SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究

目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭载体pSTKE-RBD,并转染到预先感染天坛株痘苗病毒(VTT)的BHK-21细胞内,经多轮的荧光噬斑筛选成功获得重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD;通过滴鼻方式免疫小鼠后,检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠体质量的影响;通过肌肉免疫小鼠后,分析rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠产生的特异性抗体和中和抗体的水平;通过流式细胞术检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠T细胞亚群的影响。结果 利用同源重组、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记和多次荧光噬斑筛选,成功筛选获得了表达RBD的胸腺激酶(TK)基因缺失型重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD,且PCR验证成功。BALB/c小鼠体内实验表明rVTT△TK-RBD具有较好的抗SARS-CoV-2的免疫原性且相比于亲本株VTT明显降低了对机体的毒性作用。结论 成功构建并获得SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD并通过各项试验证明其安全性和免疫原性。

光甘草定对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制

目的:探讨光甘草定对肺腺癌细胞A549恶性生物学行的影响及其分子机制。方法:常规方法培养A549细胞和人正常肺上皮细胞BEAS-2B,用不同浓度的光甘草定和或顺铂对其进行处理,通过结晶紫染色、CCK-8法检测光甘草定、顺铂对A549、BEAS-2B细胞增殖活力的影响,Transwell小室实验、细胞划痕实验检测光甘草定对A549细胞侵袭、迁移能力的影响,流式细胞术检测光甘草定对A549细胞凋亡的影响,3D超低黏附板培养法培养A549细胞后采用CCK-8法检测光甘草定对A549细胞增殖的影响,WB法检测光甘草定对A549细胞中上皮间质转化(EMT)相关蛋白表达的影响;构建A549细胞移植瘤模型后检测光甘草定、顺铂对移植瘤的生长以及移植瘤组织中EMT相关蛋白表达的影响。结果:光甘草定、顺铂呈剂量依赖性地显著抑制A549细胞的增殖(P<0.05或P<0.01)、细胞迁移(P<0.05或P<0.01)和侵袭能力(P<0.05或P<0.01),光甘草定能诱导A549细胞凋亡(P<0.01),抑制A549细胞中N-cadherin、snail和vimentin蛋白的表达,促进E-cadherin蛋白表达;光甘草定、顺铂均能抑制A549移植瘤的生长,抑制移植瘤组织中Ki67、N-cadherin、snail和vimentin蛋白的表达、促进E-cadherin蛋白的表达。结论:光甘草定可通过抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导A549细胞凋亡,其机制可能与其抑制细胞的EMT进程而产生抑癌作用有关。

靖宇平贝母浸出物通过调节肠道菌群失调缓解DSS诱导溃疡性结肠炎

目的基于肠道菌群调节探讨靖宇平贝母浸出物抗DSS诱导溃疡性结肠炎效果。方法利用DSS诱导构建溃疡性结肠炎小鼠模型,通过检测疾病活跃指数、结肠长度和肠组织学评分,明确靖宇平贝母浸出物抗溃疡性结肠炎效果;通过16S rRNA测序分析结肠内容物中微生物组成与多样性,明确靖宇平贝母浸出物对溃疡性结肠炎小鼠肠道菌群的影响。结果靖宇平贝母能够显著性降低模型小鼠的疾病活跃指数,阻止结肠缩短以及改善肠组织损伤;并且能够显著性增加潜在有益菌丰度(如Faecalibaculum,Ruminococcaceae_UCG-014和Lachnospiraceae_NKA136_group等),降低潜在有害菌丰度(如Bacteroides和Escherichia)。结论靖宇平贝母浸出物可以通过调节肠道菌群失调改善模型小鼠的溃疡性结肠炎症状。

