A型塞内卡病毒VP2蛋白多克隆抗体的制备及间接ELISA检测方法的建立

[目的]制备A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)VP2蛋白多克隆抗体,建立检测SVA抗体的间接ELISA方法,以期为SVA致病机制及诊断提供研究基础。[方法]利用同源重组技术将VP2基因克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-VP2,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行IPTG诱导表达,表达产物经纯化后皮下多点注射新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用间接免疫荧光试验(IFA)、Western blotting和中和试验鉴定多克隆抗体的特异性、反应性和中和活性。以VP2为抗原包被酶标板,通过矩阵优化、临界值确定、特异性鉴定及敏感性和重复性分析建立检测SVA抗体的间接ELISA方法。采集50份临床血清样品,分别用间接ELISA与IFA方法进行检测,分析间接ELISA方法的符合率。[结果]重组VP2蛋白以包涵体形式表达,大小为40 ku。制备的多克隆抗体能与重组VP2蛋白和SVA特异性结合,与其他病毒无交叉反应,且具有较高的中和活性。经对间接ELISA条件的优化,确定VP2包被浓度为4μg/mL,阳性血清稀释浓度为1∶250,封闭液为5%脱脂乳+5%BSA,血清样品和二抗孵育时间均为90 min, TMB底物反应时间为10 min,临界值为0.182。建立的间接ELISA方法与常见的猪病毒阳性血清不反应,与IFA符合率达94.0%。[结论]原核表达系统表达的VP2蛋白具有良好的免疫原性,制备的多克隆抗体能与SVA和VP2发生特异性反应。建立的间接ELISA方法特异性高,与IFA符合率高,适用于临床SVA抗体检测和疫苗效力评价。

基于数值模拟和变形监测的副井稳定性评价

急倾斜矿体开采时一般将副井布置在矿体下盘不远处,以致副井附近矿体开采可能诱发副井井壁应力集中或损坏。为此,以湖北三鑫为例,利用FLAC3D仿真软件,探究沿走向或垂直走向布置采场引起的副井围岩应力、位移变化,并采用应变计、位移计监测井壁应力与位移变化,评价副井稳定性。结果表明:沿矿体走向布置采场对采场围岩、悬空底柱及开采段副井井壁的稳定都极为不利,沿走向或大宽度垂直走向布置采场都不会引起地表及开采标高段附近的副井发生明显位移,但都会引起井口以下约250 m内的井壁因变形而发生应力集中;必须垂直走向布置采场并缩小采场宽度;采取4 m×4 m进路上向胶结充填二步骤采矿后,除岩土分界面附近井壁偶尔因开快车而造成连续2次垂直位移、应力差分别超1.2 mm、1.4 MPa外,其他监测值变化基本可忽略;地表基岩沉降观测表明各点沉降值变化一般不超过3 mm。

矿震与冲击地压防治研究进展

矿震与冲击地压是采矿领域亟待解决的热点、难点和瓶颈问题,为了有效控制矿震与冲击地压,综述矿震定义与分类、矿压假说及矿震与冲击地压防治技术,回顾切顶卸压理论及其在中厚金矿采空区处理与卸压开采、中厚及以下煤矿沿空留巷中的应用,并比较其与110工法的差异。据此,给出矿震定义,指出矿震与冲击地压发生的条件类似,针对厚矿体开采提出深埋坚硬顶板控制爆破切槽放顶技术。研究表明:控制爆破切槽放顶技术仍然是未来矿震与冲击地压防治中释放并转移高地压的主要方法,它还可将深埋厚矿体的“砌体梁”简化成弹簧岩梁承载体系。

钢桥焊接接头强韧匹配现状分析

综述了国内钢桥焊接接头强韧性匹配情况。钢板及焊接材料试验数据表明:原材料的强度波动范围较大,给强度匹配带来较大的难度,需要在原材料标准中对其强度范围进行限制;某些项目规定的焊缝强度限制指标缺乏理论依据,需要进行专题研究制定合理的波动范围。

