不同猪源受体菌表达猪流行性腹泻病毒保护性抗原S1诱导免疫应答的比较研究

旨在比较猪源副干酪乳酪杆菌(Lacticaseibacillus paracasei)、罗伊氏黏液乳杆菌(Limosilactobacillus reuteri)、约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)作为口服疫苗载体,表达外源蛋白刺激仔猪产生免疫能力的强弱,以期选取合适乳酸菌作为受体菌载体。本研究首先体外鉴定表达PEDV S1蛋白的重组猪源副干酪乳酪杆菌(pPG-T7g10-S1/L.paracasei 27-2)、猪源罗伊氏黏液乳杆菌(pPG-T7g10-S1/L.reuteri J31)、猪源约氏乳酸杆菌(pPG-T7g10-S1/L.johnsonii 6332)的耐酸耐胆盐能力,考察3株重组菌的抗逆性。结果表明,3株重组菌均能够耐受酸和胆盐环境,且与其野生型菌株没有显著差异。接下来为比较3株重组菌的免疫效果,口服免疫初生仔猪后,利用间接ELISA和中和试验检测仔猪产生的特异性抗体水平及其中和活性;并测定免疫后仔猪血清和肠黏膜中各细胞因子水平。结果显示,口服免疫后,与对照组相比,3株免疫组仔猪血清IgG抗体和鼻拭子、肛拭子、肠黏液中SIgA抗体水平均显著升高,且可持续至第28天左右,其中pPG-T7g10-S1/L.paracasei 27-2组诱导产生的抗体水平显著高于其他两组免疫组(P<0.05);仔猪产生特异性的IgG和SIgA对PEDV均具有中和活性。仔猪血清中细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10水平和对照组相比显著升高(P<0.05),但3株重组菌组间细胞因子水平未见明显差异;仔猪空肠黏膜中细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-17、IL-21、TGF-β、APRIL和BALL水平与对照组相比有所升高,且pPG-T7g10-S1/L.paracasei 27-2组IL-4、IL-5、IL-6、TGF-β、IL-17、IL-21和BALL相比其他组显著升高(P<0.05)。综上所述,本研究分别将质粒组成型表达PEDV主要保护性抗原S1的重组猪源副干酪乳酪杆菌、猪源罗伊氏黏液乳杆菌和猪源约氏乳酸杆菌口服免疫仔猪,结果显示能够刺激机体产生针对PEDV的黏膜免疫、体液免疫和细胞免疫,且相较于其他2株重组菌,重组猪源副干酪乳酪杆菌pPG-T7g10-S1/L.paracasei 27-2的口服免疫效果最好。该试验结果为构建更为有效的乳酸菌口服疫苗提供了科学数据。

肠道菌群介导次级胆汁酸及其受体调节肠黏膜免疫机制的研究进展

胆汁酸是一种胆固醇衍生物,对提高每日膳食中脂肪的消化与吸收率具有显著功效。在肝内,细胞利用胆固醇形成初级胆汁酸,初级胆汁酸在肠道菌群产生的蛋白酶的影响下产生次级胆汁酸,极大地扩大了肠道环境的分子多样性。目前最常见的次级胆汁酸受体为跨膜G蛋白胆汁酸偶联受体-5(GPBAR1,也被称为TGR5)和核受体法尼类X受体(FXR),在调节机体健康中起着多效性作用,特别是可以维持肠道菌群稳态和黏膜免疫系统平衡。本综述讨论了胆汁酸与肠道菌群的关系、次级胆汁酸的代谢以及次级胆汁酸及其受体在肠道免疫系统中的不同作用机制,可为肠道菌群在动物肠道疾病的防治以及相关研究等方面提供理论基础。

猪流行性腹泻病毒Nsp6蛋白的分段表达及多克隆抗体制备

猪流行性腹泻病毒(PEDV)的非结构蛋白Nsp6在诱导宿主细胞自噬中起着重要作用。为进一步确定Nsp6蛋白诱导细胞自噬的关键功能域,本研究利用RT-PCR扩增技术获得了Nsp6及其3个分段基因。首先构建了重组原核表达质粒pSUMO-Nsp6,并转化至大肠杆菌Rosetta感受态中,经IPTG诱导并纯化后,所得蛋白用于小鼠免疫,制备抗Nsp6蛋白的多克隆抗体。再将Nsp6及其3个分段基因分别构建至真核表达载体pCMV-HA,并将其转染至IPEC-J2细胞进行真核表达,通过Western blot和双荧光标记法来确定蛋白表达情况。结果:Nsp6蛋白在Rosetta中成功表达,并通过免疫小鼠获得了效价为1∶10240的多克隆抗体,该抗体具有与PEDV和Nsp6蛋白特异性结合的能力;免疫荧光及Western blot结果表明,Nsp-6及其截短基因在IPEC-J2细胞中成功表达,且与制备的Nsp6多克隆抗体发生特异性结合。综上,本研究原核表达了Nsp6蛋白并制备了相应的特异性抗体,验证了Nsp6及其分段基因的在细胞中的真核表达,为进一步研究Nsp6蛋白的特性和功能奠定了基础。

