异形底盒形件充液拉深数值模拟

针对异形底难成形的问题,以异形底盒形件为研究对象进行了充液拉深有限元数值模拟研究。设计了先预胀后拉深的液压加载路径,对零件成形及贴模性进行有限元数值模拟研究。为了提高成形质量,采用施加主动周向压力的工艺方法,基于数值模拟技术,提出了通过设置局部坐标系来简化周向压力施加复杂的问题;设计了两种坯料形式,四组周向压力加载曲线。又对盒形件壁厚不变线不规则的问题,将板料变形后的形状映射在变形前的板料上,更加清楚地看出各个形状板料在不同周向压力下壁厚不变线的变化规律。模拟实验结果表明:主动径向压力的施加可以使壁厚不变线向盒形件底部下移,减少了减薄区域,提高了盒形件壁厚均匀性;同时提高了贴模性及尺寸精度;在主动径向加压充拉深成形过程中,圆形切弓形状板料相较于圆形板料能更好地成形出内凹底盒形件。

胰腺癌石蜡包埋组织中微RNA原位杂交检测技术的优化

目的对采用原位杂交检测10%中性甲醛溶液固定的石蜡包埋(FFPE)胰腺癌组织切片中微RNA(miR)的方法进行技术优化,以提高miR的阳性检出率。方法将20例胰腺癌组织标本构建成组织芯片,使用锁核酸(LNA)标记的探针和显色原位杂交技术检测miR-21和miR-34a的表达。杂交温度分别设为48℃、53℃、56℃,杂交后采用3种不同的洗涤条件(温度、时间和3种不同洗涤缓冲液)进行杂交条件优化。将126例胰腺癌组织标本制成组织芯片,采用优化的显色原位杂交技术检测miR-21和miR-34a的表达。结果 miR-21探针最佳杂交条件为杂交温度53℃下杂交6 h,使用洗涤缓冲液Ⅲ在65℃下洗涤6 min,再用PBS洗涤1 min;miR-34a探针最佳杂交条件为杂交温度53℃下杂交6 h,使用洗涤缓冲液Ⅲ分别在4℃和65℃下洗涤6 min,再用PBS洗涤1 min。在126例胰腺癌组织中,84例(66.7%)miR-21表达阳性,77例(61.1%)miR-34a表达阳性。结论在FFPE胰腺癌组织切片中,miR-21和miR-34a的最佳杂交温度均为53℃,选择合适的杂交后洗涤温度和洗涤缓冲液有利于提高miR的阳性检出率。

利用CRISPR/Cas9技术构建OAS2敲除的PK-15细胞系及敲除OAS2对CSFV复制的影响

为研究猪源2’-5’寡腺苷酸合成酶2(OAS2)对CSFV复制的影响,本研究利用CRISPR/Cas9系统构建敲除OAS2的PK-15细胞系(PK-OAS2-KO)。在构建PK-OAS2-KO细胞系时,设计2条分别靶向OAS2基因第1和第2外显子的特异性sg RNAs,将sg RNA插入LentiCRISPRv2载体获得重组质粒plentiCRISPRv2-sgRNA;将重组质粒与辅助质粒共转染HEK293T细胞,包装获得携带sg RNA的慢病毒后以MOI 1转导PK-15细胞,通过嘌呤霉素药物筛选及有限稀释法获得单克隆细胞株,经基因测序和western blot鉴定OAS2敲除效果。利用MOI 0.01r CSFV-Rluc株(报告病毒)或CSFV Shimen株分别感染PK15细胞获得的PK-OAS2-KO细胞系,经荧光素酶活性检测和q RT-PCR证实敲除OAS2基因能够促进CSFV复制。综上,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了OAS2基因敲除的PK-15细胞系,并发现OAS2具有抑制CSFV复制的作用,本研究为进一步研究OAS2抗CSFV作用的分子机制提供了依据。

