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大鼠胎脑神经干细胞HPRT基因的敲除
被引量:
1
1
作者
李雪玲
扈廷茂
john r morrison
《Acta Genetica Sinica》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2004年第1期51-56,共6页
根据已知大鼠次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (HypoxanthineGuaninePhosphoribosylTransferase ,HPRT)基因的外显子序列 ,从大鼠HPRT基因组DNA序列的细菌人工染色体 (BacterialArtificialChromosome ,BAC)中用酶切和PCR方法分别分离得到...
根据已知大鼠次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (HypoxanthineGuaninePhosphoribosylTransferase ,HPRT)基因的外显子序列 ,从大鼠HPRT基因组DNA序列的细菌人工染色体 (BacterialArtificialChromosome ,BAC)中用酶切和PCR方法分别分离得到用于构建基因敲除载体的 3 0kb的 5′长臂 (LongArm ,LA)和 1 7kb的 3′短臂 (ShortArm ,SA) ,并分别克隆到pSL1180和pCR2 1中。进一步构建大鼠HPRT基因打靶载体———pKO HPRT ,经酶切鉴定后的大鼠HPRT基因敲除载体用NotⅠ酶切使其线性化 ,经溴乙锭、正丁醇、酚、酚 /氯仿提纯后 ,将终浓度调至 1μg μl。在FuGene 6转染试剂的作用下转染培养 2 4h的第二代大鼠胎脑神经干细胞 (RatFetalNeuralStemCells,rFNSCs)。转染后的细胞用 80 μg mlG4 18和 0 2 μmol L的Ganc全培养液筛选 ,2w后将存活细胞进行悬浮培养 ,使细胞形成球形物 ,挑选单个的球形物进行单克隆增殖 ,其中一部分细胞 (约 2~ 3× 10 3)用裂解液处理 ,取上清用于PCR检测 ,大部分细胞 (5× 10 7)用于DNA和RNA的提取 ,进行Southernbolt和RT PCR检测 ,剩余细胞冷冻保存。最后 1次实验共分离培养了 32个rFNSCs单克隆 ,其中 3个单克隆 (9 3% )经PCR、Southernbolt和RT
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关键词
大鼠胎脑神经干细胞
基因敲除
次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因
下载PDF
职称材料
大鼠内细胞团和胎儿神经干细胞构建嵌合体的潜力(英文)
2
作者
郭继彤
李雪峰
+6 位作者
Shahnaz Fida
苟克勉
Nakisa Malakooti
ZHANG Chun-fang
john r morrison
Alan O T
r
ounson
DU Zhong-tao
《Zoological Research》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期158-164,共7页
嵌合体大鼠是研究人类疾病的重要动物模型。用囊胚注射法研究了大鼠内细胞团(ICM)和胎儿神经干细胞(FNS)构建嵌合体的潜力。结果发现来自黑色(DA)大鼠第5天(D5)和第6天(D6)囊胚的ICM细胞注入D5 Sprague-Dawley(SD)大鼠囊胚后得到3只嵌...
嵌合体大鼠是研究人类疾病的重要动物模型。用囊胚注射法研究了大鼠内细胞团(ICM)和胎儿神经干细胞(FNS)构建嵌合体的潜力。结果发现来自黑色(DA)大鼠第5天(D5)和第6天(D6)囊胚的ICM细胞注入D5 Sprague-Dawley(SD)大鼠囊胚后得到3只嵌合体大鼠;D5SD大鼠ICM细胞注射入D5DA囊胚后得到4只嵌合体大鼠;而体外培养的DA或SD大鼠ICM细胞注射后均未能获得嵌合体大鼠。本研究用大鼠胎儿神经干细胞(rFNS)和LacZ转染的rFNS构建嵌合体,未能获得嵌合体大鼠;但在LacZ转染的SDrFNS注射到DA大鼠囊胚后发育来的41只胎儿中,有2只胎儿其组织切片中发现少量LacZ阳性细胞。结果表明DA和SD大鼠ICM具有参与嵌合体发育的潜力,但ICM细胞经体外培养后构建嵌合体的潜力显著下降(P<0.05);大鼠胎儿神经干细胞构建嵌合体的潜力较低,可能仅具有参与早期胚胎发育的潜力。
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关键词
大鼠嵌合体
内细胞团
大鼠胎儿神经干细胞
囊胚注射
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职称材料
题名
大鼠胎脑神经干细胞HPRT基因的敲除
被引量:
1
1
作者
李雪玲
扈廷茂
john r morrison
机构
内蒙古大学生命科学学院
MonashInstituteofReproductionandDevelopment
出处
