转化生长因子-β_1对鼠肝细胞凋亡调控作用的研究

目的 :本研究旨在明确正常肝和肝硬化肝细胞中转化生长因子 β1(TGF β1)的作用及其与凋亡的关系。 方法 :通过 5 0 %四氯化碳 (CCl4)腹腔注射诱发BALB/c小鼠形成肝硬化模型 ;应用改良的胶原酶原位灌注法分离正常和肝硬化小鼠的肝细胞 ;利用 1.5 %的琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带 ,并应用DNA荧光染料Hoechst33342对正常肝细胞进行染色 ,以检测TGF β1诱导的凋亡。 结果 :以胶原酶原位二步灌流法分离肝细胞的活率为 95 .2 %。正常肝细胞予以TGF β1处理后 ,应用 1.5 %的琼脂糖凝胶电泳可以发现具有凋亡特征的梯形条带。硬化肝细胞则很少出现梯形条带。经TGF β1处理的正常肝细胞应用Hoechst染色发现 ,其凋亡率明显高于未处理组。 结论 :肝硬化肝细胞不能像正常肝细胞那样发生TGF β1诱导的凋亡 。

TGF-β1诱导鼠肝细胞凋亡信号转导机制的研究

目的:本研究旨在明确转化生长因子β1(TGF-β1)诱导鼠肝细胞凋亡与caspase-3及caspase-8的关系。方法:通过50%CCl4腹腔注射,用8W时间诱发BALB/c小鼠形成肝硬化模型。应用改良的胶原酶原位灌注法分离小鼠的肝细胞。为检测TGFβ1(5ng/ml)诱导的凋亡,利用1.5%的琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带,应用DNA荧光染料Hoechst33342对正常肝细胞进行了染色,并在荧光显微镜下观察比较caspase3和caspase8在TGF-β1诱导的凋亡中的作用。结果:胶原酶原位二步灌流法分离肝细胞活率为95.2%。正常肝细胞予以TGFβ1处理后,应用1.5%的琼脂糖凝胶电泳可以发现具有凋亡特征的梯形条带。硬化肝细胞则很少出现梯形条带。经TGFβ1处理的鼠正常肝细胞应用Hoechst染色发现,其凋亡率明显高于未处理组,分别为58.76%和18.03%,两组具有明显的差别。但凋亡可以被caspase3和caspase8抑制剂阻止。结论:硬化肝细胞不能象正常肝细胞那样发生TGF-β1诱导的凋亡,提示硬化肝细胞的抑制性生长调控机制已受损。TGF-β1通过caspase-8和caspase-3的活化诱导鼠肝细胞产生凋亡。

TGF-β1诱导鼠肝细胞凋亡信号转导机制的研究

目的 本研究旨在明确TGF β1诱导鼠肝细胞凋亡与Caspase 3及Caspase 8的关系。方法 通过 5 0 %CCl4腹腔注射 ,用 8周时间诱发BALB/c小鼠形成肝硬化模型。应用改良的胶原酶原位灌注法分离小鼠的肝细胞。为检测TGF β1(5ng/ml)诱导凋亡 ,利用 1.5 %的琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带 ,应用DNA荧光染料Hoechst 33342对正常肝细胞进行染色 ,并在荧光显微镜下观察比较Caspase 3和Caspase 8在TGF β1诱导的凋亡中的作用。 结果 胶原酶原位二步灌流法分离肝细胞活率为 95 .2 %。正常肝细胞予以TGF β1处理后 ,应用 1.5 %的琼脂糖凝胶电泳可以发现具有凋亡特征的梯形条带。硬化肝细胞则很少出现梯形条带。经TGF β1处理的鼠正常肝细胞应用Hoechst染色发现 ,其凋亡率明显高于未处理组 ,分别为 5 8.76 %和 18.0 3% ,两组具有明显的差别。但凋亡可以被Caspase 3和Caspase 8抑制剂阻止。 结论 硬化肝细胞不能象正常肝细胞那样发生TGF β1诱导的凋亡 ,提示硬化肝细胞的抑制性生长调控机制已受损。TGF β1通过Caspase 3和Cas pase 8的活化诱导鼠肝细细胞产生凋亡。