抗伪狂犬病病毒干扰素刺激基因的筛选及IFIT3抗病毒活性的鉴定

为研究抗伪狂犬病病毒(PRV)特异性的干扰素刺激基因(ISGs),本研究采用与表达增强型绿色荧光蛋白报告病毒相结合的高内涵筛选系统对具有抗病毒功能的10种ISGs进行筛选,之后利用过表达细胞系、间接免疫荧光(IFA)和qRT-PCR试验对显著抑制PRV复制的IFIT3(<0.01)进行抗病毒活性验证,通过qRT-PCR检测了PRV感染的猪肺泡巨噬细胞(PAM)和PRV感染猪的外周血单核细胞(PBMC)中IFIT3mRNA的转录水平。高内涵筛选结果显示,5种潜在的抗PRVISGs分子(IFIT3、ISG15、GBP2、Mx1和ISG20)对PRV的复制具有显著的抑制作用,其中IFIT3效果最显著;IFA和qRT-PCR试验结果显示,在PK-15细胞和PAM中,过表达IFIT3均可以显著降低PRV-TJ株的病毒滴度和基因组拷贝数;qRT-PCR试验结果显示,在PRV感染的PAM和PBMC中,IFIT3mRNA的转录水平均显著上调。流式细胞术试验表明过表达IFIT3不影响PK-15细胞凋亡,推测IFIT3可能存在其它的抗病毒机制。本研究筛选到5种潜在的抗PRVISGs并证实IFIT3是一种抗PRV的ISG,为抗PRVISGs的相关研究,特别是猪源IFIT3抗病毒机制的研究奠定了基础。

犬瘟热病毒N和H蛋白拮抗IFN-β信号通路的研究

为研究犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)不同毒株N、H蛋白调控宿主β-干扰素(IFN-β)表达的作用,将CDV野毒株LN(10)1、SD(14)7和疫苗株CDV3感染提前转染了pGL3-IFN-β报告基因质粒和pRL-TK内参质粒的MDCK细胞,分别在感染0 h、8 h、12 h和24 h后通过双荧光素酶报告系统检测试剂盒测定IFN-β启动子的活性。将CDV野毒株LN(10)1、SD(14)7和疫苗株CDV3 N和H基因克隆到pCI真核表达载体。重组表达质粒分别转染HEK293T细胞,应用Western blot检测蛋白能否正确表达。将N和H蛋白重组表达质粒连同pGL3-IFN-β报告基因质粒和pRL-TK内参质粒共转染至HEK293T细胞后,经Poly(I:C)刺激细胞,利用双荧光素酶报告系统检测系统测定IFN-β启动子活性。结果显示3种不同毒力的CDV在感染MDCK细胞后,只有CDV 3疫苗株感染后能观察到IFN-β启动子短暂激活。Western blot实验证实,3种毒株N和H蛋白在HEK293T细胞中均能正确表达。双荧光素酶报告系统对IFN-β启动子检测活性结果显示,Poly(I:C)成功激活了IFN-β信号通路,而这种激活作用在表达CDV不同毒株的N或H蛋白时均受到显著抑制(P <0.01),但不同毒株N或H蛋白对IFN-β信号通路的调控与CDV毒力无关。本研究证实了CDV野毒株和疫苗株N、H蛋白可抑制宿主IFN-β信号通路,为进一步研究CDV与宿主分子互作奠定基础。

非洲猪瘟病毒编码蛋白H240R稳定了正常的病毒粒子形态结构

非洲猪瘟(ASF)是严重危害全球养猪业的一种烈性传染病,目前尚无疫苗可用。该病的病原,非洲猪瘟病毒(ASFV),是一种核质大DNA病毒。虽然感染性ASFV颗粒的结构蛋白已经被解析,但大多数病毒结构蛋白的定位及其功能仍然未知。ASFV编码一个主要的衣壳蛋白p72和多个小的衣壳蛋白M1249L、p17和p49。已有文献表明,缺失p72和p17的ASFV不能进行衣壳的组装,缺失pB438L的ASFV产生了异常形态的病毒粒子且不具有感染性,而H240R在ASFV复制周期中的功能是未知的。

