O-GlcNAc对上唇发育过程中上皮间叶转化影响的研究

目的:研究氧联乙酰葡萄糖胺(O-linked N-acetylglucosamine,O-GlcNAc)在上唇发育过程中对面突间上皮间叶转化的影响。方法:通过在鸡胚上唇植入浸有O-GlcNAc促进剂OGT(O-GlcNAc transferase)、OGlcNAc的抑制酶OGA(O-GlcNAcase)、以及OGA的抑制剂STZ(streptozoticin)的琼脂糖微球,构建O-GlcNAc高表达与低表达以及反向高表达实验组并继续孵育24h,茜素红/阿利新蓝骨组织染色观察胚胎骨、软骨发生的变化,免疫组化染色法检测具有间叶组织表达特异性的fibronectin和上皮表达特异性的p63的表达状态。结果:高表达O-GlcNAc实验组OGT和STZ中,发现胚胎上唇出现了骨缺损,且P63、fibronectin持续高表达,上皮、间叶组织保持连续性,凋亡出现延迟,上皮间叶转化出现障碍。正常对照测与低表达OGA组在上皮融合过程中P63表达减弱,fibronectin在上皮中出现表达,上皮层出现断裂,表明上皮间叶转化的正常进行。结论:O-GlcNAc过表达对于上唇形成过程中上皮间叶转化具有负面作用,将影响上唇的正常发育并可能导致唇裂的发生。

O-GlcNAc通过抑制Wnt信号通路影响上唇发育的实验研究

目的探讨氧联乙酰葡萄糖胺(O-linked N-acetylglucosamine,O-Glc NAc)影响上唇发育时上皮层的消失过程中,Wnt信号通路在其中发挥的作用。方法通过在鸡胚唇部植入浸有O-GlcNAc促进剂氧联乙酰葡萄糖胺转移酶(O-GlcNAc transferase,OGT)、O-GlcNAc的抑制酶氧联乙酰葡萄糖胺水解酶(O-Glc NAcase,OGA)以及OGA的抑制剂链脲佐菌素(streptozoticin,SZT)的琼脂糖微球,构建O-Glc NAc高表达与低表达以及反向高表达实验组,并继续孵育24 h,茜素红—阿利新蓝骨组织染色观察胚胎骨、软骨发生的变化,TUNEL法检测细胞凋亡情况,免疫组化染色法检测Wnt信号系包括GSK-3β、β-catenin在内的一系列信号因子。结果 O-GlcNAc过表达组OGT和STZ中,上皮层的消失出现延迟,骨染色发现胚胎唇部出现骨缺损,TUNEL检测与正常组相比未发现明显细胞凋亡,但GSK-3β在细胞质内表达增加,β-catenin细胞核内表达减少;正常侧及O-GlcNAc低表达组OGA中上唇发育未受影响。结论 O-GlcNAc过表达时引起上皮层的消失发生延迟,这并非由细胞凋亡减少引起,而是可能通过抑制Wnt信号通路,导致GSK-3β、β-catenin在内的相关信号因子变化,这些变化将影响上唇发育并可能导致唇腭裂的发生。

桥连上皮带在唇腭部发育过程中的作用及意义探讨

目的:研究上颌突、中鼻突之间的桥连上皮带在唇腭部发育过程中的作用。方法:将受精的白来航鸡蛋孵化到适当的H-H(hamburger and hamilton)阶段,分别进行:组织学切片、胚胎扫描电镜摄片、Brd U细胞增殖和TUNEL细胞凋亡实验。结果:鸡胚发育的H-H 24阶段,上颌突、中鼻突以及侧鼻突之间的上皮层相互靠近;H-H 26、27阶段,融合之前相邻突起之间的上皮细胞出现丝状伪足化,开始形成两两突起之间的桥连上皮带,之后桥连上皮带内细胞增殖减少,并出现了大量圆形凋亡细胞;H-H 28阶段:桥连上皮带在相邻突起融合过程中逐渐凋亡,相邻突起最终完全融合。结论:上颌突、中鼻突之间的桥连上皮带通过形成丝状伪足相互连接,桥连上皮带内细胞增殖减少、凋亡增加,这一系列变化在胚胎唇腭部的发育过程中起到了重要的作用。

抑制Wnt/β-catenin信号通路对上唇发育的影响

目的:探讨通过抑制Wnt/β-catenin信号表达对上唇发育的影响。方法:通过在H-H22阶段的鸡胚上颌突植入浸有XAV939、DMSO的微珠以及只作切口不植入微珠,构建实验组、对照组和假实验组,并继续孵育至H-H38阶段,体视显微镜以及mirco-CT观察并记录胚胎上唇的发育情况。结果:Wnt/β-catenin信号受抑制后,H-H28阶段的鸡胚植入侧上颌突与中鼻突和侧鼻突的融合延迟,H-H38阶段的鸡胚植入侧的上唇出现发育延缓,面中线偏向植入侧;实验组的正常侧、对照组以及假实验组的双侧上唇发育未受影响。结论:在鸡胚上唇发育过程中,通过抑制Wnt/β-catenin信号表达,可延迟上颌突和中鼻突的融合,使上唇发育延迟,进而导致上颌骨发育不足或畸形。