TGF-β1诱导人肝癌细胞系凋亡信号转导机理的研究

目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝癌细胞系凋亡及其与p53基因及Smad4的关系。方法选用3种含有不同p53基因状态的人肝癌细胞系,均分为TGF-β1诱导组(实验组)和对照组;应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)对TGF-β1诱导的肝癌细胞的凋亡进行定量检测;另外,应用Lipofectamine2000把含有Smad4结合元件和荧光素酶基因的TGF-β1可诱导的荧光素酶报告质粒对细胞进行转染,再经TGF-β1作用,分别检测其相对荧光素酶活性。结果在应用TUNEL检测的3个细胞系中,TGF-β1能诱导HepG2细胞(野生型p53)凋亡,其细胞凋亡率实验组明显高于对照组(P<0.05);而Huh-7(突变型p53)和Hep3B细胞(缺失型p53)凋亡细胞较少,其细胞凋亡率实验组与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。荧光素酶检测提示,HepG2细胞的Smad4表达活性实验组明显高于对照组(P<0.05);而Huh-7和Hep3B细胞的Smad4表达较低,实验组与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论HepG2细胞系比Huh-7和Hep3B细胞系更易发生TGF-β1诱导的凋亡,Smad4是TGF-β1信号转导途径的主要调控因子之一。

TGF-β1对人肝癌细胞系凋亡的调控作用研究

目的 本研究旨在明确人肝癌细胞系中TGF β1的作用及其与凋亡的关系。 方法 本研究选用了 3种含有不同 p5 3基因状态的人肝癌细胞系 ,应用TUNEL技术对TGF β1诱导的肝癌细胞的凋亡进行了定量检测。结果 TGF β1仅能诱导HepG2细胞 (野生型p5 3)凋亡 ,这提示凋亡与 p5 3基因的表达具有明确的联系。结论 HepG2细胞系比Huh 7和Hep3B系细胞更易发生TGF β1诱导的凋亡 ,TGF β1通过p5

TGF-β1诱导肝硬化小鼠肝细胞凋亡信号转导机制的研究

目的 探讨TGF β1诱导肝硬化小鼠肝细胞凋亡与caspase 3及caspase 8的关系。 方法 用改良的胶原酶原位灌注法分离肝硬化模型小鼠肝细胞。观察比较caspase 3和caspase 8在TGF β1诱导的凋亡中的作用。结果 胶原酶原位二步灌流法分离肝细胞活率为 95 .2 %。正常肝细胞经TGF β1处理后 ,电泳可发现具有凋亡特征的梯形条带 ,肝硬化肝细胞则很少出现梯形条带。经TGF β1处理的鼠正常肝细胞凋亡率 ( 5 8.76% )明显高于未处理组 ( 18.0 3 % )。但凋亡可以被caspase 3抑制剂 (DEVD CHO )和caspase 8抑制剂 (Z IETD FMK )阻止。结论 硬化肝细胞不能象正常肝细胞那样发生TGF β1诱导的凋亡 ,提示硬化肝细胞的抑制性生长调控机制已受损。TGF β1可通过caspase 8和caspase 3的活化诱导鼠肝细胞产生凋亡。

转化生长因子-β1对鼠肝细胞凋亡的调控研究

目的 探讨正常和硬化肝细胞中转化生长因子 (TGF) β1的作用及其与凋亡的关系。方法 应用胶原酶原位灌注法分离正常和肝硬化小鼠的肝细胞。利用 1.5 %的琼脂糖凝胶电泳及Hoechst 3 3 3 42对正常肝细胞进行染色来检测TGF β1(5 μg/L)诱导的凋亡。 结果 胶原酶原位灌流法分离肝细胞的活率为 95 .2 0 %。电泳发现正常肝细胞具有梯形条带 (5 5 .0 0 % ) ,硬化肝细胞则很少出现 (18.75 % )。应用Hoechst染色发现 ,正常肝细胞的凋亡率 (5 8.0 3 % )明显高于未处理组(18.76% ,P <0 .0 5 )。结论 硬化肝细胞的抑制性生长调控机制已受损。