巴泰病毒N_(5aa-90aa)重组肽段的原核表达纯化及多克隆抗体的制备

巴泰病毒(BATV)是一种虫媒病毒,属于布尼亚病毒科成员,其核衣壳N蛋白具有高度保守性,可诱导机体产生较好的抗体反应,常用做诊断抗原。本研究通过对N蛋白强抗原性肽段N_(5aa-90aa)进行密码子优化,将其插入到pET-32a(+)载体,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中表达,通过不同IPTG浓度和诱导时间确定最佳蛋白表达条件。利用镍柱亲和层析方法对rHis-N_(5aa-90aa)肽段进行纯化。通过Western blot对rHis-N5aa-90aa肽段进行验证,将rHis-N_(5aa-90aa)肽段免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,间接ELISA测定其抗体效价。结果显示:本研究成功构建了pET-32a-N_(5aa-90aa)重组质粒,在IPTG终浓度为0.1 mmol/L、37℃诱导5 h可获得大量重组蛋白;SDS-PAGE电泳结果显示重组rHis-N_(5aa-90aa)肽段分子质量约28.6 kDa,蛋白浓度为0.256 mg/mL;经Western blot分析纯化的rHis-N_(5aa-90aa)肽段与His-tag抗体呈阳性反应,证明rHis-N_(5aa-90aa)成功表达,间接ELISA测定制备的兔抗N_(5aa-90aa)肽段多克隆抗体的效价为1∶25600,并且Western blot和间接免疫荧光分析其具有良好的特异性。本研究表达并纯化了BATV的rHis-N_(5aa-90aa)肽段,为BATV的ELISA诊断方法的建立和基因疫苗的研制奠定基础。

猪流行性腹泻病毒感染小鼠血清抗体间接ELISA方法的建立

为建立检测感染小鼠血清中猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗体的方法,本研究应用PEDV受体结合区(receptor binding domain, RBD)重组蛋白作为抗原,通过探索各反应的最佳条件,并进行了该方法灵敏度、重复性、特异性分析。结果显示,最佳蛋白包被浓度为5μg/mL,待检血清稀释浓度为1∶400,孵育时间为37℃30 min,羊抗鼠IgG-HRP作为二抗,孵育条件为37℃30 min,底物显色时间为15 min。对建立的ELISA检测方法进行验证,阳性对照血清的稀释度为1∶204 800倍时OD450值仍大于临界值,批内和批间的变异系数均小于10%,对猪传染性胃肠炎病毒和猪δ冠状病毒抗体小鼠阳性血清检测均不发生交叉反应。结果表明本研究建立的小鼠血清PEDV抗体间接ELISA方法具有很好的灵敏度、重复性、特异性。为PEDV候选疫苗的小鼠血清特异性抗体检测提供了一种精准、高效的方法。

贝伐珠单抗联合紫杉醇治疗非小细胞肺癌过程中并发支气管胸膜瘘1例报告及文献复习

目的:探讨贝伐珠单抗联合紫杉醇(白蛋白结合型)治疗非小细胞肺癌(NSCLC)过程中并发支气管胸膜瘘(BPF)发生的可能机制、临床表现和预防策略,及时鉴别出具有潜在风险的个体患者,为BPF的预防提供参考。方法:收集1例贝伐珠单抗联合紫杉醇(白蛋白结合型)治疗NSCLC过程中并发BPF患者的临床资料,复习及归纳相关文献,总结出其发生的潜在风险。结果:患者,男性,62岁,局部晚期肺腺癌(驱动基因阴性),接受贝伐珠单抗和紫杉醇(白蛋白结合)后线化疗,经过2个周期的化疗后,患者的临床症状和功能状态均有所改善,但并发急性BPF及继发胸腔内感染,被迫停止抗血管生成治疗和化疗,虽经过胸腔闭式引流、积极抗感染治疗和最佳支持治疗等,临床症状未能得到缓解,患者最终于2019年9月17日死于呼吸衰竭。结论:当病变同时侵及胸膜、气管和胸壁,且贝伐珠单抗联合化疗治疗过程中出现肿瘤空化效应或治疗前病变已存在癌腔时,应警惕诱发急性BPF。由于急性BPF缺乏有效的预防和治疗措施,因此及时识别出具有潜在风险的个体患者对预后至关重要。

