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利用重叠延伸PCR和同源重组克隆技术制备HLA-A* 0201/HBc18-27单链三分子复合体
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作者 许涛 李晓娥 +4 位作者 吴优 khawar ali shahzad 王伟 张雷 沈传来 《东南大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2016年第6期825-831,共7页
目的:构建和表达HLA-A*0201/HBc18-27单链三分子复合体。方法:利用重叠延伸PCR将HBc18-27、(Gly4Ser)3、β2m、(Gly4Ser)4和HLA-A*0201胞外区依次串联为单链三聚体(single-chain trimer,SCT)融合基因,通过同源重组克隆技术插... 目的:构建和表达HLA-A*0201/HBc18-27单链三分子复合体。方法:利用重叠延伸PCR将HBc18-27、(Gly4Ser)3、β2m、(Gly4Ser)4和HLA-A*0201胞外区依次串联为单链三聚体(single-chain trimer,SCT)融合基因,通过同源重组克隆技术插入到pET28a原核表达载体,用异丙基β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,采用金属螯合亲和层析法纯化目的蛋白,通过稀释复性法折叠成HLA-A*0201/HBc18-27的复合单体,并生物素化,将单体包被到直径4.5μm的磁性微球,用构象特异性单抗(W6/32)进行荧光染色,流式细胞术分析其空间构象。结果:pET28a-HLA-A*0201/HBc18-27基因序列和蛋白大小与预测一致;纯化后融合蛋白纯度约93%;流式细胞术分析显示pET28a-HLA-A*0201/HBc18-27单体具有正确的空间构象。结论:利用重叠延伸PCR和同源重组克隆技术成功制备了HLA-A*0201/HBc18-27的单链复合体,无需限制性内切酶和连接酶,发展了主要组织相容性单链复合体技术,有效简化了pMHCⅠ类分子的制备过程。 展开更多
关键词 重叠延伸聚合酶链式反应 同源重组 主要组织相容性复合体
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人类白细胞抗原-B等位基因多态性与江苏地区汉族人群2型糖尿病的相关性研究 被引量:9
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作者 夏玲芝 曹鹏 +5 位作者 李晓娥 许涛 khawar ali shahzad 毛源 张厚智 沈传来 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第6期37-44,共8页
目的探讨人类白细胞抗原(HLA-B)等位基因多态性与江苏地区汉族人群2型糖尿病的相关性。方法采用聚合酶链反应直接测序分型法(PCR-SBT)对118例江苏地区汉族2型糖尿病(T2DM)个体进行HLA-B等位基因分型,计算各等位基因频率和血清型频... 目的探讨人类白细胞抗原(HLA-B)等位基因多态性与江苏地区汉族人群2型糖尿病的相关性。方法采用聚合酶链反应直接测序分型法(PCR-SBT)对118例江苏地区汉族2型糖尿病(T2DM)个体进行HLA-B等位基因分型,计算各等位基因频率和血清型频率,并与中华骨髓库江苏分库汉族志愿者人群(644例和20 248例)进行统计学比较。结果 HLA-B*1501的等位基因频率在江苏地区汉族T2DM人群中明显升高(8.90%vs 3.03%,Pc=0.000,^OR=3.13,95%CI=1.80~5.42,Power=98.23%),而HLA-B*5801的等位基因频率则明显下降(1.69%vs 8.62%,Pc=0.000,^OR=0.18,95%CI=0.07~0.50,Power=91.07%);相对应地,HLA-B*15的血清型频率在江苏地区汉族T2DM人群中明显升高(21.18%vs 13.03%,Pc=0.022,^OR=1.79,95%CI=1.26~2.55,Power=90.15%),而HLA-B*58的血清型频率则明显下降(1.69%vs 8.62%,Pc=0.000,^OR=0.18,95%CI=0.07~0.50,Power=91.09%)。结论 HLA-B*1501等位基因可能与江苏地区汉族人群2型糖尿病的易感性有关,而HLA-B*5801则可能有保护作用。这些结果首次提示HLA-I类基因多态性可能与中国人群2型糖尿病有关。 展开更多
关键词 2型糖尿病 HLA-B 等位基因多态性 PCR-SBT
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The roles of focal adhesion and cytoskeleton systems in fluid shearstress-induced endothelial cell response 被引量:1
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作者 khawar ali shahzad ZHONGJIE QIN +1 位作者 YAN LI DELIN XIA 《BIOCELL》 SCIE 2020年第2期137-145,共9页
Focal adhesions are polyproteins linked to extracellular matrix and cytoskeleton,which play an important role in the process of transforming force signals into intracellular chemical signals and subsequently triggerin... Focal adhesions are polyproteins linked to extracellular matrix and cytoskeleton,which play an important role in the process of transforming force signals into intracellular chemical signals and subsequently triggering related physiological or pathological reactions.The cytoskeleton is a network of protein fibers in the cytoplasm,which is composed of microfilaments,microtubules,intermediate filaments,and cross-linked proteins.It is a very important structure for cells to maintain their basic morphology.This review summarizes the process of fluid shear stress transduction mediated by focal adhesion and the key role of the cytoskeleton in this process,which focuses on the focal adhesion and cytoskeleton systems.The important proteins involved in signal transduction in focal adhesion are introduced emphatically.The relationship between focal adhesion and mechanical transduction pathways are discussed.In this review,we discuss the relationship between fluid shear stress and associated diseases such as atherosclerosis,as well as its role in clinical research and drug development. 展开更多
关键词 CYTOSKELETON ENDOTHELIAL cells Fluid SHEAR STRESS FOCAL adhesion
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