使用冷藏精液进行大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)人工授精

使用在 4℃冷藏 2 4h和 48h的精液对 5岁的雌性大熊猫妃妃进行了人工授精 ,以保持圈养大熊猫的遗传多样性 .供精者乐乐是一只患皮肤癌的雄性大熊猫 ,睾丸体积为 (386 .1± 2 14)cm3 ,在 2 0 0 0 0 2 2 3～ 0 5 11期间 ,4次人工采精 :刺激电压 5～ 8V ,射精电压 5～ 8V ,每次采精量 (3.2± 1.2 )mL ,精子密度为 (12 0 8.5± 5 6 4.9)× 10 6/mL-1,每次精子总量 (390 8.3± 2 5 46 .6 )× 10 6,精液平均活力为 84.8%± 4.1% ,活率为 87.8%± 5 .2 % ,运动状态为 2 .9± 0 .2 5 ,畸形率为 2 8.3%± 11.1% ,平均顶体正常率为 96 %± 1% ,pH值为 7.9± 0 .3.乐乐的精液用TEST稀释后 ,在 4℃冷藏 2 4h、48h和 72h后 ,精子活力分别是 6 5 % ,5 8%和 47% ,精子的活率分别为 73% ,73%和 6 8% .用酶免法对雌兽妃妃尿液中雌激素的检测 ,发现妃妃的雌激素在发情前期开始增加 ,在发情前期的最后一天达到最大峰值 ,在发情期(4月 3日～ 5日 )迅速下降到正常值 ,进行人工授精的最佳时间是在雌兽尿液中的雌激素达到最大峰值后的 48～ 72h之间 .妃妃在 2 0 0 0 0 8 10顺利地产下一仔 ,雌性 ,妊娠期 12 7d ,初生幼仔 179.3g.图 1表 3参

大熊猫冷冻精液解冻速度和解冻液中添加Pentyoxyfilline对其解冻后活力的影响

建立大熊猫的精子库,进行远距离圈养大熊猫种群间的人工授精和遗传物质的转运,维持遗传多样性,是目前大熊猫遗传管理的优先方法。要成为最有效的工具,精子库保存的精子解冻后的活力必须很好。本文对大熊猫冷冻精液的解冻速度和解冻液中添加化学激活剂Pentyoxyfilline(PF)后的精子活力进行了试验。试验用的精液采自11只成年大熊猫,精液冷冻速度为每分钟-40℃～-100℃。试验Ⅰ:将冷冻精液放入3种不同温度的水浴中解冻:(1)22℃(慢速解冻);(2)37℃(中速解冻)(3)50℃(快速解冻)。将冷冻前精子活力(78 1±2 9%)和解冻后的平均精子活力进行比较,快速解冻后的精子活力(57 5±5 4%)显著地降低(P<0 05),而中速解冻的精子活力(67 5±3 1%)和慢速解冻的精子活力(73 33±2 1%)与冷冻前的活力接近。试验Ⅱ:使用中速解冻方法解冻精液后,分别加入最终浓度为0mM、1mM、5mM和10mM的PF,然后分别保温15min和24h。在PF(0mM、1mM、5mM和10mM)中分别孵育15min的解冻精子活力,运动状态,活率和顶体正常率在试验期的90min内都很相似(P>0 05)。在1mMPF中孵育24h的精子活力没有变化(P>0 05)。在5mM和10mMPF中孵育过的精子活力(5mM:24 0±4 7%;10mM19 5±3 6%)比没有加PF的对照组的精子活力(38 3±5 2%)显著地低(P<0 05)。而且。

大熊猫精液的研究

在 1999年 3月至 2 0 0 0年 6月 ,对卧龙自然保护区大熊猫研究中心的 9只 5 .5～ 16 .5岁的雄性大熊猫进行了 17次电刺激采精 ,9只大熊猫的平均体重为 10 8.1± 15 kg,睾丸体积为 2 89.4± 10 8.6 cm3,刺激电压 2～ 8V,射精电压 4～ 8V,平均每次采精量为 3.5± 1.91ml,精子密度为 995 .2± 782 .6× 10 6 个 / ml,每次采精总量为 390 7± 2 981.7× 10 6 个 ,精液平均活力为 6 9.1± 2 8.9% ,活率为 79.6± 2 3.1% ,运动状态为 2 .7± 1.1,畸形率为 39.4± 32 .2 % ,平均顶体正常率为 85 .8± 31.2 % ,p H值为 7.9± 0 .4。其中 3只是能进行自然交配并繁殖了后代的种公兽 ,其体重为 12 2 .7± 7.1kg,睾丸体积为 381.7± 6 4.8cm3,精液活力为 77.3± 5 .8% ,运动状态为 3.0± 0 .5 ,精子畸形率为 18.0± 9.6 % ,顶体正常率为 92 .7± 1.5 % ,p H值为 8.0±0 .1。大熊猫异常精子主要有 :顶体异常 ,卷尾 ,中段弯曲含胞浆小滴 ,中段弯曲无胞浆小滴 ,尾弯曲含胞浆小滴 ,尾弯曲无胞浆小滴 ,近端含胞浆小滴 ,远端含胞浆小滴 8种。在 2月～ 6月都能通过电刺激采集到精液 ,在 4月份每次产精量最高 ,这正好与在这期间发情和交配的大熊猫数量最多相吻合。

大熊猫精液超低温冷冻的比较

对卧龙自然保护区大熊猫研究中心的 9只雄性大熊猫电刺激采精 ,比较研究了稀释液中甘油含量、精液离心、不同稀释液和冷冻方法对大熊猫精液超低温冷冻保存后的活力、运动状态和顶体的影响。稀释液中甘油的含量为 4 %～ 5%较好 ,冻精解冻后的活力和顶体的正常率能保持鲜精的一半。离心和未离心的精液经超低温冷冻 ,解冻后的活力和运动状态都较接近。TEST和SFS两种稀释液的效果没有明显的差异。细管的冷冻过程较颗粒方便、快捷 ,时间容易控制 ,是一种较好的超低温冷冻精液的方法。

大熊猫电刺激采精及精液冷冻保存研究

对卧龙自然保护区大熊猫研究中心的 9只 5 5～ 16 5岁的雄性大熊猫进行了 17次电刺激采精 .其中 3只是能进行自然交配并繁殖了后代的种公兽 .比较研究了精液离心、不同稀释液和冷冻方法对大熊猫精液超低温冷冻保存后的活力、运动状态、精子和顶体形态的影响 .细管冷冻是 1种较好的超低温冷冻精液的方法 .