贝伐珠单抗联合FOLFIRI方案治疗晚期直肠癌并发直肠阴道瘘1例报告及文献复习

目的:探讨贝伐珠单抗联合化疗治疗已形成直肠阴道瘘直肠癌患者的疗效,为该病的治疗提供参考依据。方法:收集1例采用贝伐珠单抗联合FOLFIRI方案治疗的晚期直肠癌伴直肠阴道瘘患者的临床资料,分析其诊治特点和过程,并对相关文献进行总结。结果:患者,女性,64岁,于吉林省人民医院行经腹直肠癌手术(Dioxon手术),术后病理为中分化直肠腺癌,阴道后壁侵犯及区域淋巴结转移(pT4bN2M0,ⅢC期,DukesC);免疫组织化学检测,MSH2(+)、MLH1(+)、PMS2(+)、MSH6(+)、S-100(-)和BRAFV600E(-),提示错配修复蛋白功能正常(pMMR);该患者发生N-和K-ras基因突变,术后4周辅助化疗前盆腔核磁成像(MRI)显示术后直肠阴道瘘,延期化疗,术后5个月疾病继续进展,被迫行姑息性一线、二线化疗,但疾病持续进展,三线采用贝伐珠单抗联合FOLFIRI方案治疗,未加重直肠阴道瘘,且促进了瘘道愈合,并显著提高了患者的生活质量。结论:针对肿瘤进展导致直肠阴道瘘且无法从西妥昔单抗治疗中受益的直肠癌患者,采用贝伐珠单抗联合化疗进行针对病因的治疗是一种可行的方案。

猪δ冠状病毒RBD蛋白在昆虫细胞中的表达

为了获得具有天然构象且反应原性良好的猪δ冠状病毒((PDCoV))受体结合域(RBD)蛋白,根据PDCoV流行株CC-HN2K-02株S蛋白编码序列,筛选、设计、优化并合成其RBD段DNA序列,将其亚克隆至杆状病毒双表达载体pFastBac^(TM) Dual上,获得pFBD-PDR重组质粒。将该重组质粒转化到DH10Bac^(TM)大肠杆菌感受态细胞中,进行2轮蓝白斑筛选并进行PCR鉴定获得阳性重组杆状质粒Bacmid-PDR;通过脂质体转染SF9细胞进行病毒拯救,出现明显病变后收取上清,并在正常SF9细胞中盲传3代,获得的杆状病毒命名为rBV-PDR。利用间接免疫荧光法(IFA)和Western blot检测rBV-PDR感染昆虫细胞后的蛋白表达情况。结果:重组质粒pFBD-PDR酶切验证正确,重组杆粒Bacmid-PDR构建成功,杆状病毒中能够表达PDR蛋白且能与Sterp-tag抗体发生特异性结合,IFA鉴定出特异性红色荧光,表明本试验成功表达了PDCoV-RBD蛋白,为深入开展PDCoV抗体的制备、新型疫苗、诊断试剂研发奠定了基础。

阿龙山病毒VP2蛋白原核表达纯化以及抗原性鉴定

阿龙山病毒(ALSV)是一种新发现的分节段黄病毒,可通过蜱虫叮咬感染家畜和人。为了获得高纯度ALSV-VP2蛋白,利用密码子优化软件对ALSV H3株VP2蛋白质氨基酸序列进行优化。将优化后的基因克隆到原核表达载体pET-30a中,构建重组质粒pET30a-VP2,重组质粒转化到E.coli BL21(DE3)表达菌株利用IPTG、16℃低温诱导,表达的蛋白再通过亲和层析(Ni-IDA树脂)得到纯度较高ALSV-VP2蛋白。SDS-PAGE电泳结果显示,在27 kDa处出现目的条带,与预期相符合,BCA检测蛋白浓度为0.236 mg/mL,证明ALSV-VP2蛋白在大肠杆菌中高效表达。经Westen blot分析,该重组蛋白具有良好特异性。本研究为ALSV的流行病学监测和致病机制研究奠定基础。

Ad-apoptin通过AMPK/ACC信号通路抑制肺癌细胞脂代谢

目的:探讨溶瘤腺病毒Ad-apoptin对非小细胞肺癌细胞脂代谢的影响及分子机制。方法:CCK-8法检测细胞活性;JC-1染色和Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;Western blot检测脂代谢和凋亡相关蛋白;siRNA干扰肺癌细胞AMPK的表达;Co-IP检测Ad-apoptin与AMPK蛋白相互间作用;建立移植瘤小鼠模型,检测肿瘤的生长,并通过免疫组化检测TUNEL、Ki-67、p-AMPK和FASN蛋白表达量。结果:Ad-apoptin对肺癌细胞抑制率具有浓度依赖性(P<0.05),显著诱导细胞凋亡(P<0.05),降低细胞脂质累积,下调三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)含量,上调p-AMPK和p-ACC;敲低AMPK可显著减弱Ad-apoptin诱导的凋亡,而抑制ACC可显著增强Ad-apoptin诱导的凋亡。在体内试验中,Ad-apoptin能抑制体内肿瘤生长,同时也能抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡。结论:Ad-apoptin以AMPK为靶点,通过AMPK/ACC途径,抑制肿瘤增殖和脂代谢并促进细胞凋亡。

