Kuzbanian基因非放射性原位杂交探针制备

目的研究制备地高辛(DIG)标记的Kuzbanian(KUZ)基因非放射性原位杂交探针,用于检测转基因动物、正常组织KUZ基因的表达。方法用体外转录法依自构建质粒pcDNA-KUZFL(质粒:6.0kb;探针:623bp)和pcDNA-KUZDN(质粒:5.8kb;探针:360bp)制备反义链与正义链DIG标记cRNA探针。结果用转基因模型阳性与阴性对照品系动物小鼠胰岛组织非放射性原位杂交实验,证实制备探针具有较高的特异性和敏感性。结论DIG标记KUZ基因杂交探针的成功制备,为进一步研究有关转基因动物的KUZ基因的分布和表达以及为正常组织KUZ基因的有关研究提供了实验基础。

STAT-3基因腺病毒介导感染ARIP、AR42J细胞的表达

目的:探测4种腺病毒液在胰腺源ARIP、AR42J细胞中的表达,为基因改造干预干细胞分化治疗糖尿病的进一步研究提供基础。方法:①扩增、纯化STAT-3 WT、STAT-3 DN、STAT-3 CA、STAT-3 GF 4种质粒;脂质体转染法转染质粒进入人胚肾293腺病毒包装细胞系,Hela细胞作为包装细胞的对照细胞。②生产含4种基因组合的腺病毒,腺病毒检测、鉴定。③常规与盖玻片法ARIP、AR42J等细胞培养;含目的基因的腺病毒液感染目标细胞。④荧光显微镜观察感染后细胞的基因表达。结果:STAT-3腺病毒基因载体生产了较高滴度(病毒滴度为6 X106pfu/ml)的腺病毒,用含目的基因的腺病毒对靶细胞感染3 d后,荧光显微镜观察到ARIP等细胞中绿色荧光蛋白成功、高效的阳性表达报告。结论:腺病毒介导STAT-3 WT、STAT-3 DN、STAT-3 CA、STAT-3 GF进入ARIP细胞的良好表达为STAT-3基因改造病毒感染干预干细胞分化的进一步相关研究提供了重要依据。

糖稳态调节细胞定向分化的基因改造方案探讨

目的:探索糖稳态调节细胞定向分化的基因改造方案思路。方法:①研究构建的解除干细胞分化抑制状态的信号传导与转录激活因子-3(STAT-3)基因载体,检测其介导目的基因感染AR IP等细胞基因表达;②研究构建的活化配体DL诱导N信号、在“旁侧抑制”过程中扮演重要角色的Kuzban ian(KUZ)基因载体在转基因小鼠表达后糖稳态调节细胞的分化。结果:在完成的STAT-3腺病毒基因载体生产了腺病毒,用带有目的基因的腺病毒对AR IP靶细胞进行感染,3 d后,荧光显微镜观察时,活细胞、固定液固定细胞均看到了构建基因中绿色荧光蛋白成功、高效的阳性表达报告。在完成的Kuzban ian(KUZ)基因载体构建、转基因、动物模型、小鼠品系鉴定后,用非放射性原位杂交实验对胰腺靶细胞的mRNA进行检测,获得了预期的阳性结果。结论:通过用某些分化抑制性基因的显性失活形式(DN)竞争性预先解除干细胞分化的抑制状态,然后再定向分化诱导使之朝向期望的目标细胞方向分化,可能是糖稳态细胞定向分化的可行途径之一。

股骨头骨骺滑脱症髋臼后倾、深度及覆盖度的匹配队列研究

股骨头骨骺滑脱症(slipped capital femoral epiphysis,SCFE)病因多样,股骨后倾、股骨及髋臼解剖形态变化等因素被认为是SCFE发生的原因之一。有研究报道SCFE患者的股骨头髋臼覆盖度及深度增大,然而学术界对髋臼后倾与SCFE之间是否存在必然联系尚无定论,单侧SCFE患者对侧未患病髋关节的髋臼形态及其与对侧滑脱进展之间的关系也仍存在争议。本研究的目的在于探究髋臼深度、股骨头髋臼覆盖度以及髋臼翻转情况在SCFE患者患侧、健侧以及健康人群髋关节之间是否存在差异。

环境空气污染与心脏形态功能表型的关系

暴露于环境空气污染与心血管病的发病率和死亡率增加密切相关，但关于空气污染物对心脏结构和功能的影响知之甚少。研究者的目的是在考虑潜在的混杂因素后，研究既往长期暴露于交通相关污染物与心室容积／射血分数和左心室重塑模式之间的关系。