期刊文献+
共找到10篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
副猪格拉瑟菌5型细胞致死性膨胀毒素CdtB破坏猪呼吸道上皮屏障的机制
1
作者 陈敏 刘明星 +2 位作者 张鹏云 蔺辉星 范红结 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期304-316,共13页
旨在探究副猪格拉瑟菌(Glaesserella parasuis,GPS)突破猪呼吸道上皮屏障引起系统性感染的机制。通过超速离心和密度梯度离心提取副猪格拉瑟菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs),OMVs经SDS-PAGE显示,蛋白质条带分布在55~100 ku,... 旨在探究副猪格拉瑟菌(Glaesserella parasuis,GPS)突破猪呼吸道上皮屏障引起系统性感染的机制。通过超速离心和密度梯度离心提取副猪格拉瑟菌外膜囊泡(outer membrane vesicles, OMVs),OMVs经SDS-PAGE显示,蛋白质条带分布在55~100 ku,经透射电子显微镜(TEM)观察,OMVs的粒径在100~200 nm,纳米粒子直径分析(NTA)结果显示,样品在100~200 nm处的粒子数目最多。进而用制备的HbpA及OmpP2多克隆抗体对OMVs及不含OMVs的细菌上清进行Western blot验证,证实所提取的样品为外膜囊泡,且进一步结果证明细胞致死性膨胀毒素(CDT)在GPS培养物中主要以OMVs的形式存在。用OMVs或CdtB处理猪气管上皮细胞(swine tracheal epithelial cells, STEC)36 h,检测STEC中cleaved-caspase3、ZO-1和Occludin的蛋白表达水平,并用FITC-葡聚糖(FD-4)检测STEC单层细胞的细胞旁通透性。结果发现,OMVs与CdtB处理后凋亡相关蛋白cleaved-caspase3表达水平升高,ZO-1和Occludin的表达水平降低,FD-4渗透率升高,同时,乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试验发现,当CdtB与STEC单层细胞共孵育24 h、OMVs与STEC单层细胞共孵育36 h后,STEC存活率显著降低。而Pifithrin-α预处理STEC可抑制OMVs和CdtB引起的细胞凋亡和屏障通透性的增加。另外,用免疫磁珠捕获的方法去除OMVs中的CdtB(OMVs-ΔCdtB),OMVs-ΔCdtB处理STEC 36 h后cleaved-caspase3、ZO-1、Occludin表达水平与对照组相比无显著差异。综上,成功提取并纯化GPS OMVs,且试验证明GPS可通过OMVs转运CdtB诱导STEC凋亡和屏障损伤,为副猪格拉瑟菌突破呼吸道上皮屏障的机制提供新思路。 展开更多
关键词 副猪格拉瑟菌 外膜囊泡 细胞致死性膨胀毒素CdtB 猪呼吸道上皮细胞
下载PDF
副猪嗜血杆菌间接ELISA抗体检测试剂盒的研制与应用 被引量:4
2
作者 张鹏云 陈敏 +3 位作者 刘明星 周红 蔺辉星 范红结 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1606-1614,共9页
【背景】副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)是猪的上呼吸道病原菌,引起格拉瑟氏病,主要引起断奶前后和保育阶段的猪发病,通常见于5—8周龄的青年猪,发病率一般为10%—15%。该菌有15种血清型,目前主要养猪国家流行的血清型为4型、... 【背景】副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)是猪的上呼吸道病原菌,引起格拉瑟氏病,主要引起断奶前后和保育阶段的猪发病,通常见于5—8周龄的青年猪,发病率一般为10%—15%。该菌有15种血清型,目前主要养猪国家流行的血清型为4型、5型、12型和13型,是严重危害养猪业发展的主要细菌性病原之一。目前国内还没有检测该菌抗体的商品化试剂盒。【目的】研制一种针对副猪嗜血杆菌的快速、敏感和特异性强的抗体检测试剂盒,为格拉瑟氏病的有效防控提供技术支持。【方法】表达并纯化OppA、DppA、HbpA 3种不同的副猪嗜血杆菌ABC转运体周质底物结合蛋白,使用副猪嗜血杆菌阴、阳性参考血清筛选以上3种蛋白中免疫反应性和反应特异性好的蛋白。以筛选的蛋白为包被抗原,建立检测HPS抗体的间接ELISA方法,优化间接ELISA反应条件,并组装试剂盒。在此基础上,确定该试剂盒的敏感性、特异性;通过对不同时间、不同猪场采集的2000份临床猪血清样本进行检测,评价该试剂盒的实用性;在以上临床血清样本中随机选取200份,分别以研制的试剂盒、间接血凝试验以及进口商品化试剂盒进行检测,比较检测结果,验证该试剂盒的符合率;最后,使用研制的试剂盒检测免疫和攻毒猪采集的血清,评价该菌免疫后的抗体消长规律。