TFT制程曝光色差研究

在TFT制程中,曝光工艺直接影响到薄膜的最终图案质量。为了分析与解决曝光色差问题,需对面板的点灯现象与制备工艺进行调查与研究。首先,通过扫描电子显微镜分析、错位曝光试验、数据分析等方法进行不良原因调查。同时,借助开源软件GIMP和Fiji进行图像处理得到面板灰度数据,对色差程度进行定量评价。然后,通过调整曝光设备照度均一性与管控最优生产路径,曝光色差发生率从10%以上降至1%以内,有效改善面板显示品质。最后,结合ExpertLCD光学模拟数据与电容耦合效应分析,进一步阐述曝光色差的形成机理。研究发现,像素电极临界尺寸应管控在一定范围并且需保证较好的均一性,像素电极临界尺寸过小、过大都会使曝光色差更易显现。同时,各导电层的临界尺寸也需保证较好的均一性,以减小耦合电容对显示的影响。

管道水力摩擦阻力系数计算新方法

摩擦阻力系数是设计油气管道的关键参数,准确计算摩擦阻力损失有利于合理设计管道流量,有效降低运输成本,提高输送效率。在研究已有计算粗糙管水力摩阻系数方法的基础上,比较各显式方程的计算方法与精度,提出两种显式Colebrook-White方程计算模型,建立一种精确且计算简便的显式Colebrook-White方程,并进行实验验证。结果表明,气、液体摩阻实验与该方程的拟合程度均在0.95以上,新的显式Colebrook-White方程具有较高的计算精度,验证所建立方程的准确性。

油电混合动力机车的用途与运用效果分析

文章介绍了油电混合动力机车的基本特点和优势,针对调车作业、起伏线路上的干线牵引作业、排放或噪声敏感区域内的干线牵引作业,以及短站间距下的城际客运作业等工况,详细分析了机车或动车组的作业特点、用法和运用效果。

自报职业性噪声暴露与肺功能水平的关联性研究

目的分析自报职业性噪声暴露与人群肺功能水平变化之间的关系。方法采用调查问卷收集1009例社区健康居民和1009例成人哮喘患者的基本信息和职业接触史,测定其肺功能水平。采用多元线性回归分析自报职业性噪声暴露与肺功能水平的关系及生产性粉尘在其中的作用。结果与无职业性噪声暴露史的人群相比,自报有职业性噪声暴露史的健康居民FVC实际值降低0.22 L,处于急性发作期的哮喘患者FVC和FEV_(1)实际值分别显著降低0.39 L和0.31 L。当无生产性粉尘暴露史时,有职业性噪声暴露史的哮喘患者FVC、FEV_(1)、PEF水平显著低于无噪声暴露史的患者(P<0.05),且当患者处于持续发作期时,其FEV_(1)、PEF和FEV_(1)/FVC的实际值分别降低1.48 L、3.56 L/s和28.45%。若同时有生产性粉尘和噪声暴露史,健康居民FVC和PEF的水平分别显著降低0.25 L和0.77 L,但哮喘患者的肺功能水平无显著变化。结论自报职业性噪声暴露与健康居民以及哮喘患者肺功能下降均有关,且职业性噪声与粉尘联合暴露对健康居民肺功能的影响较为明显。

中药饮片微生物污染现状及典型菌鉴定研究进展

微生物污染是饮片外源性污染的主要形式之一,也是影响人体健康的重要途径。对近10年来饮片微生物污染及典型菌研究进展进行综述,结果显示目前我国饮片微生物污染较为严重,不同品种、来源及炮制方法饮片间微生物污染存在较大差异,耐热菌及耐胆盐革兰阴性菌污染率高,其他控制菌检出率较低。污染典型菌的分离鉴定研究主要集中于耐热菌及革兰阴性杆菌,典型耐热菌主要是来源于土壤及其他外环境的芽胞杆菌属,少数分离菌株对人类有致病报道;分离的典型革兰阴性杆菌70%以上菌株有致病报道,以阴沟肠杆菌为常见分离菌。近年来,一些新的污染典型菌检测方法逐步被应用,如API、Vitek2 Compact鉴定系统、FRIT、MALDI-TOF/MS、核糖体分型技术及16 S rRNA宏基因组高通量测序技术等,这些方法较传统方法更灵敏、快捷和准确。