《Acta Genetica Sinica》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2004年第1期51-56,共6页
基金
教育部基金项目 (编号 :0 10 19)~~
文摘
根据已知大鼠次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (HypoxanthineGuaninePhosphoribosylTransferase ,HPRT)基因的外显子序列 ,从大鼠HPRT基因组DNA序列的细菌人工染色体 (BacterialArtificialChromosome ,BAC)中用酶切和PCR方法分别分离得到用于构建基因敲除载体的 3 0kb的 5′长臂 (LongArm ,LA)和 1 7kb的 3′短臂 (ShortArm ,SA) ,并分别克隆到pSL1180和pCR2 1中。进一步构建大鼠HPRT基因打靶载体———pKO HPRT ,经酶切鉴定后的大鼠HPRT基因敲除载体用NotⅠ酶切使其线性化 ,经溴乙锭、正丁醇、酚、酚 /氯仿提纯后 ,将终浓度调至 1μg μl。在FuGene 6转染试剂的作用下转染培养 2 4h的第二代大鼠胎脑神经干细胞 (RatFetalNeuralStemCells,rFNSCs)。转染后的细胞用 80 μg mlG4 18和 0 2 μmol L的Ganc全培养液筛选 ,2w后将存活细胞进行悬浮培养 ,使细胞形成球形物 ,挑选单个的球形物进行单克隆增殖 ,其中一部分细胞 (约 2~ 3× 10 3)用裂解液处理 ,取上清用于PCR检测 ,大部分细胞 (5× 10 7)用于DNA和RNA的提取 ,进行Southernbolt和RT PCR检测 ,剩余细胞冷冻保存。最后 1次实验共分离培养了 32个rFNSCs单克隆 ,其中 3个单克隆 (9 3% )经PCR、Southernbolt和RT
关键词
大鼠胎脑神经干细胞
基因敲除
次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因
Keywords
rat fetal neural stem cells(rFNSCs)
gene knock-out
HPRT gene
分类号
R741 [医药卫生—神经病学与精神病学]
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职称材料
题名
大鼠内细胞团和胎儿神经干细胞构建嵌合体的潜力(英文)
2
作者
郭继彤
李雪峰
Shahnaz Fida
苟克勉
Nakisa Malakooti
ZHANG Chun-fang
john r morrison
Alan O T
r
ounson
DU Zhong-tao
机构
CopyRat Pty Ltd
Monash Immunology and Stem Cell Laboratories
华南师范大学生命科学学院
Monash Animal Service
出处
《Zoological Research》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第2期158-164,共7页
文摘
嵌合体大鼠是研究人类疾病的重要动物模型。用囊胚注射法研究了大鼠内细胞团(ICM)和胎儿神经干细胞(FNS)构建嵌合体的潜力。结果发现来自黑色(DA)大鼠第5天(D5)和第6天(D6)囊胚的ICM细胞注入D5 Sprague-Dawley(SD)大鼠囊胚后得到3只嵌合体大鼠;D5SD大鼠ICM细胞注射入D5DA囊胚后得到4只嵌合体大鼠;而体外培养的DA或SD大鼠ICM细胞注射后均未能获得嵌合体大鼠。本研究用大鼠胎儿神经干细胞(rFNS)和LacZ转染的rFNS构建嵌合体,未能获得嵌合体大鼠;但在LacZ转染的SDrFNS注射到DA大鼠囊胚后发育来的41只胎儿中,有2只胎儿其组织切片中发现少量LacZ阳性细胞。结果表明DA和SD大鼠ICM具有参与嵌合体发育的潜力,但ICM细胞经体外培养后构建嵌合体的潜力显著下降(P<0.05);大鼠胎儿神经干细胞构建嵌合体的潜力较低,可能仅具有参与早期胚胎发育的潜力。
关键词
大鼠嵌合体
内细胞团
大鼠胎儿神经干细胞
囊胚注射
Keywords
Rat chimeras
Inner cell mass
Rat fetal neural stem cells
Blastocyst injection
分类号
Q813 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大鼠胎脑神经干细胞HPRT基因的敲除
李雪玲
扈廷茂
john r morrison
《Acta Genetica Sinica》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2004
1
下载PDF
职称材料
2
大鼠内细胞团和胎儿神经干细胞构建嵌合体的潜力(英文)
郭继彤
李雪峰
Shahnaz Fida
苟克勉
Nakisa Malakooti
ZHANG Chun-fang
john r morrison
Alan O T
r
ounson
DU Zhong-tao
《Zoological Research》
CAS
CSCD
北大核心
2009
0
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