终浓度为25ng/ml的TNF-α作用HepG2,RAW264.7及HEK293细胞4、8、12、16、20小时和24小时,MTT法检测细胞存活率,Westernblot检测上清HMGB1含量,免疫荧光观察HMGB1移位,TUNEL法原位检测细胞凋亡。结果:TNF-α作用后24小时,HepG2,RAW264.7及HEK293细胞存活率分别为91.99%±0.30%,91.28%±0.56%和90.85%±0.72%。TNF-α作用12～24小时,HepG2和RAW264.7细胞培养上清中可以检测到明显的HMGB1,与对照组及TNF-α作用的HEK293组比较差别有统计学意义(P<0.01)。HMGB1的释放伴随着其从细胞核向胞浆的移位。TNF-α作用后24小时各组细胞凋亡率均低于5.0%,统计学无差异。结论:经TNF-α诱导,活化状态的HepG2细胞可发生HMGB1的移位及释放。