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牛星状病毒和牛诺如病毒双重PCR检测方法的建立及应用 被引量:4
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作者 王文佳 邓廷贤 +5 位作者 徐照学 张彬 孟红丽 王亚州 兰亚莉 师志海 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期786-790,共5页
为建立能同时快速检测牛星状病毒(BAstV)和牛诺如病毒(BNoV)的方法,本研究根据BAstV ORF1a基因和BNoV RdRp基因设计了2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了能够同时检测BAstV和BNoV的双重PCR方法。特异性试验结果显示,该方法对牛轮状... 为建立能同时快速检测牛星状病毒(BAstV)和牛诺如病毒(BNoV)的方法,本研究根据BAstV ORF1a基因和BNoV RdRp基因设计了2对特异性引物,通过优化反应条件,建立了能够同时检测BAstV和BNoV的双重PCR方法。特异性试验结果显示,该方法对牛轮状病毒等5种犊牛腹泻常见病原的扩增结果均为阴性,仅BAstV和BNoV扩增结果为阳性,特异性较强;敏感性试验结果显示,该方法对BAstV和BNoV重组质粒的最低检测限分别为1.09×10^3拷贝/μL和1.42×10^3拷贝/μL,敏感性较高;批内和批间试验结果一致,该方法重复性好。利用该方法和各病原单一PCR方法同时对221份河南省犊牛腹泻粪便样品进行检测,BAstV和BNoV的阳性检出率分别为18.1%和9.96%,两种方法符合率为100%。本研究在国内首次建立了检测BAstV和BNoV的双重PCR方法,其特异性强,敏感性高,重复性好,为BAstV和BNoV的鉴别检测及其分子流行病学调查提供了技术支持。 展开更多
关键词 牛星状病毒 牛诺如病毒 犊牛腹泻 双重PCR
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牛诺如病毒及牛嵴病毒双重PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:9
2
作者 师志海 徐照学 +1 位作者 兰亚莉 王文佳 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第1期28-32,共5页
本研究根据BNoV和BKoV基因组的保守区域设计2对特异性引物,建立了能同时检测牛诺如病毒(Bovine norovirus,BNo V)和牛嵴病毒(Bovine kobuvirus,BKo V)的双重PCR检测方法。该方法能特异性扩增BNo V和BKo V的目的条带,且未扩增出其他犊牛... 本研究根据BNoV和BKoV基因组的保守区域设计2对特异性引物,建立了能同时检测牛诺如病毒(Bovine norovirus,BNo V)和牛嵴病毒(Bovine kobuvirus,BKo V)的双重PCR检测方法。该方法能特异性扩增BNo V和BKo V的目的条带,且未扩增出其他犊牛腹泻病毒性病原;BNoV和BKoV的最低检测限分别为5.39×105 copies/μL和2.23×106 copies/μL;对临床采集的127份犊牛腹泻样品检测结果显示,BNoV的阳性率为6.30%(8/127),BKoV的阳性率为4.72%(6/127),两者与单一PCR检测结果相一致,符合率为100%。本研究建立的双重PCR方法具有良好的敏感性、特异性、重复性,可用于BNoV和BKoV的快速检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 牛诺如病毒 牛嵴病毒 犊牛腹泻 双重PCR
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牛环曲病毒河南分离株的遗传进化分析 被引量:10
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作者 师志海 徐照学 +1 位作者 兰亚莉 王文佳 《动物医学进展》 北大核心 2019年第10期28-31,共4页
2018年在河南地区规模化牛场进行犊牛腹泻流行病学调查时,在粪便样品中检测到4株牛环曲病毒,分别命名BToV/CH/HN-1、BToV/CH/HN-2、BToV/CH/HN-3和BToV/CH/HN-4。对4个毒株的M基因进行克隆、测序与分析,结果表明,4个BToV毒株之间的基因... 2018年在河南地区规模化牛场进行犊牛腹泻流行病学调查时,在粪便样品中检测到4株牛环曲病毒,分别命名BToV/CH/HN-1、BToV/CH/HN-2、BToV/CH/HN-3和BToV/CH/HN-4。对4个毒株的M基因进行克隆、测序与分析,结果表明,4个BToV毒株之间的基因核酸序列同源性为97.4%~100%,与欧洲BToV代表株同源性最高(95.6%~99.5%)。遗传进化分析表明,4个毒株均属于欧洲谱系的牛源进化分支。提示我国牛群中存在环曲病毒感染,丰富了牛环曲病毒的流行病学资料,可为制定综合防控措施提供参考依据。 展开更多
关键词 牛环曲病毒 序列分析 遗传进化分析
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牛诺如病毒和冠状病毒双重PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:4
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作者 王文佳 师志海 +1 位作者 兰亚莉 徐照学 《动物医学进展》 北大核心 2019年第10期6-9,共4页