有氧运动上调硫氧还蛋白系统抑制衰老大鼠心肌细胞凋亡

背景:研究表明,心肌细胞凋亡与心脏功能减退及心脏衰老过程密切相关,适宜的运动可以改变心力衰竭患者的心泵功能以及减轻衰老引起的心肌细胞凋亡、肥大和纤维化损伤。目的:探究长期有氧运动对衰老大鼠心肌细胞凋亡及硫氧还蛋白系统的影响。方法:选取雄性SD大鼠36只,按照鼠龄分为青年组(3月龄)、中年组(9月龄)、老年组(18月龄),每组12只;每组又分为安静、运动2个亚组,每组6只,安静组常规饲养,运动组进行有氧运动训练(45 min/d,5 d/周,训练10周)。末次训练后24 h,采用ELISA法检测大鼠血清肌钙蛋白Ⅰ和血清肌酸激酶同工酶MB水平,TUNEL染色检测心肌细胞凋亡,Western Blot检测大鼠心肌组织中Bax、Bcl-2、Caspase 3、硫氧还蛋白1、硫氧还蛋白2、硫氧还蛋白还原酶1、硫氧还蛋白还原酶2、硫氧还蛋白相互作用蛋白、凋亡信号调节激酶1、P38丝裂原活化激酶的蛋白表达。结果与结论:(1)老年安静组大鼠血清肌钙蛋白Ⅰ和肌酸激酶同工酶MB水平高于青年安静组、中年安静组、老年运动组(P <0.01),老年运动组大鼠血清肌钙蛋白Ⅰ和肌酸激酶同工酶MB水平高于青年运动组、中年运动组(P <0.01);(2)无论是安静状态还是运动训练后,随着鼠龄的增加,大鼠凋亡心肌细胞数量及Bax、Caspase 3蛋白表达逐渐升高,Bcl-2蛋白表达逐渐降低;与同龄段安静组相比,运动组大鼠凋亡心肌细胞数量及Bax、Caspase 3蛋白表达均不同程度降低,Bcl-2蛋白表达均不同程度升高;(3)老年安静组大鼠心肌硫氧还蛋白1、硫氧还蛋白2、硫氧还蛋白还原酶1、硫氧还蛋白还原酶2蛋白表达低于青年安静组、中年安静组、老年运动组(P <0.05,P <0.01);老年运动组大鼠心肌硫氧还蛋白1、硫氧还蛋白2、硫氧还蛋白还原酶2蛋白表达低于青年运动组(P <0.05,P <0.01),硫氧还蛋白还原酶1、硫氧还蛋白还原酶2蛋白表达低于中年运动组(P <0.01);(4)老年安静组大鼠心肌硫氧还蛋白相互作用蛋白、凋亡信号调节激酶1、P38丝裂原活化激酶蛋白表达高于青年安静组、中年安静组、老年运动组(P <0.01),老年运动组大鼠心肌硫氧还蛋白相互作用蛋白、凋亡信号调节激酶1、P38丝裂原活化激酶蛋白表达高于青年运动组、中年运动组(P <0.01);(5)结果表明,有氧运动可能通过下调硫氧还蛋白相互作用蛋白表达来增强硫氧还蛋白的表达,下调凋亡信号调节激酶1及P38丝裂原活化激酶蛋白的表达,从而减轻衰老大鼠心肌细胞的凋亡。

基于ANSYS的竹篼破篼刀具设计与仿真

为降低破篼刀具的工作能耗及解决破篼刀具工作半径不可调的问题,设计一种工作半径可调以实现从竹篼内部破篼的刀具。首先在ANSYS中建立竹篼-破篼刀具有限元模型,然后进行破节、破壁仿真并做试验分析,最后构建试验平台加以验证。结果表明:所研制的破篼刀具可清理外径为110~130 mm的竹篼;破节最优的刀具参数组合为:轴向刀后角角度为30°、刀盘转速为5 000 r/min;破壁的刀具参数组合为:径向刀后角角度为20°、刀盘转速为5 000 r/min。