老年人肌少症患病情况调查及其与老年衰弱综合征的相关性分析

目的调查成都市成华区某社区老年人肌少症患病情况并分析其与老年衰弱综合征的关系。方法选取成都市成华区某社区586例老年人为研究对象,对其进行老年综合评估,包括一般资料调查、人体测量(身高、体质量、握力、步速、骨骼肌等)和衰弱筛查量表调查。评估肌少症及老年衰弱综合征发生情况,分析肌少症与老年衰弱综合征的关系。结果83例被诊断为肌少症,肌少症患病率为14.98%。肌少症组与正常组的性别、受教育程度、吸烟、饮酒及基础疾病情况比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。与正常组相比,肌少症组年龄60~74岁者比率更低,75~84岁及≥85岁者比率更高,老年衰弱综合征发生率更高,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常组比较,肌少症组的握力、步速、四肢骨骼肌量及四肢骨骼肌指数(ASMI)更低,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素分析显示,年龄、体质量指数(BMI)、老年衰弱综合征均是肌少症的影响因素(P<0.05)。结论成都市成华区某社区老年人肌少症的患病率较高,肌少症与老年衰弱综合征的发生密切相关。

大山楂颗粒质量标准提升研究

目的提升大山楂颗粒的质量标准。方法采用薄层色谱(TLC)法对样品中山楂进行定性鉴别;采用紫外-可见分光光度(UV)法在500 nm波长处测定样品中金丝桃苷的含量。结果山楂的TLC图特征斑点显色清晰,分离度好,且阴性对照无干扰。金丝桃苷质量浓度在0.0049~0.0490 mg/mL范围内与吸光度线性关系良好(R^(2)=0.9997,n=6);精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%;平均加样回收率为100.10%,RSD为0.64%(n=6)。样品中金丝桃苷平均含量为每袋38.26 mg。结论所建立的方法操作简便,结果准确可靠,可用于大山楂颗粒的质量控制。

脑卒中患者衰弱评估工具的范围综述

目的对现有脑卒中患者衰弱评估工具进行范围综述,为脑卒中患者衰弱评估工具的选择提供参考。方法系统化检索PubMed、Web of Science、EMbase、SinoMed、万方、维普、知网数据库,检索时间为建库至2023年5月,筛选符合研究目的和研究问题的文献,并提取每篇文献的基本信息,包括第一作者、发表年份、发表国家、研究设计类型、评估工具名称、量表维度、条目数、评估时间等。结果本研究共检索出1729篇文献,经多重筛选后最终纳入22篇文献(共包含8种衰弱评估工具)。分析结果显示,8种衰弱评估工具的评估指标、评估时间和评估方法等各不相同,且各有优缺点,其中衰弱指数是最常用的脑卒中患者衰弱评估工具。选择有效的衰弱评估工具对脑卒中患者进行衰弱筛查,对加强卒中前风险分层和改善卒中后结局至关重要。结论不同衰弱评估工具之间差异较大,且现有评估工具在衡量脑卒中患者衰弱方面均存在局限性,需结合临床医生的经验和判断进行综合评估。未来的研究需进一步深入探寻和开发新的衰弱评估工具,以更好地指导脑卒中患者的康复治疗和管理。

长沙市土壤重金属污染特征及其生态与健康风险评估

为深入了解长沙市土壤重金属污染情况,对研究区内287个土壤采样点的5种重金属(Cd、Hg、As、Pb和Cr)污染特征进行分析,并采用潜在生态风险指数法对潜在生态风险进行评估,运用人体健康风险评价模型对人体健康风险进行评估。结果表明,研究区内,除Cd外,其余4种重金属的含量整体不高;各重金属的生态风险排序为Cd>Hg>As>Pb>Cr,其中Cd具有极强的潜在生态风险,5种重金属综合潜在生态风险处于强的水平;5种土壤重金属对成人产生较低的非致癌风险,对儿童会产生一定的非致癌风险。经暴露途径对比,土壤重金属主要通过经口摄入途径对成人和儿童产生非致癌风险。