为建立能同时检测牛诺如病毒(BNoV)和牛冠状病毒(BCoV)的聚合酶链反应(PCR)检测方法,根据BNoV和BCoV基因组的保守区域设计2对特异性引物,预期特异性扩增BNoV和BCoV的片段大小分别为542 bp和896 bp。特异性检测结果显示,该方法能特异性扩... 为建立能同时检测牛诺如病毒(BNoV)和牛冠状病毒(BCoV)的聚合酶链反应(PCR)检测方法,根据BNoV和BCoV基因组的保守区域设计2对特异性引物,预期特异性扩增BNoV和BCoV的片段大小分别为542 bp和896 bp。特异性检测结果显示,该方法能特异性扩增BNoV和BCoV的目的条带,未扩增出其他犊牛腹泻病毒性病原;BNoV和BCoV的最低检测限分别为6.71×10^4 copies/μL和1.38×10^5 copies/μL。对采集自河南地区的127份犊牛腹泻样品的检测结果显示,BNoV的阳性率为6.30%(8/127),BCoV的阳性率为14.96%(19/127),与单项PCR检测结果相一致。结果表明,建立的双重PCR方法可用于BNoV和BCoV的检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 牛诺如病毒 牛冠状病毒 犊牛腹泻 双重聚合酶链反应
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Analysis of Antibiotic Resistance of Escherichia coli Isolated from Pets
5
作者 SHI Zhi-hai WANG Wen-jia +1 位作者 lan ya-li CHEN Chao-xi 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2013年第1期22-23,共2页
[ Objective] This paper aimed to understand drug resistance of Escherichia coli isolated from pets in Guangzhou. I Method ] Broth microdilution method was used to determine the minimal inhibitory concentration (MIC)... [ Objective] This paper aimed to understand drug resistance of Escherichia coli isolated from pets in Guangzhou. I Method ] Broth microdilution method was used to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of ceftiofur, enrofloxacin and other 11 kinds of antibiotics for antimicrobial agent susceptibility testing of 120 strains of clinical E. coli and the experimental data were processed by WHONET 5.4 software. Based on the results of drug resistance pattern analysis, it helped to analyze and study the resistance mechanism. EResultl Clinical E. coli isolated from pets showed a different drug resistance to the 13 kinds of veterinary clinical antibiotics, and the different sources of E. coli also showed a different drug resistance pattern.[Cenclmion] The study provided a theoretical basis for the clinical use of drugs and druq resistance surveillance. 展开更多
关键词 Broth microdilution method Drug resistance pattern Drug resistance surveillance
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Research Progress of Animal-specific Antibiotics
6
作者 SHI Zhi-hai LI Wan-li +2 位作者 lan ya-li LIN Ping WANG Wen-jia 《Animal Husbandry and Feed Science》 CAS 2013年第3期138-140,144,共4页
[Objective]In order to summarize the research progress of animal-specific antibiotics. [Methods]Mechanism of action and clinical application of animal-specific antibiotics which were commonly used in clinical were sim... [Objective]In order to summarize the research progress of animal-specific antibiotics. [Methods]Mechanism of action and clinical application of animal-specific antibiotics which were commonly used in clinical were simply summarized. [Results] The most common animal-specific antibiotics are cephalosporins,aminoglycoside,pleuromutilin,macrolides,quinolones and chloramphenicols. [Conclusions] The study provides a reference for clinical veterinary staff. 展开更多
