人类重组PIF1解螺旋酶C-末端多肽的纯化及其抗体制备

目的:表达纯化人类PIF1解螺旋酶C-末端的338-641氨基酸的多肽PIF338-641,同时用纯化蛋白制备特异抗体。方法:从HeLa细胞的cDNA文库中PCR扩增得到PIF1解螺旋酶C-末端1012-1926的cDNA片段(对应氨基酸338-641),插入N-末端融合有六聚组氨酸的表达载体pET15b产生pET15b-PIF338-641重组质粒,转化RosettaTM2(DE3)感受态细胞,使PIF338-641蛋白在大肠杆菌中表达,用自制的镍亲和柱纯化PIF338-641蛋白,并以纯化蛋白免疫家兔制备抗血清。结果:PIF338-641蛋白在大肠杆菌中成功表达,纯化了PIF338-641蛋白并制备了PIF338-641蛋白抗血清。结论:制备的PIF338-641蛋白抗体能与蛋白发生特异的免疫反应。