【结果】成功表达并纯化了OppA、DppA、HbpA 3种蛋白,发现OppA免疫反应性和反应特异性最好。经过反应条件优化,确定OppA包被浓度为1μg·mL-1,封闭液为0.5%的BSA-PBS溶液,样品稀释液为1%的BSA-PBST溶液,样品孵育时间为30min,样品稀释度为1﹕50,酶标二抗孵育时间为30min,底物作用时间为15 min,临界值为0.18;试剂盒的敏感性和特异性为96.67%,能与国内常见血清型HPS阳性血清反应而不与猪其他常见病原阳性血清发生交叉反应;2000份临床血清样本阳性检出率为34.65%;随机抽取200份血清样本,与间接血凝试验的符合率为92.50%,与进口商品化试剂盒符合率为87.00%,符合率较高;使用试剂盒检测免疫和攻毒后不同时间采集的猪血清,HPS抗体消长规律符合预期。【结论】研制的副猪嗜血杆菌ELISA抗体检测试剂盒特异性高、敏感性强,与商品化试剂盒和间接血凝试验的符合率高,可用于临床HPS抗体检测和疫苗免疫效果评价。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 ABC转运体周质底物结合蛋白 间接ELISA 免疫评价
下载PDF
马链球菌兽疫亚种烯醇化酶对小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响 被引量:3
3
作者 陈楷文 华承薇 +4 位作者 袁宸 潘飞 蔺辉星 范红结 马喆 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期2576-2583,共8页
旨在研究马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi ssp.zooepidemicus,SEZ)烯醇化酶(enolase,Eno)对小鼠肺泡巨噬细胞(RAW264.7)吞噬能力的影响。通过构建原核表达质粒获得重组烯醇化酶(rEno),采用台盼蓝活细胞计数法,判定在不同处理浓度... 旨在研究马链球菌兽疫亚种(Streptococcus equi ssp.zooepidemicus,SEZ)烯醇化酶(enolase,Eno)对小鼠肺泡巨噬细胞(RAW264.7)吞噬能力的影响。通过构建原核表达质粒获得重组烯醇化酶(rEno),采用台盼蓝活细胞计数法,判定在不同处理浓度和时间下rEno蛋白对RAW264.7细胞的细胞毒性。将rEno蛋白与RAW264.7细胞共孵育后,用SEZ作用于细胞并检测细胞吞菌数量,判断RAW264.7细胞对SEZ的吞噬活性。进一步通过活细胞稳定同位素标记技术(SILAC)和蛋白质谱分析技术(LC-MS/MS),筛选到RAW264.7细胞中可能与SEZ Eno存在相互作用的候选蛋白。结果发现,10μg·mL^-1 rEno蛋白处理对RAW264.7细胞有明显的细胞毒性,且10μg·mL^-1 rEno蛋白处理RAW264.7细胞2和4 h可显著抑制其对SEZ的吞噬作用(P<0.01、P<0.05)。初步筛选到RAW264.7细胞中动力蛋白激活蛋白亚单位蛋白(dynactin subunit protein 2,Dctn)、整合素α-M蛋白(integrin alpha-M)等17种可能与Eno发生互作的蛋白。本研究获得了rEno重组表达蛋白,发现rEno可减少RAW264.7细胞对SEZ的吞噬,互作蛋白的初步筛选也为进一步揭示Eno在SEZ抗吞噬中的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 马链球菌兽疫亚种 烯醇化酶 RAW264.7细胞 吞噬作用 蛋白互作
下载PDF
基于SodC单克隆抗体的胞内劳森菌IPMA抗原检测方法的建立及应用 被引量:2
4
作者 李敏雪 李剑男 +4 位作者 周红 肖宁 蔺辉星 马喆 范红结 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第20期4478-4486,共9页
