农杆菌介导加幼苗直接形成将Bt-cry1 A(b)基因转入印度棉花(英文)

利用农杆菌介导法用Bt cry1A(b)基因对印度栽培棉种进行非基因依赖型遗传转化和植株再生。将印度栽培棉品种Anjali(LRK 516)和LRA 5166与携带Bt cry1A(b)+nptII基因的根癌农杆菌LBA4404共培养,在含100μg·ml 1卡那霉素的筛选培养基上获得了可能的转基因直接再生苗。细菌浓度、共培养时间、感染组织的阶段和大小、标记筛选浓度、培养基成分和激素等都影响转化效果和效率。对程序进行了优化。经PCR、Southern杂交、ELISA等方法分别检测,证实了Bt cry基因的插入和表达。Southern分析表明转化植株存在3～5个基因拷贝,但CRY蛋白表达量非常低(为叶蛋白的0.003%～0.004%)且生化抗虫性很弱或基本不影响鳞翅目昆虫。尽管如此,该方案仍适用于其它CRY基因或重要经济型基因进行非基因依赖型遗传转化和再生,产生转基因棉花。