二步聚合酶链反应检测皮肤T细胞淋巴瘤的T细胞受体基因重排

目的 应用二步聚合酶链反应 (PCR)检测皮肤T细胞淋巴瘤 (CTCL)的T细胞受体(TCR)基因重排 ,提高其准确性和特异性 ,并应用已知重排的cDNA序列 ,推测该病患者的特异肽链顺序 ,为免疫治疗提供新线索和途径。方法 先用TCR基因重排区域以外的部分为引物 ,做 1 0～ 30个循环扩增。取得一定数量的cDNA ,作为模板 ,再经 30～ 40个循环扩增 ,获得较纯的cDNA。然后将此产物放入质粒 ,进一步分析DNA序列。按照分析结果 ,制备出特异的分子探针 ,对二步PCR扩增产物进行分子杂交 ,推测出患者的特异性肽链顺序。结果 以Vβ8为特殊引物所显示的反应带明显 ,用Vβ8顺序制成的分子探针杂交 ,示明显的特异性结合。特异性分子探针只与CTCL患者的cDNA杂交 ,与对照组标本不发生交叉反应。结论 二步PCR可准确地检测CTCL的TCR基因重排 ,其特异性强 ,并可在此基础上应用已知重排的cDNA序列推测该病患者的特异性肽链 。

细胞毒T细胞识别皮肤T细胞淋巴瘤的T细胞受体个体基因型肽抗原

目的确定细胞毒T细胞是否能识别由第三互补决定区特异基因编码的肽。方法选择两例皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)患者(SS和AR)的CD4+ 、Vβ8+ 恶性T细胞作为测定肽序列的细胞 ,CD8+非恶性T细胞作为杀伤或反应性细胞 ,和转化的淋巴母细胞样细胞作为主要组织相容性复合体(MHC)抗原提呈的细胞。结果患者SS的恶性T细胞的T细胞受体(TCR)β 链的个体基因型肽可刺激CD8+T细胞产生肿瘤坏死因子(TNF) α ,但患者AR的MTC的TCR蛋白的个体基因型区的对照肽则不刺激产生TNF α。反之 ,患者AR的CD8+ T细胞藉分泌TNF α而对自身肽应答 ,但对来源于对照患者SS和人类免疫缺陷病毒感染患者的其他肽不应答。结论细胞毒T细胞对CTCL的淋巴细胞个体恶性克隆独特的特殊的MHCⅠ类相关肽的识别和应答具有特异性 ,确定CTCL的肿瘤特异性定位 ,可进一步为能够激发对肿瘤细胞的CD8+