关键词 Animal-specific antibiotics Mechanism of action Clinical application Research progress
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牛诺如病毒、牛星状病毒和牛环曲病毒多重PCR检测方法的建立及应用 被引量:14
7
作者 师志海 徐照学 +5 位作者 兰亚莉 张彬 孟红丽 王亚州 金磊 王文佳 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1924-1928,共5页
为建立能同时检测牛诺如病毒(BNoV)、牛星状病毒(BAstV)和牛环曲病毒(BToV)的方法,根据BNoV、BAstV和BToV基因组的保守区域设计3对特异性引物,预期特异性扩增BNoV、BAstV和BToV的片段大小分别为542,376,698 bp,建立了BNoV、BAstV和BToV... 为建立能同时检测牛诺如病毒(BNoV)、牛星状病毒(BAstV)和牛环曲病毒(BToV)的方法,根据BNoV、BAstV和BToV基因组的保守区域设计3对特异性引物,预期特异性扩增BNoV、BAstV和BToV的片段大小分别为542,376,698 bp,建立了BNoV、BAstV和BToV的多重PCR检测方法。结果显示,该方法能特异性扩增BNoV、BAstV和BToV的目的条带,且未扩增出其他犊牛腹泻病原;BNoV、BAstV和BToV的最低检测限分别为1.34×10^4,1.06×10^4,1.03×10^4拷贝/μL。对采集自河南省的221份犊牛腹泻样品的检测结果显示,BNoV、BAstV和BToV的检出率分别为9.96%(22/221),18.10%(40/221)和19.00%(42/221)。三者与单一PCR检测结果相一致。结果表明,本试验建立的多重PCR方法可用于BNoV、BAstV和BToV的检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 牛诺如病毒 牛星状病毒 牛环曲病毒 犊牛腹泻 多重PCR
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牛星状病毒EvaGreen实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 被引量:6
8
作者 师志海 王文佳 +5 位作者 张彬 孟红丽 王亚州 金磊 兰亚莉 徐照学 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期50-55,共6页
牛星状病毒(BAstV)是我国新发的犊牛腹泻病原,本试验的目的是建立检测BAstV的Real-time PCR方法。根据BAstV流行株的ORF1a基因序列设计引物,通过优化反应条件和体系,成功建立基于EvaGreen检测BAstV的Real-time PCR方法。结果表明,该检... 牛星状病毒(BAstV)是我国新发的犊牛腹泻病原,本试验的目的是建立检测BAstV的Real-time PCR方法。根据BAstV流行株的ORF1a基因序列设计引物,通过优化反应条件和体系,成功建立基于EvaGreen检测BAstV的Real-time PCR方法。结果表明,该检测方法的Ct值与标准品模板在1.36×10^(1)~1.36×10^(8)拷贝/μL线性关系良好,相关系数R^(2)=0.999,扩增效率为93.79%;该方法可特异性检出BAstV,对犊牛腹泻其他相关病原呈阴性;最低检测下限为13.6拷贝/μL;批间和批内的变异系数均小于2%,重复性好。对2017年9月至2019年5月采自河南省的221份犊牛腹泻样本进行检测,BAstV的检出率为18.1%(40/221),采样场阳性率为100.0%(14/14)。本试验所建方法灵敏度高、特异性强、稳定性好,为BAstV的检测和流行病学调查提供了有力手段。 展开更多
关键词 牛星状病毒 ORF1a基因 实时荧光定量PCR 犊牛腹泻
原文传递
牛环曲病毒RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量:5
9
作者 师志海 徐照学 +3 位作者 兰亚莉 王文佳 孟红丽 王亚州 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期2305-2309,共5页
为建立牛环曲病毒快速检测方法,针对牛环曲病毒的保守区域S基因设计合成1对特异性引物,建立了检测牛环曲病毒的RT-PCR方法,并对其进行了敏感性、特异性和重复性检测。结果显示,仅牛环曲病毒阳性模板扩增得到698bp大小的目的条带,测序结... 为建立牛环曲病毒快速检测方法,针对牛环曲病毒的保守区域S基因设计合成1对特异性引物,建立了检测牛环曲病毒的RT-PCR方法,并对其进行了敏感性、特异性和重复性检测。结果显示,仅牛环曲病毒阳性模板扩增得到698bp大小的目的条带,测序结果与GenBank中牛环曲病毒S基因序列(登录号:MG957145.1)的同源性为97%。敏感性试验显示,该方法能检测到的最低核酸含量为1.36×10^4 copies/μL。利用该方法对采集自河南省部分地区的164份临床样品进行检测,结果显示牛环曲病毒的检出率为9.15%(15/164)。结果表明,所建立的牛环曲病毒RTPCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于牛环曲病毒的临床检查和流行病学调查。 展开更多
关键词 牛环曲病毒 反转录-聚合酶链式反应 S基因