雌激素受体相关的乳腺癌复发骨转移差异表达基因的生物信息学分析

目的分析与雌激素受体表达有关的乳腺癌复发骨转移差异表达基因,研究其基因功能集富集差异,及其表达水平与雌激素受体表达水平、复发骨转移情况的关联,促进对乳腺癌复发骨转移的了解。方法利用GEO数据库中GSE2034数据集,分析雌激素受体表达与乳腺癌复发骨转移的关联,利用R软件、GSEA软件等分析获得雌激素受体表达相关的差异表达基因,并分析其与雌激素受体表达情况和乳腺癌复发骨转移情况的相关性。结果雌激素受体的表达与乳腺癌复发骨转移显著有关,并与骨组织代谢有关的基因功能集相关。骨组织代谢相关基因SFRP1、TNFAIP3和NEK1与雌激素受体表达水平、乳腺癌骨复发转移相关。结论雌激素受体的表达水平与乳腺癌复发骨转移有关,可能通过调控骨组织代谢相关基因的表达参与乳腺癌复发骨转移。

肠道菌群抗病毒机制研究进展

近年来,由于对肠道中菌群的研究不断深化,同时对肠道菌群和机体健康的关系也有了更加清晰的认识,发现肠道菌群对病毒的感染有着双重调节的作用。肠道菌群可以通过保护肠黏膜屏障以及直接与病毒结合进而中和病毒或者阻止病毒对细胞黏附的直接作用抑制病毒感染,或通过对机体免疫系统建立和发育产生影响的间接方式来抑制病毒的入侵以及分泌具有抗病毒作用的代谢产物来发挥抗病毒作用;此外,益生菌在疾病治疗中的作用也越来越突出,有望从益生菌入手解决当前治疗病毒性疾病的弊端。本文着重对近年来肠道菌群抵抗病毒感染的相关机制研究进展进行综述,并对此方向相关问题及进一步的相关研究进行展望。

猪流行性腹泻病毒重组酶聚合酶扩增快速诊断方法的建立和应用

旨在建立一种针对猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)的敏感性高、特异性强的快速临床诊断方法。以猪流行性腹泻病毒cDNA为模板,在重组酶和聚合酶的共同作用下实现对目的基因的扩增,本研究设计了用于重组酶聚合酶扩增的引物,优化了重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)反应体系,检测了反应的特异性和敏感性,确定了反应的最佳温度和时间,通过结合琼脂糖凝胶电泳和侧流层析试纸条的方法进行分析和鉴定。试验结果显示反应的最佳温度和时间为30℃、20 min,反应可以检测到的最低质粒拷贝数为102 copies·μL^(-1),且在对猪的丁型冠状病毒、传染性胃肠炎病毒、轮状病毒和圆环病毒2型的检测中具有良好的特异性。综上所述,通过对RPA反应条件的摸索与优化,成功建立了猪流行性腹泻病毒重组酶聚合酶扩增结合琼脂糖凝胶电泳(Basic RPA)和侧流层析试纸条(LF-RPA)的检测方法,两种方法相比较于RT-PCR,有更短的检测时间且具有更高的敏感性,对仪器、场地和检测环境的要求更低,为今后PEDV的临床诊断及快速检测提供了更多的选择和更有效的技术支持。

不同组成型启动子对乳酸菌表达系统外源基因表达影响的比较

【目的】构建不同组成型启动子的乳酸菌表达载体系统,评价不同启动子驱动外源基因表达的活性,筛选出强表达的启动子,为后续研究乳酸菌作为活菌载体表达外源抗原或功能性蛋白提供理论依据。【方法】以大肠杆菌-乳酸菌穿梭载体pPG为骨架,将表达载体中启动子序列分别替换为组成型强启动子Pldh、PHH和Phce,利用PCR方法扩增报告基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和氨苄青霉素抗性基因(Ampr),并在下游多克隆位点中分别插入荧光素酶(LUC)、EGFP和Ampr报告基因,构建9种乳酸菌表达质粒,电转入副干酪乳杆菌HLJ-27感受态细胞,筛选获得9株重组乳酸菌。通过实时荧光定量PCR检测报告基因在重组菌中的mRNA转录水平,利用Western blotting和间接ELISA检测蛋白的表达量,并检测表达蛋白的活性,以评估3个启动子的活性强弱。【结果】PCR成功扩增出大小约720 bp的EGFP基因和850 bp的Ampr基因。Western blotting结果显示,在9株重组乳酸菌中,分别成功表达出了58 ku的LUC蛋白、26 ku的EGFP蛋白和28 ku的Ampr蛋白。实时荧光定量PCR和间接ELISA检测结果显示,启动子Pldh启动外源基因转录水平和驱动外源蛋白表达水平均显著高于启动子PHH和Phce(P<0.05;P<0.01)。报告基因检测结果显示,启动子Pldh驱动LUC、EGFP和Ampr外源蛋白的活性显著高于启动子PHH和Phce(P<0.05;P<0.01)。【结论】本研究成功构建了3种启动子报告基因表达系统,确定了3种启动子活性强弱依次为Pldh、PHH和Phce,探究出一种启动子活性筛选的优势筛选系统——Ampr报告系统,为高表达乳酸菌载体系统的建立提供了必要的依据。

