链霉菌分化关键基因——whiG在大肠杆菌的克隆和高表达

whiG结构基因翻译起始位点邻近的序列区域被改造了6个碱基。利用聚合酶链式反应(PCR)扩增了该基因,序列分析验证了改造后的整个DNA序列,并定向克隆到大肠杆菌高效表达载体pET11c的T7噬菌体10启动子的下游,转化可被IPTG诱导产生T7 RNA聚合酶的受体菌株——大肠杆菌BL21(DE3)。诱导后的重组菌株,经蛋白提取,SDS-PAGE结果表明whiG在大肠杆菌中获得了高效表达,其表达量约为不溶性蛋白总量的20％。经抗体制备,Western杂交证明了高效表达的产物确是whiG的编码产物——σ^(whiG)。whiG基因被亚克隆到链霉菌的表达质粒载体pIJ6021,转化天蓝色链霉菌孢子形成缺陷突变株C71后,使其能恢复孢子的形成,进一步证明了改造后的whiG基因的生物学功能。