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猪源转录因子AP-2δ通过增强rep基因启动子活性促进猪圆环病毒2型的复制 被引量:1
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作者 王越 宋东峰 +4 位作者 林翠 李佳容 王胜男 顾金燕 周继勇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1985-1995,共11页
本研究旨在探究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2, PCV2)能否借助rep基因启动子区的转录因子结合位点调控自身基因转录,并寻找参与这一调控过程的宿主因子。凝胶迁移实验证实rep基因启动子具有核蛋白结合活性。DNA-pull down联... 本研究旨在探究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2, PCV2)能否借助rep基因启动子区的转录因子结合位点调控自身基因转录,并寻找参与这一调控过程的宿主因子。凝胶迁移实验证实rep基因启动子具有核蛋白结合活性。DNA-pull down联合液相-串联质谱分析鉴定到了可与rep基因启动子结合的猪源转录因子AP-2δ(Porcine transcription factor AP-2δ, poTFAP2δ)。双荧光素酶报告基因试验、实时荧光定量PCR、免疫印迹及间接免疫荧光等试验证明poTFAP2δ不仅可以特异性地增强rep基因启动子活性,而且可以在PCV2感染过程中促进rep和cap基因的转录、翻译及PCV2病毒滴度。文中揭示了PCV2利用宿主蛋白促进自身增殖的分子机制,为进一步从病毒与宿主互作角度阐明PCV2的致病机制提供新的研究思路,亦为PCV2高效疫苗的研制提供理论基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 rep基因启动子 转录因子结合位点 猪源转录因子AP-2δ
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猪丁型冠状病毒诱导的细胞线粒体凋亡 被引量:3
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作者 焦少勇 林翠 +3 位作者 杜柳阳 刘俊丽 顾金燕 周继勇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1050-1058,共9页
猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新型的猪肠道致病性冠状病毒,可引起猪群剧烈腹泻及呕吐,但致病机制尚不清楚。本研究检测了PDCoV感染诱导的细胞凋亡。Caspase酶活性检测显示,在PDCoV感染的细胞中,caspase 3、cas... 猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新型的猪肠道致病性冠状病毒,可引起猪群剧烈腹泻及呕吐,但致病机制尚不清楚。本研究检测了PDCoV感染诱导的细胞凋亡。Caspase酶活性检测显示,在PDCoV感染的细胞中,caspase 3、caspase 8和caspase 9的活性随病毒感染量的增多而显著提高,类似的现象未能在紫外灭活病毒感染的细胞中观察到,表明PDCoV感染可同时激活内源性与外源性细胞凋亡通路,并暗示细胞凋亡的诱导依赖于病毒复制。为深入探究PDCoV诱导的内源性细胞凋亡,分别检测胞浆和线粒体中细胞色素C与凋亡诱导因子。结果显示,与正常细胞相比,PDCoV感染细胞从线粒体释放到胞浆的细胞色素C显著增多,且其释放量随着感染时间的延长而增多,而凋亡诱导因子始终定位于线粒体,提示PDCoV感染通过促使线粒体膜间隙的细胞色素C进入胞浆而启动caspase依赖的线粒体凋亡通路。本研究初步揭示了PDCoV诱导细胞凋亡的机制。 展开更多
关键词 猪丁型冠状病毒 线粒体凋亡 细胞色素C
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Genome Characteristics and Evolution of Pseudorabies Virus Strains in Eastern China from 2017 to 2019 被引量:17
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作者 Xiaofeng Zhai Wen Zhao +9 位作者 Kemang Li Cheng Zhang Congcong Wang Shuo Su Jiyong Zhou Jing Lei Gang Xing Haifeng Sun Zhiyu Shi jinyan gu 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2019年第6期601-609,共9页
Since late 2011,outbreaks of pseudorabies virus(PRV)have occurred in southern China causing major economic losses to the pig industry.We previously reported that variant PRV forms and recombination in China could be t... Since late 2011,outbreaks of pseudorabies virus(PRV)have occurred in southern China causing major economic losses to the pig industry.We previously reported that variant PRV forms and recombination in China could be the source of continued epidemics.Here,we analyzed samples from intensive pig farms in eastern China between 2017 and 2019,and sequenced the main glycoproteins(gB,gC,gD,and gE)to study the evolution characteristics of PRV.Based on the gC gene,we found that PRV variants belong to clade 2 and detected a founder effect during by the PRV epidemic.In addition,we detected inter-and intra-clade recombination;in particular,inter-clade recombination in the gB genes of strains FJ-ZXF and FJ-W2,which were recombinant with clade 1 strains.We also found specific amino-acid changes and positively selected sites,possibly associated with functional changes.This analysis of the emergence of PRV in China illustrates the need for continuous monitoring and the development of vaccines against specific variants of PRV. 展开更多
关键词 PSEUDORABIES virus (PRV) GLYCOPROTEINS FOUNDER effect EPIDEMIC Eastern China
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GST pull-down结合质谱筛选猪圆环病毒2型ORF4潜在互作蛋白
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作者 林翠 唐雯 +4 位作者 顾金燕 金玉兰 董伟仁 廖敏 周继勇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期40-48,共9页
猪圆环病毒2型编码的ORF4蛋白是近年来发现的新蛋白。迄今为止,人们对ORF4所参与的细胞生物学过程知之甚少。本研究首先构建了带双标签的真核表达载体pCMV-N-Flag-GST,再将ORF4基因插入该载体中,形成pCMV-N-Flag-GST-ORF4。将质粒转染2... 猪圆环病毒2型编码的ORF4蛋白是近年来发现的新蛋白。迄今为止,人们对ORF4所参与的细胞生物学过程知之甚少。本研究首先构建了带双标签的真核表达载体pCMV-N-Flag-GST,再将ORF4基因插入该载体中,形成pCMV-N-Flag-GST-ORF4。将质粒转染293T细胞表达ORF4后,通过GSTPull-down试验捕获细胞内潜在与ORF4互作的蛋白库。经SDS-PAGE分离及银染后,对所得的特异性条带进行质谱鉴定,筛选出5个与ORF4潜在互作的蛋白,包括丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶6催化亚基、α心肌蛋白、β肌动蛋白、SEC-14样蛋白5和肌球蛋白myosin 9。上述研究结果为深入揭示ORF4在病毒感染细胞过程中发挥的作用提供新的思路与方向。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 ORF4蛋白 GSTpull-down 互作蛋白
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