日本血吸虫新抗原基因的筛选、克隆、表达和免疫效果研究

为了寻找日本血吸虫(Schistosomajaponicum,Sj) 新的疫苗候选基因并进行免疫效果研究,用Sj雌虫抗原免疫家兔制备血清,对Sj成虫cDNA文库进行免疫筛选,将获得的新基因(命名为Sj-F1,GenBank登录号为AY261995) 克隆入原核表达载体pTWIN1和真核表达载体pcDNA3,经PCR、限制性酶切筛选和鉴定阳性重组子. 将pTWIN1/Sj-F1质粒转化大肠杆菌ER2566,在低温和低IPTG浓度下诱导表达可溶性重组融合蛋白(rSj-F1/intein2),并经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blot)分析鉴定. 将pcDNA3/Sj-F1质粒转化大肠杆菌ER2502,大量制备DNA疫苗. 用重组融合蛋白和DNA疫苗免疫小鼠,末次免疫后2周用Sj尾蚴进行攻击感染. 感染后42天剖杀冲虫,计算减虫率和减卵率. 感染前采血用ELISA法检测抗体. 免疫保护效果测定显示:重组蛋白疫苗以FCA作佐剂经皮下免疫和以壳聚糖作佐剂经粘膜免疫分别获得了28.07%、24.69%的减虫率和48.30%、46.38%的减卵率;DNA疫苗(pcDNA3/Sj-F1)单独免疫获得了18.47%的减虫率和35.06%的减卵率;用DNA疫苗启动免疫后用重组蛋白疫苗经皮下加强免疫,减虫率和减卵率分别提高到了40.42%和56.17%;用DNA疫苗启动免疫后用重组蛋白疫苗经黏膜加强免疫,减虫率和减卵率增高更明显,分别提高到了42.38%和62.

两种佐剂对日本血吸虫重组抗原SjGST-Sj32保护效果的影响

目的比较弗氏完全佐剂（FCA）与单磷脂A（MPL）的免疫增强作用，为提高重组SjGST-Sj32（SjGST-Sj32）的疫苗效果提供依据。方法SjGST-Sj32加弗氏完全佐剂（SjGST-Sj32＋FCA）或单磷脂A（SjGST-Sj32＋MPL）免疫小鼠3次，ELISA法检测抗体水平，用减虫率及减卵率表示保护性作用。结果与PBS对照组相比，SjGST-Sj32加FCA或MPL，免疫BALBC／c小鼠减虫率分别为48．8％（P＜0．01）和44．1％（P＜0．01）；每克肝卵（LEPG）减少率分别为59．4％（P＜0．01）和46．2％（P＜0．01）；SjGST-Sj32＋FCA组抗体滴度达1：204800（P＜0．05），而SjGST-Sj32＋MPL组抗体滴度为1：51200（P＜0．05）。结论FCA和MPL均可以增强对SjGST-Sj32免疫小鼠的抗感染保护性免疫力；FCA也可增强SjGST-Sj32诱导小鼠抗生殖免疫，而MPL似不具明显增强SjGST-Sj32的抗生殖免疫作用。佐剂MPL在提高免疫小鼠体液免疫应答方面稍逊于经典佐剂FCA。