利用精密作图和DNA纤维荧光原位杂交把灯笼椒抗烟草花叶病毒属病毒L^3基因定位于含高度重复序列的类抗病基因簇的400kb区

我们用辣椒(Capsicum annuum)栽培种(已导入了灯笼椒Capsicum chinenseL3基因)的种内F2代群体(2016株)和种间F2代群体(3391株)(由灯笼椒与Capsicum frutescence杂交产生)对灯笼椒抗烟草花叶病毒属病毒的L3基因进行定位。通过L3基因抗性紧密相关的AFLP分子标记的BAC文库的分析,揭示出番茄抗病同源基因I2的存在。通过简并PCR技术,对来自35株不同辣椒的同源基因I2的部分或全部编码序列进行克隆,且在种间组合中产生了17个遗传标记。图谱显示:L3基因位于I2同源基因标记IH1-04和BAC-end标记189D23M中间,L3基因定位于包含两个不同BAC重叠群的区内,这两个不同的BAC重叠群分别由4个和1个无性系组成。DNA纤维荧光原位杂交揭示这两个重叠群被约30kb隔开。DNA纤维荧光原位杂交结果和BAC无性系的Southern杂交表明在高度重复序列中富集包含L3基因位点的区。Southern杂交表明两个BAC重叠群包含多于十个的I2同源基因拷贝体。相反,对于种间F2代群体,,重组后代没有结合位点,在种内F2代群体中,该结合位点存在于两个不同的BAC重叠群内,这两个不同的BAC重叠群分别由7个和2个无性系组成。而且,两个群体间结合位点分配的不同表明在含有L基因位点的区域连锁不平衡。

利用精密作图和DNA纤维荧光原位杂交把灯笼椒抗烟草花叶病毒属病毒L^3基因定位于含高度重复序列的类抗病基因簇的400Kb区(连载)

结果 L^3基因的初步定位 我们首先利用NK群体定位了L^3基因，NK群体是辣椒栽培品种（C．annuumcultivar）和从灯笼椒（C．chinense）PI152225导入的含有L^3基因的衍生品种种内杂交的F2代群体。对抗PMMoV及敏感的F2后代的大量DNA进行三轮AFLP分析发现了应用7个组合的选择性PCR引物扩增到8个多态性DNA片段。从其中得到了两个SCAR标记。