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2种十字花科检疫性病菌快速检测方法的建立
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作者 于璇 魏霜 +1 位作者 姜子德 王卫芳 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第9期1962-1971,共10页
【目的】人工构建一段随机序列并作为扩增内标(Internal amplification control,IAC)添加进实时荧光PCR体系中,建立含有扩增内标的十字花科细菌性黑斑病菌(Pseudomonas syringae pv.maculicola)和油菜茎基溃疡病菌(Leptosphaeria macula... 【目的】人工构建一段随机序列并作为扩增内标(Internal amplification control,IAC)添加进实时荧光PCR体系中,建立含有扩增内标的十字花科细菌性黑斑病菌(Pseudomonas syringae pv.maculicola)和油菜茎基溃疡病菌(Leptosphaeria maculans)的多重实时荧光PCR方法,检测上述2种检疫性病菌,旨在在提高检测通量的同时,指示PCR假阴性问题。【方法】通过对实时荧光PCR体系中各个引物及探针比例进行优化,从特异性、灵敏度以及实际样品检测等多个方面对该方法进行系统评价。【结果】在20.0μL体系中加入1.114×10^(3)拷贝的IAC不影响靶目标的扩增,特异性强,对十字花科细菌性黑斑病菌及油菜茎基溃疡病菌的灵敏度分别为6.9×10^(-4)、1.6×10^(-4)ng/μL。应用该方法对52批进口油菜籽和十字花科蔬菜种子样品进行检测,结果显示可以实现上述2种检疫性病菌的快速检测,同时有效指示PCR反应的假阴性。【结论】两种检疫性病菌含IAC多重实时荧光PCR检测方法不仅能提高检测准确性而且能防止漏检,在口岸进口种子检疫中具有良好的推广应用前景,对引种安全具有重要意义。 展开更多
关键词 油菜籽 油菜茎基溃疡病菌 细菌性黑斑病菌 扩增内标
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氯虫苯甲酰胺对荔枝蒂蛀虫不同虫态的室内毒力测定
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作者 董永龙 姜子德 +1 位作者 习平根 冼继东 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2023年第4期1087-1094,共8页
荔枝蒂蛀虫Conopomorpha sinensis Bradley是为害荔枝和龙眼的重要害虫,其为害的隐蔽性增加了防治难度。为了探索安全、有效的药剂防治手段和明确氯虫苯甲酰胺的适合施药时期,本研究在室内条件下,以防控荔枝蒂蛀虫常用药剂高效氯氟氰菊... 荔枝蒂蛀虫Conopomorpha sinensis Bradley是为害荔枝和龙眼的重要害虫,其为害的隐蔽性增加了防治难度。为了探索安全、有效的药剂防治手段和明确氯虫苯甲酰胺的适合施药时期,本研究在室内条件下,以防控荔枝蒂蛀虫常用药剂高效氯氟氰菊酯为对照药,采用喷雾法和药膜法,分别测定了100、10、1、0.1和0.01 mg/L的5个浓度梯度下,氯虫苯甲酰胺对荔枝蒂蛀虫卵、初孵幼虫的毒杀作用以及对成虫的触杀作用。研究结果表明,氯虫苯甲酰胺的5个浓度梯度对产后24 h、48 h和72 h蒂蛀虫卵孵化抑制率均显著高于高效氯氟氰菊酯;氯虫苯甲酰胺对蒂蛀虫初孵幼虫的毒力是高效氯氟氰菊酯的10倍,对荔枝蒂蛀虫初孵幼虫的LC_(50)分别为3.32 mg/L和38.78 mg/L。而在100 mg/L浓度下氯虫苯甲酰胺和高效氯氟氰菊酯对成虫触杀的校正死亡百分率最高分别为34.36%和77.35%。综上所述,氯虫苯甲酰胺对荔枝蒂蛀虫具有较强的杀卵活性和杀初孵幼虫活性,在荔枝生产上具有潜在的应用价值;鉴于其对成虫的触杀作用不强,故建议在荔枝蒂蛀虫的产卵高峰期和初孵幼虫期使用,以期将荔枝蒂蛀虫于发生为害之前进行有效控制。 展开更多
关键词 荔枝蒂蛀虫 氯虫苯甲酰胺 高效氯氟氰菊酯 毒力测定
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The autophagy gene ATG8 affects morphogenesis and oxidative stress tolerance in Sporisorium scitamineum 被引量:5
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作者 ZHANG Bin CUI Guo-bing +5 位作者 CHANG Chang-qing WANG Yi-xu ZHANG Hao-yang CHEN Bao-shan DENG Yi-zhen jiang zi-de 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2019年第5期1024-1034,共11页
