川芎提取液制备工艺的优化及免疫调节作用研究

目的优化川芎提取液的制备工艺,研究川芎提取液对小鼠的安全性和对免疫抑制小鼠的免疫活性。方法首先,采用L_(9)(3~4)正交试验法,以阿魏酸和川芎多糖的转移率为考察指标,对提取时间、提取次数、加水量等3个因素进行考察,优化川芎的提取工艺。进一步,将川芎提取液浓缩并分成两部分,一部分浓缩,一部分浓缩后醇沉,合并浓缩液与醇沉物,以外观性状和口感为指标,比较确定川芎浓缩液和醇沉液的比例,制备川芎提取液。随后,采用腹腔注射环磷酰胺制备小鼠免疫抑制模型,灌胃给予小鼠川芎提取液低、中、高剂量,其浓度分别为190.0、380.0、570.0 mg/kg,连续灌胃32天后取材,测定小鼠脏器指数;酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠免疫球蛋白G(immunoglobin G,IgG)、免疫球蛋白M(immunoglobin M,IgM)、补体C3(complement 3,C3)、补体C4(complement 4,C4)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平的变化;MTT法检测脾淋巴细胞的转化率;LDH法测自然杀伤细胞(natural killer cell,NK)活性。结果阿魏酸和川芎多糖的最佳提取工艺参数为提取2次,第一次提取液料比为10∶1,提取时间为4小时;第二次提取液料比为5∶1,提取时间为2小时。川芎水提浓缩液与65%水提醇沉物配比为3∶2时,制备的川芎提取液溶液澄清度高、口感好。与模型组比较,胸腺指数和脾脏指数均显著上升(P<0.01,P<0.001),川芎提取液各剂量组IgG、IgM、C3、C4含量均显著升高(P<0.001,P<0.01,P<0.05),川芎高剂量组IL-6、IL-8、TNF-α含量均显著降低(P<0.001,P<0.01,P<0.05),川芎中剂量组IL-6、IL-8含量均显著降低(P<0.001),川芎低剂量组IL-8含量显著降低(P<0.01),川芎提取液各剂量组均可显著提高免疫低下动物NK细胞活性和脾淋巴细胞转化率(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。结论优化的川芎提取液制备工艺可行、简便、稳定、澄清度高、口感好、安全性高,对环磷酰胺致免疫抑制小鼠具有免疫增强作用。