FGF21与溃疡性结肠炎小鼠相关性研究

探究在溃疡性结肠炎小鼠与成纤维细胞生长因子21(FGF21)的之间的相关性。本研究使用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠溃疡性结肠炎,分析小鼠外周血中FGF21的含量与小鼠体重变化、疾病活动指数(DAI)评分、直肠长度和结肠炎评分之间的相关性。结果显示,在溃疡性结肠炎小鼠中,外周血中的FGF21的含量与小鼠体重变化和直肠长度呈负相关,与疾病活动指数(DAI)评分和结肠炎评分呈正相关。溃疡性结肠炎小鼠外周血中的FGF21含量与疾病活动程度相关,FGF21或许可以作为检测溃疡性结肠的生物学指标。

巴泰病毒G1_(189aa-239aa)肽段的原核表达、纯化及间接ELISA方法的建立

本研究旨在获得高纯度巴泰病毒(Batai virus,BATV)G1蛋白强抗原性肽段,并建立一种用于检测BATV羊血清抗体的间接ELISA方法。首先对G1蛋白51个氨基酸编码的189-239位氨基酸强抗原肽段进行密码子优化,基因合成后构建重组表达质粒pET-32a-G1_(189aa-239aa),转化大肠杆菌BL21感受态细胞进行诱导表达。优化表达条件获得大量rHis-G1_(189aa-239aa)肽段,利用镍柱亲和层析方法进行纯化,并用BCA试剂盒进行蛋白浓度的测定。通过Western blotting对rHis-G1_(189aa-239aa)肽段进行抗原特异性分析,以rHis-G1_(189aa-239aa)肽段为抗原,羊BATV阳性血清作为抗体,通过方阵滴定优化反应条件,建立BATV间接ELISA检测方法。SDS-PAGE结果显示,rHis-G1_(189aa-239aa)肽段在大肠杆菌中主要以包涵体形式存在,分子质量为24.5 ku,在0.1 mmol/L的IPTG诱导5 h后rHis-G1_(189aa-239aa)肽段表达量达到峰值。通过镍柱亲和层析纯化后,测得蛋白浓度为0.296 mg/mL。Western blotting结果显示,rHis-G1_(189aa-239aa)肽段特异性较好。以rHis-G1_(189aa-239aa)肽段为抗原建立的间接ELISA方法,通过条件优化确定最佳抗原包被浓度为2.5μg/mL,血清和二抗稀释度为1∶60和1∶10000。样品D450 nm值≥0.367为阳性,D450 nm值≤0.319为阴性。该方法与山羊痘病毒和布鲁氏杆菌的阳性血清均无交叉反应,批内和批间的变异系数均<10%,阳性血清最高可稀释至1600倍,该方法具有特异性强、灵敏性高和重复性好的特点。利用本方法对云南地区的120份羊血清样本进行检测,血清阳性率为21.67%。本研究获得了特异性强和纯度较高的rHis-G1_(189aa-239aa)肽段,建立了间接ELISA方法,可应用于羊BATV血清流行病学调查,为疫病防控及致病机制研究奠定基础。