青海地区藏族、汉族毒性弥漫性甲状腺肿与巨噬细胞移动抑制因子多态性

目的分析青海地区藏族、汉族毒性弥漫性甲状腺肿(Graves disease,GD)患者与健康者血清巨噬细胞移动抑制因子基因(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)rs755622、rs1007888、rs2096525位点基因多态性,探讨其与青海藏族、汉族GD发病的关联性。方法本研究设GD组(汉族60例,藏族60例)、对照组(汉族60例,藏族60例),应用SNaPshot法测定MIF基因多态性。结果藏族、汉族GD组及对照组均符合Hardy-Weinberg平衡检验,提示样本具有良好群体代表性。藏族GD组、藏族对照组、汉族GD组、汉族对照组四组MIF-rs755622位点基因型(GG、GC、CC)、rs1007888位点基因型(GG、GA、AA)、rs2096525位点基因型(TT、TC、CC)频率的差异均无统计学意义;各位点等位基因(G/C、G/A、T/C)差异均无统计学意义。结论MIF-rs755622位点GC单核苷酸多态性、rs1007888位点GA单核苷酸多态性、rs2096525位点TC单核苷酸多态性均与青海地区藏族、汉族GD发病无关联,该基因不是青海地区藏族、汉族GD发病的易感候选基因。

准谐振改进型SEPIC变换器建模与分析

凭借高电压增益及低电压应力的特点,改进型SEPIC变换器广泛地应用于光伏、不间断电源等领域。同时由于其具有良好的软开关特性,可应用于高频场合,以提升功率密度。为了拓宽负载变化范围,改善动态响应,其数学模型的建立至关重要。采用广义状态空间平均法,对基于开关电感的准谐振改进型SEPIC变换器进行建模,建立其对应的小信号模型,并得到系统输出的传递函数。使用K-factor的方法设计补偿器,优化系统的动态性能,设计恒流输出的数字控制实现方法,并通过实验进行了验证。

长沙市声环境质量分析及噪声污染防治对策研究

基于2021年长沙市声环境质量监测数据,分析长沙市声环境质量,结果表明区域噪声昼间平均等效声级为54.3dB(A),处于“较好”水平;道路交通噪声昼间平均等效声级为68.6 dB(A),处于“较好”水平;功能区昼、夜间噪声达标率分别为100%、73.8%,噪声高值时段主要分布在22~23时以及5~6时。通过调查研究,分析噪声污染原因,从完善城市规划、道路交通、监管执法、市民环保意识等方面提出噪声污染防治措施。

耦合RS与GIS技术的长沙市“十四五”声环境监测点位优化调整研究

随着长沙市快速发展,其城市规模、功能区布局、城市路网、人口数量等发生了重大变化,原有城市声环境质量监测点位代表性已明显不足,亟需优化与调整。以声环境质量监测点位现状为基础,依据布设规范和城市发展现状等资料,对长沙市声环境质量监测点位进行优化调整,同时利用GIS和高分辨率遥感影像,提高了布点工作效率,增强了点位的规范性、代表性和可行性。优化调整后,监测点位基本覆盖城市建成区,声环境监测网络更加科学合理,能全面、客观、准确地反映声环境质量状况。

影响东洞庭湖浮游植物群落分布的环境因子分析

为了解东洞庭湖浮游植物群落结构特征及其富营养化现状,于2020年5月、6月及8—12月对东洞庭湖7个采样点的水质情况和浮游植物群落情况进行调查.浮游植物共检出8门76种,主要由蓝藻门、绿藻门、硅藻门植物组成.再运用主成分分析(PCA)方法对调查范围内所有采样点的主要浮游植物与环境因子之间的关系进行研究,结果表明:总氮、流速、温度和pH值是影响东洞庭湖浮游植物群落分布的主要环境因子.

