苦参碱对白血病细胞癌基因和细胞周期调控蛋白表达的影响

目的：探讨在苦参碱诱导下，白血病细胞株Ｋ５６２增殖和分化时相关癌基因及细胞周期调控蛋白表达的改变及意义。方法：应用分子生物学 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ和 Ｄｏｔ Ｂｌｏｔ杂交技术检测人红白血病细胞株 Ｋ５６２在苦参碱作用后的ｃ－ｍｙｃ、Ｎ－ｒａｓ 及 ｐ５３ ｍＲＮＡ表达；同时用 Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ－ＥＣＬ分析苦参碱作用前、后２４、４８、７２，小时Ｋ５６２ 细胞ＣｙｃｌｉｎＤ１，ＣｙｃｌｉｎＥ，Ｃｄｋ２，Ｃｄｋ５的不同表达水平。结果：在增殖的 Ｋ５６２细胞（培养４８小时）中，伴随着 ＤＮＡ合成增加，ＣｙｃｌｉｎＥ和 Ｃｄｋ２保持高表达；而在苦参碱作用２４小时分化启动的细胞中，随着ＤＮＡ合成减少，Ｎ－ｒａｓ、ｐ５３ｍＲＮＡ表达增强； ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达明显受抑；同时 ＣｙｃｌｉｎＤ， Ｃｄｋ５表达增强。结论：苦参碱抑制 Ｋ５６２细胞增殖并诱导分化可能与相关癌基因表达和 ＣｙｃｌｉｎＤ１／Ｃｄｋ５，ＣｙｃｌｉｎＥ／Ｃｄｋ２不同表达有关。

Western blot检测蛋白表达的方法改进及初步应用

目的 探讨Western blotting 增强化学发光法 (ECL )在分析细胞周期调控蛋白表达中的应用。方法 采用K562细胞 ,制备细胞核 ,对电泳、封闭、结合、检测等关键步骤进行了实验条件的摸索和改进 ,并对我室研究苦参碱诱导K562细胞分化机制的细胞周期蛋白的表达进行了分析。结果 3 0 μg核蛋白质即可检测到K562细胞中 ,均有不同程度的CyclinE、Cdk2、CyclinD1、Cdk5表达。结论 Western blotting ECL法特异性强、灵敏度高 ,是分析蛋白质表达较为理想的方法。

细胞周期调控蛋白在K562细胞的表达及意义

探讨细胞周期调控蛋白CyclinD1,CyclinE ,Cdk2 ,Cdk5在K5 6 2细胞增殖和分化时的不同表达。方法 :本实验采用Western -Blotting -ECL方法分析了苦参碱作用K5 6 2细胞前、后 2 4,48,72h ,CyclinD1,Cy cliE ,Cdk2 ,Cdk5的不同表达。结果 :在增殖的K5 6 2细胞中 ,伴随着DNA合成增加 ,CyclinE和Cdk2保持高表达 ;而在分化的细胞中 ,随着DNA合成减少 ,CyclinD1,Cdk5表达增强。结论 :在细胞从增殖向分化途径逆转时 ,伴随着一些特殊的Cyclin/Cdk表达的改变。

Avid Unity网络系统概述及应用

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