哈氏并殖吸虫ITS2基因和CO1基因序列分析

目的进一步确认浙江宁海哈氏并殖吸虫(Paragonimusharinasutai)分类地位及其遗传变异。方法从浙江华溪蟹中分离获得哈氏并殖吸虫囊蚴,单个囊蚴经PCR扩增,进行核糖体DNA第二间区(ITS2)基因和线粒体细胞色素C氧化酶亚单位(CO1)基因序列分析;ITS2-PCR扩增产物经BsaHI、StuI酶切。结果ITS2-PCR扩增产物经BsaHI和StuI酶切(PCR-RFLP),琼脂糖凝胶电泳分离图谱基本一致。浙江宁海哈氏并殖吸虫ITS2基因有366碱基对,与泰国种群(AF159609)核酸同源性为95.6%,CO1基因有390碱基对,与泰国种群(AF159600)核酸同源性为89.5%。结论本研究从分子生物学角度进一步确认浙江宁海哈氏并殖吸虫分类地位,但与泰国种群(Nakorn-nayok省)相比较,存在较大变异。

浙江宁海哈氏并殖吸虫的形态学和分子生物学

目的进一步确认浙江宁海哈氏并殖吸虫分类地位。方法1.形态学观察:浙江华溪蟹采自浙江宁海西溪冷风洞。分离囊蚴感染家猫,成虫布氏液固定,洋红染色,制成整体封片标本作形态观察。2.分子生物学研究:单个囊蚴PCR扩增,进行ITS2基因和CO1基因序列分析,并BsaHI、StuI酶切。结果成虫长叶型,宽长之比为1:2.838±0.228。腹吸盘位于虫体前34.61%,腹吸盘稍大于口吸盘,二吸盘横径之比为1.26±0.116:1,卵巢分4～6支,每支有2～3支指状分支。睾丸分4～5叶,中心块明显,每叶具指状或乳头状突起,排泄囊达肠支分叉处。体棘混生型。囊蚴呈微红色球状,大小为(525.16±38.61)×(500.19±31.7l)μm。与泰国标本相比,我国发现的哈氏并殖吸虫的成虫形态稍有变异。分子生物学初步研究表明,PCR扩增产物经BsaHI和StuI酶切(PCR-RFLP),琼脂糖凝胶电泳分离图谱完全一致。浙江宁海哈氏并殖吸虫ITS2基因有366碱基对,与泰国种群(AF159609)同源性为95.6%,CO1基因有390碱基对,与泰国种群(AF159600)同源性为89.7%。结论本研究从形态学和分子生物学进一步确认...