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牛诺如病毒TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立 被引量:2
10
作者 师志海 王文佳 +4 位作者 兰亚莉 张彬 孟红丽 王亚州 徐照学 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期969-975,共7页
牛诺如病毒(BNoV)是国内新发的犊牛腹泻的病原,为建立高效快速、特异的BNoV定量检测方法,本研究参照GenBank登录的BNoV的RdRp基因的保守序列,设计合成了1对特异性引物和1条探针,通过优化反应条件和体系,建立了BNoV的TaqMan荧光定量PCR... 牛诺如病毒(BNoV)是国内新发的犊牛腹泻的病原,为建立高效快速、特异的BNoV定量检测方法,本研究参照GenBank登录的BNoV的RdRp基因的保守序列,设计合成了1对特异性引物和1条探针,通过优化反应条件和体系,建立了BNoV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果显示,该方法选择的引物具有高度特异性,只对BNoV有特异性扩增,而对牛冠状病毒等4种犊牛腹泻常见病原未见扩增;对BNoV核酸最低检测限为15.9 copies/μL,且批内、批间变异系数均小于2%,重复性好。对采集自2017年9月至2019年11月河南、山东和四川省的261份犊牛腹泻样本进行检测,结果显示BNoV的阳性检出率为11.49%(30/261)。本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法对BNoV的病原检测和流行病学调查具有重要意义。 展开更多
关键词 牛诺如病毒 犊牛腹泻 TaqMan荧光定量PCR
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牛诺如病毒和牛环曲病毒双重PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:7
11
作者 王文佳 徐照学 +4 位作者 张彬 孟红丽 王亚州 兰亚莉 师志海 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期892-896,共5页
为建立能同时检测牛诺如病毒(BNoV)和牛环曲病毒(BToV)的方法,根据BNoV和BToV基因组的保守区域设计2对特异性引物,预期特异性扩增BNoV和BToV的片段大小分别为542,698 bp,建立了BNoV和BToV的双重PCR检测方法。特异性检测结果显示,该方法... 为建立能同时检测牛诺如病毒(BNoV)和牛环曲病毒(BToV)的方法,根据BNoV和BToV基因组的保守区域设计2对特异性引物,预期特异性扩增BNoV和BToV的片段大小分别为542,698 bp,建立了BNoV和BToV的双重PCR检测方法。特异性检测结果显示,该方法能特异性扩增BNoV和BToV的目的条带,且未扩增出其他犊牛腹泻病原;对BNoV和BToV的最低检出量分别为1.90×10^4,1.86×10^4拷贝/μL。利用该方法对采自河南部分地区的184份犊牛腹泻样品的检测结果显示,BNoV和BToV的阳性检出率分别为11.41%和12.50%,与单一PCR检测结果一致。结果表明,本试验建立的方法对BNoV和BToV的鉴别诊断、混合感染和流行病学调查具有重要的应用价值。 展开更多
关键词 牛诺如病毒 牛环曲病毒 犊牛腹泻 双重PCR
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牛冠状病毒、牛诺如病毒和牛嵴病毒多重PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:8
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作者 王文佳 徐照学 +1 位作者 兰亚莉 师志海 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1306-1310,1355,共6页
为建立能同时检测牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)、牛诺如病毒(bovine norovirus,BNoV)和牛嵴病毒(bovine kobuvirus,BKV)的方法,根据BCoV、BNoV和BKV基因组的保守区域设计3对特异性引物,预期特异性扩增BCoV、BNoV和BKV的片段大... 为建立能同时检测牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCoV)、牛诺如病毒(bovine norovirus,BNoV)和牛嵴病毒(bovine kobuvirus,BKV)的方法,根据BCoV、BNoV和BKV基因组的保守区域设计3对特异性引物,预期特异性扩增BCoV、BNoV和BKV的片段大小分别为896,542,216 bp,建立了BCoV、BNoV和BKV的多重PCR检测方法。特异性检测结果显示,该方法能特异性扩增BCoV、BNoV和BKV的目的条带,且未扩增出其他犊牛腹泻(calf diarrhea,CD)病原;BCoV、BNoV和BKV的最低检测限分别为9.51×10^5,5.39×10^5,2.23×10^6 copies/μL。对采集自河南部分地区的127份CD样品的检测结果显示,BCoV的阳性率为14.96%(19/127),BNoV的阳性率为6.30%(8/127),BKV的阳性率为4.72%(6/127),三者与单一PCR检测结果相一致。结果表明,本研究建立的多重PCR方法可用于BCoV、BNoV和BKV的检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 牛冠状病毒 牛诺如病毒 牛嵴病毒 CD 多重PCR
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