【目的】胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,LI)是引起猪增生性肠炎(porcine proliferative enteritis,PPE)的肠道病原菌,主要表现为动物福利下降,给世界养猪业造成严重的经济损失。研究通过制备鼠抗LI SodC的单克隆抗体,建立一种针... 【目的】胞内劳森菌(Lawsonia intracellularis,LI)是引起猪增生性肠炎(porcine proliferative enteritis,PPE)的肠道病原菌,主要表现为动物福利下降,给世界养猪业造成严重的经济损失。研究通过制备鼠抗LI SodC的单克隆抗体,建立一种针对LI的免疫过氧化物酶细胞单层试验(IPMA)抗原检测方法,检验其在临床上的应用性,从而为LI的病原诊断提供一种科学有效的手段。【方法】选取胞内劳森菌弱毒疫苗为研究对象,通过PCR扩增其sodc片段,将其克隆至原核表达载体pGex-6p-1上,成功构建出pGex-6p-1-sodc重组质粒,诱导表达重组蛋白SodC。Western Blot分析重组蛋白的反应原性,一抗使用鼠抗GST标签的抗体。以该重组蛋白为免疫原,免疫4—6周龄BALB/c小鼠,利用常规细胞融合技术、有限稀释法和间接ELISA技术筛选阳性杂交瘤细胞,并制备腹水。通过间接免疫荧光(IFA)鉴定该单抗的特异性。以该单抗为一抗,摸索并建立了LI IPMA抗原检测方法,并评价该方法的特异性、敏感性和重复性。用优化后的IPMA方法对来自江苏周边地区猪场回肠组织样品进行检测,评价该方法的临床价值。【结果】纯化后SodC蛋白浓度较高,与鼠抗GST标签的抗体发生特异性结合,表明该蛋白反应原性较好。经3次亚克隆后最终共筛选获得2株阳性杂交瘤细胞,分别命名为1D6和1F7。单抗亚型鉴定结果显示:1D6亚型为IgA,1F7亚型为IgG3;ELISA检测1D6单抗效价为1﹕1024000;1F7单抗效价为1﹕1024000;间接免疫荧光(IFA)结果表明2株单抗均与LI菌株发生特异性反应,与猪霍乱沙门氏菌(Salmonella Cholerasuis,S.Cholerasuis)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等猪常见病原无交叉反应。优化后IPMA反应条件为:一抗稀释倍数为1﹕800,作用45min;二抗稀释倍数为1﹕2500,作用1h,此时IPMA检测效果最佳。用该方法检测S.Cholerasuis、PEDV、TGEV、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2(PCV2)均为阴性;最低检测限为103个/mL,说明该方法特异性强、敏感性高。临床样品检测结果显示146份病料中共检测出92份阳性样品,3个不同猪场的阳性样品检出率分别为65.6%、68.2%和53.7%,总体阳性率为63.0%。普通PCR方法检测出82份阳性样品,两种方法的阳性符合率为94.6%。【结论】成功制备了鼠抗LI SodC蛋白的单克隆抗体,建立了针对LI抗原的IPMA检测方法,并对临床样品进行了检测。该方法具有良好的特异性和敏感性,并具有一定的临床价值,为实验室LI的分离鉴定、在感染细胞中的定位以及流行病学调查和相关检疫提供一种有效的技术手段。 展开更多
关键词 胞内劳森菌 SodC蛋白 单克隆抗体 免疫过氧化物酶细胞单层试验
下载PDF
OppA对副猪格拉菌突破猪呼吸道上皮屏障的影响
5
作者 刘明星 张鹏云 +3 位作者 陈敏 蔺辉星 周红 范红结 《畜牧与兽医》 北大核心 2022年第6期97-103,共7页
为了探究寡肽结合蛋白OppA在副猪格拉菌(Glaesserella parasuis,GPS)突破猪呼吸道上皮屏障过程中的作用,采用自然转化法构建副猪格拉菌HPS5-SQ的oppA缺失株ΔoppA,并通过测定ΔoppA在不同培养基中的生长曲线、黏附猪气管上皮细胞(swine ... 为了探究寡肽结合蛋白OppA在副猪格拉菌(Glaesserella parasuis,GPS)突破猪呼吸道上皮屏障过程中的作用,采用自然转化法构建副猪格拉菌HPS5-SQ的oppA缺失株ΔoppA,并通过测定ΔoppA在不同培养基中的生长曲线、黏附猪气管上皮细胞(swine tracheal epithelial cells,STEC)、穿透猪呼吸道上皮屏障、损伤紧密连接蛋白等能力来判定OppA对GPS定殖和突破猪呼吸道上皮屏障的影响。结果显示:通过PCR和Western blot验证,试验成功构建了ΔoppA,表达的重组OppA具有结合血红素功能;ΔoppA和HPS5-SQ野生株在TSB培养基中生长速度相当,黏附STEC能力没有差异;在加入血红素DMEM中,野生株的生长速度比ΔoppA快,对猪呼吸道上皮屏障破坏和紧密连接蛋白损伤能力比ΔoppA强。结果表明:OppA摄取血红素促进GPS生长,进而加速猪呼吸道上皮屏障损伤。 展开更多
关键词 副猪格拉菌 OppA 血红素 紧密连接蛋白
下载PDF
Effect of SrO Content on Structure,Thermal Properties and Chemical Stability of Bi2O3-B2O3-ZnO-SrO Low-melting Glass for Si-Al Alloy Package 被引量:2
6
作者 WU Zhilun ZHANG Ming +2 位作者 ZHANG Chunyan MENG Fancheng lin huixing 《Journal of Wuhan University of Technology(Materials Science)》 SCIE EI CAS 2020年第2期368-376,共9页