基于高通量测序和小分子核苷类似物诊断与治疗猫传染性腹膜炎病例转归

猫传染性腹膜炎(简称猫传腹)是一类由冠状病毒引起、以严重腹腔炎症为特征的高致死性传染病,然而对其病原的诊断尚无公认的标准方法,且无有效的治疗手段可应用于兽医临床。因此,本研究通过描述一例猫传染性腹膜炎病例诊治过程,探索针对该病的合理诊疗手段。本研究利用高通量测序技术,综合临床症状、生化分析、血常规等检测方法,实现对该病例的诊断,基于白/球蛋白比、fSAA等临床指标评估抗病毒药物GS-441524治疗效果,监控转归进程。结果表明高通量测序技术可应用于猫传腹的诊断过程,经高剂量药物治疗后临床症状明显改善,8周白/球蛋白比、fSAA两项特征指标恢复正常,10周符合出院标准,16周复查未见疾病复发迹象。此病例的成功治疗证明高通量测序技术在兽医临床诊断的应用价值和GS-441524药物对危重病例治疗的有效性,血清白/球蛋白比(≥0.6)和fSAA(<5μg·mL^(-1))可作为临床指标评估治疗效果。

冠状病毒起源、受体及新型冠状病毒检测与疫苗最新研究进展

冠状病毒由来已久,1936年就分离到病毒并命名。冠状病毒种类很多,感染谱也比较广,一些病毒具有人兽共患特性,严重威胁人类与动物健康以及公共卫生安全,特别是2003年严重急性呼吸综合征病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus,SARS-CoV)、2012年中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV),以及现在流行的新型冠状病毒,使得冠状病毒“名声大噪”。本文简要综述了冠状病毒的发现、起源、病毒受体以及我们在新型冠状病毒检测方法和疫苗研究方面的最新进展,以期人们更好的认识和理解冠状病毒,为新型冠状病毒及其他冠状病毒防控提供参考。

基于微流控芯片技术的5种呼吸道病毒核酸快速荧光qPCR检测方法的建立

目的建立一种快速鉴别诊断5种重要呼吸道病毒(甲型流感病毒、乙型流感病毒、H1N1和H3N2亚型流感病毒及麻疹病毒)的检测方法。方法基于微流控芯片技术,设计合成针对5种呼吸道病毒的特异性探针引物,利用快速反应体系及创新性温控模块研制的极速荧光定量PCR仪,评估探针引物的特异性、灵敏性及检测体系的重复性,并用临床样本进行测试。结果设计合成的5种病毒的探针引物具有较高的特异性和灵敏性,建立的检测体系可在5min内完成病毒核酸的制备,30min内获得检测结果,且具备良好的重复性。结论建立了5种呼吸道病毒核酸快速定量检测方法,有望用于不明呼吸道病毒感染的鉴别诊断及现场快速检测。

1株登革Ⅰ型病毒的分离鉴定及系统进化分析

目的了解1株登革病毒分离株的来源及进化情况。方法分离获得1株登革病毒,通过对该毒株进行血清型分型鉴定及基因组序列测定,进而通过生物信息学方法对囊膜蛋白E进行系统进化分析。结果分离获得1株DENV血清Ⅰ型基因Ⅰ型毒株;且E基因的同源性分析显示,与Malaysia 0802aTw、Singapore株、浙江17-45株、YN176282株、BNJH17108株的核苷酸同源性均在99%以上;氨基酸水平,与NJX-14株、浙江17-45株、Malaysia 0802aTw株、1208aTw株等多种毒株的E蛋白的同源性均为99.8%,表明这些毒株可能源于同一株原始毒株,且E蛋白序列遗传进化稳定,与2002年以来多株广东省分离的毒株高度同源。结论近十年发现在我国的DENVⅠ型基因Ⅰ型遗传进化稳定,保守程度高,有利于针对该血清型登革病毒的防控。

基孔肯雅病毒(CHIKV)重组痘苗病毒候选疫苗小鼠免疫研究

目的基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)是甲病毒属的正股RNA病毒,主要由埃及伊蚊和白纹伊蚊传播,广泛流行于亚洲和非洲的部分地区,每年给全球造成严重的经济损失。本研究基于重组痘苗表达系统构建了CHIKV重组痘苗候选疫苗,进行小鼠免疫评价,为CHIKV疫苗的研发提供理论基础。方法将CHIKV重组痘苗候选疫苗进行小鼠免疫评价,在首次免疫35 d后,收集血清用于特异性抗体检测以及细胞因子检测,分离小鼠脾脏淋巴细胞用于T细胞亚类分型分析,并在35 d时进行攻毒保护实验。结果免疫CHIKV重组痘苗候选疫苗小鼠特异性抗体显著升高,且细胞因子IL-4(P<0.05)和IFN-γ(P<0.05)的表达量显著高于对照组。CD3^(+)CD4^(+)T(P<0.05)和CD3^(+)CD8^(+)T(P<0.05)细胞比例显著高于对照组。攻毒保护实验结果显示,免疫疫苗组体重高于对照组。结论本研究中的CHIKV重组痘苗病毒候选疫苗可以诱导机体产生良好的细胞免疫和体液免疫应答反应,本研究结果可为CHIKV疫苗的研发提供参考。

