Trichloroethylene改变融合期内皮细胞一氧化氮和氧自由基的平衡(英文)

【目的】Trichloroethylene(TRI)是一种与先天性心脏病发生有关的环境污染物,我们最近报道在分裂期的内皮细胞(EC)中,TRI可以通过减少热休克蛋白90(hsp90)与内皮一氧化氮合酶(eNOS)结合,从而抑制刺激状态下一氧化氮(NO)产生和增加刺激状态下eNOS依赖的超氧阴离子自由基()产生和抑制血管内皮生长因子刺激的内皮细胞分裂。但TRI在融合期EC中的影响仍未清楚。本实验目的是探讨TRI对融合期EC的影响。【方法】TRI5μmol/L预处理融合期EC,用钙离子导体A231875μmol/L刺激,然后,检测NO与的产生以了解EC和eNOS的功能情况。用免疫印迹方法检查eNOS,位点于丝氨酸1179的磷酸化eNOS,与eNOS结合的hsp90水平来决定eNOS的激活状态。【结果】TRI减少A23187刺激状态下亚硝酸盐和硝酸盐的产生从(1.16±0.15)nmol·mg-1到(0.91±0.3)nmol·mg-1(P<0.05);在对照情况下,L-NAME增加A23187刺激状态下的产生从(0.015±0.007)nmol/(min·mg)到(0.044±0.008)nmol/(min·mg)(P<0.05);在TRI处理的培养中,L-NAME减少A23187刺激状态下的产生从(0.057±0.022)nmol/(min·mg)到(0.039±0.005)nmol/(min·mg)(P<0.05),并且oxypurinol减少A23187刺激状态下的产生从(0.057±0.022)nmol/(min·mg)到(0.034±0.012)nmol/(min·mg)(P<0.05);

热休克蛋白90调节内皮一氧化氮合酶(一个新近认识的心血管疾病调节物)(英文)

阐述热休克蛋白90(hsp90)作为一个心血管疾病新的调节物,在调节内皮一氧化氮合酶(eNOS)功能方面的作用:血管内皮一氧化氮(NO)主要来源于eNOS;eNOS同时有产生NO和氧阴离子自由基()的功能。NO与的平衡在调节心血管方面有着重要的作用,当这个平衡被打破时可导致多种心血管疾病的发生发展;实验发现,当hsp90与eNOS结合增加时,eNOS耦联产生NO,当hsp90与eNOS结合减少或结合后无发生结构改变时eNOS非耦联产生。进而提出深入探讨hsp90调节eNOS机制的必要性。-.O2-.O2-.

Angiostatin损伤内皮细胞功能的机制

目的Angiostatin(AS)是一种具有抑制血管生成和抗肿瘤作用的物质。本实验探讨AS损伤内皮功能的机理。方法采用牛主动脉内皮细胞(Bovineaorticendothelialcells.BAEC)做细胞培养,用AS120nmol/L孵育BAEC15min,然后①用氯化钒Ⅲ臭氧化学发光法测量一氧化氮(NitricOxide,NO)的产量;②用超氧化物歧化酶可抑制的铁化细胞色素C还原法测量氧自由基(SuperoxideAnion,O·2-)的产量;③用Western印迹和免疫沉淀法测量磷酸化内皮一氧化氮合酶(phosphorylationofendothelialnitricoxidesynthase.P-eNOS)、内皮一氧化氮合酶(endothelialnitricoxidesynthase.eNOS)、热休克蛋白90(heatshockprotein90,hsp90)的表达及eNOS与hsp90结合情况。结果AS可抑制BAECNO的产生,而增加eNOS来源的O2·-产生,对P-eNOS,eNOS和hsp90的表达无影响,但可减少hsp90与eNOS的结合。结论AS可以阻止hsp90与eNOS结合,使eNOS非偶联,破坏NO与O·2-的平衡,从而损伤内皮细胞功能,这可能是AS抗血管生成和抗肿瘤作用的机理,为将来AS应用于临床提供理论依据。

L-4F抑制低密度脂蛋白对热休克蛋白90的影响

目的探讨L-4F(一载脂蛋白A-I类似物)能否抑制低密度脂蛋白(lowdensitylipoprotein,LDL)对热休克蛋白90(heatshockprotein90,hsp90)与内皮一氧化氮合酶(endothelialnitricoxidesynthase,eNOS)结合的影响和LDL诱导的脂质氢过氧化物产生的增加。方法采用牛主动脉内皮细胞(bovineaorticendothelialcells,BAEC)进行细胞培养,用LDL6.2mmol/L和/或L-4F10μg/ml处理细胞24小时,然后,①分对照、L-4F、A23187(钙离子导体)、L-4F+A23187、LDL、LDL+L-4F、LDL+A23187、LDL+A23187+L-4F8组,用免疫沉淀法测定磷酸化内皮一氧化氮合酶(phosphorylationofeNOS,P-eNOS)、eNOS和hsp90的表达和结合情况;②用Auerbach法测定有BAEC和无BAEC情况下LDL诱导的脂质氢过氧化物的产生情况。结果①LDL减少A23187刺激状态下的BAEC的hsp90与eNOS的结合,而经L-4F预处理的LDL对hsp90与eNOS结合无抑制作用;②在无BAEC情况下,L-4F稍微抑制LDL诱导的脂质氢过氧化物的产生,然而在BAEC培养情况下,L-4F可以明显抑制LDL诱导的脂质氢过氧化物的产生。结论L-4F可以阻止LDL对hsp90与eNOS结合的抑制,并可能与L-4F抑制脂质氢过氧化物的产生有关,这可能是L-4F保护内皮细胞功能、抑制动脉粥样硬化形成的一个重要机制。

L-4F明显改善脂蛋白氧化张力下的血管舒张功能

目的 探讨L 4F(一种载脂蛋白A 1类似物 )能否改善脂蛋白氧化张力下内皮依赖的血管舒张功能。方法 实验分三部分 ,均采用小鼠的颈内动脉作乙酰胆碱诱导下的内皮依赖血管舒张功能试验。第一部分采用C5 7BL6小鼠 ,分 2组 :对照组用PBS液 1L/L、L 4F组用L 4F 10mg/L预处理血管 30min。第二部分采用C5 7BL6小鼠 ,分 3组 ,对照组用RPMI 16 4 0培养液 10 0ml/L、低密度脂蛋白 (lowdensitylipoprotein ,LDL)组用LDL 10 0mg/L、LDL +L 4F组用LDL 10 0mg/L +L 4F 1mg/L预处理血管 30min。第三部分分 3组 ,对照组采用C5 7BL6小鼠 ,不作处理 ,高胆固醇血症组和L 4F组均采用低密度脂蛋白受体缺乏小鼠 ,用高脂、高胆固醇喂养 4周 ,其中高胆固醇血症组同时用生理盐水 10ml·kg-1·d-1腹膜腔内注射 (L 4F组用L 4F 1mg·kg-1·d-1)。结果 (1)L 4F本身对内皮依赖的血管舒张功能没有影响 ;(2 )L 4F可以部分改善低密度脂蛋白对内皮依赖的血管舒张功能的抑制 ;(3)L 4F可以明显改善高胆固醇血症对内皮依赖的血管舒张功能的损害 ,达到与对照组的血管舒张功能无区别。结论 L 4F可明显改善脂蛋白氧化张力下内皮依赖的血管舒张功能 。