IS6110限制性片段多态性分析标准方法的建立及其在结核分枝杆菌分子分型中的应用

目的建立IS6110限制性片段多态性分析（IS6110一RFLP）标准方法并评价该方法的分型能力。方法采用核酸提取、PCR、限制性内切酶分析、Southern杂交、琼脂糖凝胶电泳等技术，结合Gel—Proanalyzer3．1和BioNumerics（Version5．0）软件，对78株结核分枝杆菌插入序列IS6110-RFLP进行分析。结果确定标准化的IS6110-RFLP技术，包括核酸提取、PCR、限制性内切酶分析、Southern杂交、琼脂糖凝胶电泳等实验步骤及标化参数的相关数据分析软件的使用；采用该技术，将78株结核分枝杆菌分为75个不同的基因型，分别归属于11个基因簇，其中有52株归属于同一个基因簇，占菌株总数的66．7％（52／78）。结论建立标准化的IS6110-RFLP技术方案，该方法具有很强的基因分型和株水平鉴定能力，可用于结核病的病原学监测。