钛颗粒负荷对切应力作用下骨髓间质干细胞F-actin表达和DNA含量的影响

假体磨损碎屑颗粒是引起假体 -骨界面无菌性炎症和骨溶解而致全关节置换术失败的主要原因之一。磨屑颗粒所诱发的骨溶解须有周围骨组织中成骨细胞分泌足够的骨基质以弥补丢失的骨量 ,而成骨细胞正常的数量和质量有赖于其来源骨髓祖细胞 -骨髓间质干细胞的正常增殖分化能力的维持。为了探讨磨屑钛颗粒对大鼠骨髓间质干细胞 (Rat MSCs,r MSCs)产生细胞毒性的可能细胞分子机制 ,选用健康 3月龄 SD雄性大鼠 ,采用 Percoll等密度梯度离心法分离获取 r MSCs,经体外传代纯化培养后 ,与不同直径、不同负荷浓度、不同负荷作用时间的钛颗粒悬液共孵育 ,再采用精准的流室系统对钛颗粒负荷的 r MSCs施加一定的流体剪切应力 (Fluid shear stress,FSS)后立刻固定细胞 ,经免疫荧光抗体染色 ,结合激光共聚焦显微镜技术和图像分析软件定性定量分析 r MSCs F-actin表达和 DNA含量的变化情况。同时设置相应的未经钛颗粒孵育的 r MSCs细胞为对照组细胞。结果显示 ,切应力作用可上调 r MSCs胞内 F- actin的表达。亚微 (Subm icron)直径 (0 .9μm)的钛颗粒负荷对 r MSCs F- actin表达和 DNA含量的抑制作用最为显著 ,并伴有凋亡小体出现 ;直径为 2 .7μm的钛颗粒负荷产生的抑制作用略为减弱 ,而较大直径 (6 .9μm)的抑制效应最?

ACL和MCL细胞mRNA差异显示研究初步报告

目的 :研究ACL和MCL细胞在mRNA表达水平上的差别。方法 :培养人ACL和MCL细胞 ,提取总RNA ,用mRNA差异显示技术寻找ACL和MCL细胞在mRNA表达水平上的差异表达带 ,将有差异的条带回收、扩增、克隆化及ReverseNorthern杂交 ,筛选出阳性克隆进行cDNA测序并进行NCBI基因数据库分析。结果 :在ACL和MCL细胞之间找到 6个差异表达的基因 ,分别为C4M2 ,C1A1,A4M1,A1A2 ,G4A1,C7A2。结论 :ACL和MCL细胞在基因表达水平上有区别 ,已找到的基因可作为探针筛选cDNA文库进一步研究其功能。