枸杞多糖通过增强自噬抑制饥饿诱导的施万细胞凋亡

目的:探讨枸杞多糖(LBP)抑制施万细胞(SCs)凋亡的作用及相关机制。方法:RSC96细胞饥饿处理12 h制备自噬模型,Western Blot检测自噬相关蛋白LC3、p62的表达;采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂盒筛选出LBP作用的最佳浓度。将RSC96细胞随机分为正常组(Control)、饥饿组(Starvation)、Starvation+LBP组,Western Blot或免疫荧光染色检测细胞自噬相关蛋白(LC3、p62)以及髓鞘相关蛋白(p75NTR、PMP22、S100β)的表达;采用Annexin V/PI荧光染色检测细胞的凋亡情况;应用流式细胞术分析细胞周期;Western Blot分析通路蛋白Erk1/2、Akt的磷酸化水平。结果:CCK8结果显示,LBP为300μg/ml时受损RSC96细胞活力最佳。与Control组相比,Starvation组LC3-II/LC3-I水平显著增高(P<0.05)。与Starvation组相比,Starvation+LBP组的凋亡和坏死细胞比例显著降低,处于S期和G2/M期的细胞比例升高;LC3-II、p75NTR、PMP22、S100β蛋白表达量增高,自噬底物蛋白p62的表达量降低;通路蛋白p-Erk1/2表达量增高(P<0.05),而p-Akt蛋白表达量略有下降。结论:LBP可通过增强细胞自噬抑制SCs凋亡,促进髓鞘相关蛋白的表达,其机制与Erk1/2激活和/或Akt抑制有关。

聚晶金刚石刀具低温冷却铣削SiC/SiC复合材料磨损试验研究

采用超硬聚晶金刚石(PCD)刀具对SiC/SiC陶瓷基复合材料进行干式和低温液氮冷却铣削试验研究,获得PCD刀具在干式和低温液氮冷却铣削条件下的前刀面和后刀面磨损形貌;分析PCD刀具在干式和低温液氮冷却铣削条件下的主要磨损形式,测得PCD刀具在干式和低温液氮冷却铣削条件下的刀具使用寿命。研究表明:在干式铣削条件下,PCD刀具前刀面的主要磨损形式为刀尖磨钝和崩刃;而在低温液氮冷却铣削条件下,PCD刀具前刀面的主要磨损形式为刀尖磨钝和微剥落;与干式铣削条件相比,PCD刀具在低温液氮冷却铣削条件下寿命提高约71.4%。

浙江种子植物资料增补(ⅩⅨ)

报道了3个浙江种子植物新分类群:异形玉叶金花Mussaenda shikokiana Makino f.anomala(H.L.Li)J.P.Li,S.J.Ying et Z.H.Chen新等级与新组合变型,石山薜荔Ficus pumila L.var.calcarea G.Y.Li,W.Y.Xie et Z.H.Chen新变种,玉果山菅Dianella ensifolia(L.)Redoutéf.leucocarpa J.P.Wu,Y.F.Zhang et Z.H.Chen新变型,其中异形玉叶金花为华东野生植物分布新记录。凭证标本保存于浙江自然博物院(ZM)。

M/M/1排队系统输出过程的转移概率与瞬时分布

本文对M/M/1排队系统,求出其输出过程在顾客到达时刻的转移概率及在任意时刻的分布.