The basidiomycetous fungus Sporisorium scitamineum causes sugarcane smut that leads to severe economic losses in the major sugarcane growing areas in China,India and Brazil,etc.Autophagy is a conserved pathway in euka... The basidiomycetous fungus Sporisorium scitamineum causes sugarcane smut that leads to severe economic losses in the major sugarcane growing areas in China,India and Brazil,etc.Autophagy is a conserved pathway in eukaryotes for bulk degradation and cellular recycling,and was shown to be important for fungal cell growth,development,and pathogenicity.However,physiological function of autophagy has not been studied in S.scitamineum.In this study,we identified a conserved Atg8 protein,named as SsAtg8 and characterized its function.Our results showed that autophagy was blocked in the ssatg8Δ mutant,in nitrogen starvation.The ssatg8Δ mutant formed pseudohypha frequently and was hypersensitive to oxidative stress.However,mating or filamenation was unaffected in the ssatg8Δ mutant in vitro.Overall we demonstrate that autophagy is dispensable for S.scitamineum mating/filamentation,while critical for oxidative stress tolerance and proper morphology in sporidial stage. 展开更多
关键词 Atg8 AUTOPHAGY FUNGUS Sporisorium scitamineum MORPHOGENESIS OXIDATIVE stress TOLERANCE
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甘蔗鞭孢堆黑粉菌原生质体转化DNA双片段的基因敲除方法的建立 被引量:3
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作者 蔡恩平 梅丹 +6 位作者 张小萌 孙贤 李玲玉 吴熔熔 邓懿祯 姜子德 常长青 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期2314-2327,共14页
由甘蔗鞭孢堆黑粉菌Sporisoriumscitamineum引起的甘蔗黑穗病是甘蔗生产的主要病害,严重影响了甘蔗的产量和品质,然而其分子致病机制报道很少,极大地影响了有效防控技术的开发。为了提高该病菌基因功能的研究效率,本研究以甘蔗鞭孢堆黑... 由甘蔗鞭孢堆黑粉菌Sporisoriumscitamineum引起的甘蔗黑穗病是甘蔗生产的主要病害,严重影响了甘蔗的产量和品质,然而其分子致病机制报道很少,极大地影响了有效防控技术的开发。为了提高该病菌基因功能的研究效率,本研究以甘蔗鞭孢堆黑粉菌有性配合两个关键基因SsGPA3和SsPRF1为目标,建立了基于DNA双片段的甘蔗鞭孢堆黑粉菌原生质体转化基因敲除技术体系。结果表明甘蔗鞭孢堆黑粉菌单倍体细胞生长期在OD600约为0.7,28℃下10mg/mL细胞壁裂解酶作用30min获得的原生质体产率最高,再生率最优;使用线性DNA双片段转化获得阳性转化子的成功率达90%以上,显著高于线性DNA单片段和质粒。本方法的建立将极大地提高甘蔗鞭孢堆黑粉菌的基因敲除效率,同时也为其他真菌的基因敲除提供借鉴。 展开更多
关键词 甘蔗鞭孢堆黑粉菌 原生质体 基因敲除 同源重组
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