强化家庭医生团队模式在社区2型糖尿病患者管理中的应用研究

目的:研究在社区2型糖尿病患者的管理中应用强化家庭医生团队模式的价值。方法:选取2020年1—12月广东省中山市南朗街道社区卫生服务中心收治的80例2型糖尿病患者作为研究对象,根据随机数字表法分为研究组与对照组,各40例。对照组采用常规健康管理,研究组采用强化家庭医生团队模式。比较两组疾病知识知晓情况,遵医行为依从性,体重指数(BMI),血糖[空腹血糖(FBG)、餐后2 h血糖(2 hPBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)],血脂[总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)],护理满意度。结果:研究组并发症、发病因素、饮食控制原则、防治措施评分均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。研究组按时用药、控制饮食、合理锻炼、血糖监测评分均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。管理后,研究组TG、TC、BMI、HbA1c、FBG、2 hPBG水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。研究组满意度高于对照组,差异有统计学意义(P=0.011)。结论:社区2型糖尿病患者管理中应用强化家庭医生团队模式的效果显著,可提高患者遵医行为依从性、糖尿病知识知晓率及满意度,改善血糖、BMI、血脂指标。

桂枝茯苓胶囊联合不同剂量米非司酮治疗子宫肌瘤临床观察

目的探讨桂枝茯苓胶囊联合不同剂量米非司酮治疗子宫肌瘤的疗效。方法选取医院2017年3月至2018年1月收治的子宫肌瘤患者94例,按入院顺序单双号分为A组和B组,各47例。所有患者均服用桂枝茯苓胶囊,A组加用12. 50 mg/d米非司酮,B组加用25. 00 mg/d米非司酮。结果经治疗后两组子宫体积和肌瘤体积均较治疗前明显缩小(P <0. 05),血清雌激素(E2)、卵泡刺激素(FSH)、孕酮(P)及黄体生成素(LH)水平均较治疗前显著降低(P <0. 05),月经周期较治疗前明显缩短(P <0. 05),月经量较治疗前明显减少(P <0. 05),但组间比较均无显著差异(P> 0. 05); A组乳房胀痛、乏力、头晕、食欲减退、消化道反应、恶心等不良反应发生率均低于B组(P <0. 05)。结论桂枝茯苓胶囊联合米非司酮(12. 50 mg/d或25. 00 mg/d)治疗子宫肌瘤疗效均良好,可有效降低患者血清E2,FSH,P,LH水平,促进月经恢复正常;小剂量米非司酮可减少不良反应。

微波法制备猕猴桃生物质碳点及应用于金银花中Fe^(3+)的检测

为建立一种快速检测Fe^(3+)的方法,以猕猴桃汁为碳源,乙二胺为表面修饰剂,采用微波法制备猕猴桃生物质碳点(CDs)。制备的生物质碳点富含-OH、-NH和C-O等基团,粒径约为2.5 nm,易溶于水且稳定。该碳点在365 nm紫外光照射下发出蓝色荧光。基于Fe^(3+)对猕猴桃生物质碳点荧光猝灭效应,进而建立一种检测Fe^(3+)的方法。当Fe^(3+)的加入量在0.2~10μmol/L范围内,碳点的荧光猝灭程度(F/F_(0))随Fe^(3+)浓度的增加而呈线性下降(R^(2)=0.9934),检出限(S/N=3)为0.12μmol/L。将该方法用于测定金银花中Fe^(3+)的含量,其回收率在98.82%~103.20%,RSD介于1.67%~2.05%之间。该检测方法操作简便,快速,选择性好。

预见性护理对降低脑卒中后继发性癫痫发作及神经功能恢复的效果分析

目的探究预见性护理对降低脑卒中后继发性癫痫发作及神经功能恢复的效果。方法选取2017年2月至2018年2月我院收治的118例脑卒中患者,采用随机数表法将其分为观察组和对照组,每组59例,两组患者入院后均给予神经内科常规药物治疗,对照组给予神经内科常规护理,观察组则给予患者预见性护理,对两组患者治疗过程中继发性癫痫发作情况、神经功能改善情况、心理健康状态以及患者对护理满意度进行评价。结果观察组患者在治疗过程中继发性癫痫发生率显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论预见性护理能够有效降低脑卒中后继发性癫痫发生率,促进神经功能恢复,提高患者心理健康状态及对护理的满意度,适宜临床推广。