青岛近代历史建筑清水砖墙的保护修复研究——以医药商店旧址为例

以青岛近代历史建筑医药商店旧址的清水砖墙的历史和保护修复工程为具体案例,通过现场调研和测绘发现修复中的问题,并针对青岛沿海气候下砖材的劣化机理进行研究分析,结合国内外的相关经验,探讨针对青岛沿海地区气候下的近代历史建筑清水砖墙的适宜性修复原则和技术手段。

柴芍四君子汤加味联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎(肝郁脾虚证)的效果及对氧化应激指标、肝纤维化指标的影响

目的 探讨柴芍四君子汤加味联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎(肝郁脾虚证)的效果及对氧化应激指标、肝纤维化指标的影响。方法 选取2020年1月至2021年12月我院收治的80例慢性乙型肝炎(肝郁脾虚证)患者为研究对象,以随机数字表法将其分为对照组与观察组,各40例。对照组给予恩替卡韦治疗,观察组在对照组基础上增加柴芍四君子汤加味治疗。比较两组的治疗效果。结果 观察组的治疗总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组的超氧化物歧化酶(SOD)水平高于对照组,一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)水平低于对照组(P<0.05)。治疗后,观察组的Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)、透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)水平低于对照组(P<0.05)。结论 柴芍四君子汤加味联合恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎(肝郁脾虚证)可有效提升治疗效果,同时减轻氧化应激反应,改善肝纤维化。

基于在线教学的高校外语教师数字素养研究

以我国六名高校外语教师为研究对象,以在线教学为依托,探究他们对数字素养的认知与实践,分析其数字素养与其专业发展之间的关系。研究对象具有较强的数字化教学认知,并开展实施了形式多样的在线教学实践模式;在处理在线教学中存在的问题时,他们能够采取相应的数字化教学策略,但依然面临教师数字素养培训缺位的问题;对数字化教学的效果持不同观点;数字素养有效促进了教师的专业发展;数字化素养会影响教师的专业身份认同感。高校外语教师在开展数字化教学过程中:积极的教学信念是前提条件;实现有效教学是根本目的;促进可持续发展的教师培训是关键因素;数字技术赋能是持久动力。这对促进高校外语教师数字素养能力发展具有一定的启示。

鸡冠咀矿区岩体力学参数的确定及数值模拟反演分析

岩体力学参数作为矿井工程设计和施工的基础和依据,其选取的合理性对于预测矿山稳定性及后续支护都有重要意义。以鸡冠咀矿山巷道为主要研究对象,在室内外试验既得数据的基础上,根据正交试验与拉格朗日差分法(FLAC^(3D)),计算模拟出不同组合下的巷道变形,并开展水平极差分析确定各参数对巷道沉降影响的显著性,最后进行参数反演得出其力学响应规律。结果表明:内摩擦角、弹性模量和黏聚力对巷道围岩变形的影响依次减弱;采空区底板的上浮位移、浅部岩体的下沉位移均随开采深度增加逐步增大。

FeCoCu预合金粉末含量和烧结温度对碳化钨基钻头性能的影响

为提高钻头胎体耐磨性与地层研磨性的适应性,提高钻头自锐能力,选取FeCoCu预合金粉作为胎体成分,对胎体性能进行研究。在碳化钨基胎体中添加FeCoCu预合金粉末,调节金刚石钻头胎体中FeCo-Cu粉末与WC粉末的配比关系,并在不同的烧结温度下烧制试样,寻找FeCoCu含量和烧结温度对胎体性能的影响规律。试验结果发现:随着FeCoCu含量的升高,胎体的相对致密度、洛氏硬度、抗弯强度和耐磨性随之降低;烧结温度对相对致密度、洛氏硬度、抗弯强度的影响幅度小,对胎体耐磨性的影响幅度大,最大变化幅度达到310%。FeCoCu预合金与烧结温度的耦合作用下,胎体的耐磨性变化存在较宽的调节区间,可通过二者组合的变化,调节胎体耐磨性,提高胎体对地层的适应性。

千米级水平孔施工技术在绿色勘查钻探中的应用

高原山区铁路建设沿线地形起伏度大、生态脆弱、地质构造复杂、断裂活动频繁,平均海拔3000m以上(张永双等,2022、2021)。布设多条长大埋深隧道,更有长达42 km,埋深在2000 m以上。在隧道顶部布设众多深度超过2000 m的工程勘探垂直孔,实施难度极大。为了克服海拔高、地形陡、减少搬迁,保护生态等困难,采用水平孔钻进技术.