SFTSV介导的固有免疫应答及其通过抑制宿主蛋白泛素化修饰实现免疫逃逸的调控机制

发热伴血小板减少综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus, SFTSV)感染可造成发热伴血小板减少综合征(Severe fever with thrombocytopenia syndrome, SFTS)。SFTS重症患者大多与SFTSV引起非正常的固有固有免疫反应所导致的细胞因子风暴有关。这些早期固有固有免疫反应包括多种炎症和抗病毒基因的表达,并激活随后的固有固有免疫反应和适应性免疫。感染细胞的早期固有固有免疫反应是由模式识别受体(Pattern recognition receptors, PRRs)、接头蛋白、激酶和转录因子组成的细胞内信号通路所介导的。这些途径受复杂的翻译后修饰网络的严格调节,其中大量的泛素化酶和去泛素化酶使这些修饰可逆且高度动态。这些酶的调控作用可以增强固有免疫反应以抵抗病原体的入侵,也可以抑制其过度活化以避免病理性免疫反应。本文综述了SFTSV引起的早期固有免疫信号通路及其复杂调控机制,为后续针对SFTSV的药物开发和免疫病理学提供了基础。

新型冠状病毒重组蛋白疫苗的构建、表达及鉴定

目的 利用毕赤酵母系统表达重组新型冠状病毒受体结构域蛋白RBD,以期作为新冠病毒重组蛋白候选疫苗。方法 选择新型冠状病毒的RBD(受体结合域)蛋白为靶点,通过基因工程技术将RBD基因序列克隆到毕赤氏酵母表达载体pPIC9K中。通过载体将外源基因整合到毕赤酵母染色体上,获得遗传性稳定重组子。毕赤氏酵母表达载体含有醇氧化酶基因的调控序列,加入甲醇进行诱导,通过前导信号肽引导外源蛋白的分泌表达。结果 成功将RBD基因序列克隆到表达载体中并整合到酵母染色体上,获得遗传性稳定重组子。能通过前导信号肽引导目的蛋白的分泌表达,表达产物免疫动物刺激产生高水平的血清IgG抗体,IgG抗体效价为1∶2.73×106。结论 重组新型冠状病毒受体结构域蛋白RBD的设计具有可行性,为重组蛋白候选疫苗在预防新型冠状病毒感染中具有潜在的应用价值。

表达新型冠状病毒奥密克戎BA.1变异株S1基因重组DNA疫苗的构建及免疫原性

旨在构建以S1蛋白为基础的新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)奥密克戎BA.1变异株(Omicron-BA.1)DNA疫苗并研究其免疫原性。首先,以真核表达载体pSN为骨架,使用PCR和无缝克隆方法构建含Omicron-BA.1变异株S1基因的pSN-S1重组质粒。使用无内毒素质粒大提试剂盒大量提取pSN-S1重组质粒,通过Western blot方法验证S1蛋白的表达。用pSN-S1重组质粒免疫C57BL/6小鼠后,使用ELISA方法检测小鼠血清针对S1蛋白的特异性IgG抗体效价及亚型。结果显示,pSN-S1重组质粒构建成功,S1蛋白表达良好,条带单一、大小正确。实验室制备的pSN-S1重组质粒的质量浓度(2168.2 mg/L)和纯度(D_(260)/D_(280)=1.92)较高,可用于后续小鼠免疫试验。pSN-S1重组质粒在C57BL/6小鼠中具有良好的免疫原性,第3次免疫后21 d,针对S1蛋白的特异性IgG抗体效价平均可达1∶1200,主要偏向于IgG2a亚型。本研究成功构建了以S1蛋白为基础的SARS-CoV-2 Omicron-BA.1变异株DNA候选疫苗,为针对SARS-CoV-2 Omicron变异株DNA疫苗的进一步研究奠定了基础。