小鼠小脑区域性特异表达基因的分离和筛选——乳化酚递减杂交

哺乳类脑组织有着极其复杂和众多的基因表达,许多遗传性神经退行性疾病起源于不同的脑功能区域的基因表达缺陷。分离和筛选小脑特异表达基因是认识小脑疾病的重要途径。本文采用递减杂交法,大脑前皮层和肝组织单链cDNA为驱动物与小脑双链cDNA进行乳化酚杂交,经过重组噬菌体λgt11 DNA连接选择,特异性地克隆那些仅在小脑中优势表达的cDNA。杂交后的小脑eDNA文库容量仅是起始文库容量的0.049%(2.5×10~3/5.15×10~6)。用小脑和肝cDNA探针与PERT cDNA进行克隆杂交和斑点印迹杂交,结果显示绝大多数克隆仅与小脑cDHA杂交阳性。选择10个克隆cDNA与小脑等5种组织mRNA做Northern杂交,有2个小脑特异表达克隆,6个小脑优势表达克隆。对其中PC7和PD8克隆cDNA做部分DNA序列分析,它们是以前未报道过的新基因。

微量小鼠小脑粒细胞cDNA文库构建和快速鉴定

应用一步RNA提取法,改进经典cDNA文库构建程序,并用PCR技术鉴定cDNA文库的有效容量和插入cDNA的大小。从200mg小鼠小脑粒细胞中建立起容量为7×10~6个重组子的cDNA文库,为进一步研究小鼠缺陷株WEVER型的粒细胞丢失原因和基因表达缺陷提供正常小鼠粒细胞的cDNA文库。

原质蛋白基因的群体多态研究

GSS病是致死型常染色体显性遗传病,Prp基因缺陷是该病发生的可能病因。PrpcDNA的多态性很低,在连锁分析时意义不大。本文应用Southern印迹杂交和两点连锁分析从Prp基因的8个亚克隆中筛选出PRB 6.2克隆,它在受检群体中有较高的多态性。D20S16探针与Prp基因紧密连锁(=0),也具有高频率多态,这些探针将为检出和诊断GSS病提供有用的分子标记。