节段间“金属接触+高强螺栓”联合受力钢塔柱的线形控制技术

钢塔节段间常见的连接方式有“金属接触+高强度螺栓”连接与焊接连接两种,不管塔段间采用哪种连接方式,确保钢塔柱的成桥线形非常重要。以塔段间“金属接触+高强螺栓”联合受力钢塔柱为例,详细介绍了该类钢塔柱的建造难点及确保塔柱线形的技术措施,可供相关人员参考。

PFI汽油车GPF再生特性研究

研究PFI轻型汽油车实际道路行驶GPF再生工况特点,分析再生参数,如过量空气系数λ、GPF入口排气温度T_(in)与车辆运行工况的关系,研究再生时CO_(2)和PM排放特性。发现在40~100 km/h中高车速、1400~2200 r/min中等转速区,加速或减速运行,易满足λ≥1.05、T_(in)≥450℃的再生条件,高速路段满足再生条件的运行时间占比可达19.18%,市郊路段8.56%,市区路段3.26%。分析了两种典型再生工况,一种为减速断油被动再生,为从中高车速急减速到低速,减速度–2.45 m/s^(2),初始T_(in)约700℃,λ值从1.01急速增大到1.30;另一种为急加速主动再生,为从中等车速急加速到高速,加速度达1.0 m/s^(2),λ增大到1.35,T_(in)增加到750℃。再生期间PM排放浓度均增大,CO_(2)排放在加速再生期间增大、减速再生期间保持平稳。

β_(1)肾上腺素能受体Arg389Gly基因多态性与心肌梗死后心室重构的关系

目的探讨β_(1)肾上腺素能受体(β_(1)-AR)Arg389Gly基因多态性与心肌梗死后心室重构的关系。方法选取2014年1月至2015年12月本院收治的120例ST段抬高心肌梗死患者作为研究对象,采用聚合酶链式反应-限制性酶片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测患者β_(1)-ARArg389Gly多态性位点基因型,采用超声心动图测量左心室舒张末期内径(LVDD)及左心室射血分数(LVEF)。分析β_(1)-ARArg389Gly多态性基因型频率分布,比较不同β_(1)-ARArg389Gly基因型患者一般情况及LVDD、LVEF。结果Arg389纯合子患者与Gly389等位基因携带患者年龄、性别、吸烟、高血压、糖尿病、前壁心肌梗死、梗死相关血管开通比例及总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平比较差异无统计学意义。梗死后1周,Arg389纯合子患者与Gly389等位基因携带患者LVDD、LVEF比较差异无统计学意义;梗死后6个月,Arg389纯合子患者与Gly389等位基因携带患者LVDD均长于梗死后1周,LVEF均低于梗死后1周,但Arg389纯合子患者LVDD短于Gly389等位基因携带患者,LVEF高于Gly389等位基因携带患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论β_(1)-AR Arg389Gly基因多态性与心肌梗死后左心室重构有关,临床应及早给予患者再灌注治疗、开通梗死相关血管,以改善患者预后。

基于切顶卸压理论的绿色开采理念探索

保水开采、减沉开采及废石、尾矿充填是非煤地下矿山绿色开采的核心内容。充填采矿是实现绿色开采的根本途径,但充填采矿不仅成本相对较高,实践表明也无法根本消除不均匀沉降及深部开采高地压。提出了基于切顶卸压理论的绿色开采理念,阐述了各种赋存条件下矿体绿色开采和安全开采的技术设想。研究表明:借助控制爆破切断一定深度的顶板并堆筑成支撑顶板的堆石坝,不仅能消除或转移高地压,还能借助这个似弹簧结构的合理分布控制顶板沉降,也能作为充填采矿的挡墙;在急倾斜采空区,通过直接排放爆破松石到未凝固的胶结充填体中,不仅可以大幅度降低充填成本,还能够提高充填挡墙的强度;基于切顶卸压理论的绿色开采理念是矿山深部实现安全、绿色开采和矿柱全采的必由之路。