The 40Bi2O3-30B2O3-(30-x)ZnO-xSrO (x=0-15mol%,BBZSr) glass system was prepared by the conventional melt quenching method.The effect of SrO addition on structure,thermal properties,chemical stability and sealing perfor... The 40Bi2O3-30B2O3-(30-x)ZnO-xSrO (x=0-15mol%,BBZSr) glass system was prepared by the conventional melt quenching method.The effect of SrO addition on structure,thermal properties,chemical stability and sealing performance of BBZSr glass were investigated thoroughly.The experimental results show that the total proportions of [BO3] group and [BO4] group decrease and the vibrations of [BiO3] group and [BiO6] group become weaker with the increase of SrO addition content,suggesting the glass network structure is strengthened owing to the SrO addition.Hence,both the thermal and chemical stability were significantly improved as the SrO content was increased.When the SrO content increased from 0 to 15mol%,the glass transition temperature and softening temperature slightly increased from 380 to 388 ℃ and from 392.7 to 402.2 ℃,respectively,meanwhile the coefficient of thermal expansion also increased from 10.49×10^-6 to 11.16×10^-6/℃ (30-300 ℃).The BBZSr glass with 15mol% SrO exhibited excellent comprehensive properties with low glass transition temperature(384.9 ℃),low softening temperature(400.3 ℃),high coefficient of thermal expansion (11.14×10^-6 ℃,30-300 ℃),good thermal and chemical stability.Besides,the glass had the good wetting behavior and sealing performance for Al-50%Si alloy. 展开更多
关键词 low-melting sealing lead-free glass Bi2O3-B2O3-ZnO-SrO glass silicon-aluminium alloy thermal expansion
下载PDF
Sintering Behavior and Microwave Dielectric Properties of BBSZL Glass-doped ZnTiO_3 Ceramics for LTCC Applications 被引量:1
7
作者 周楚同 YANG Jianyu +2 位作者 lin huixing ZHANG Fan 任琳 《Journal of Wuhan University of Technology(Materials Science)》 SCIE EI CAS 2019年第2期282-286,共5页
A novel low temperature co-fired ceramic(LTCC) material was fabricated by zinc titanate(ZnTiO_3) ceramics doped with B_2O_3-BaO-SiO_2-ZnO-Li_2O(BBSZL) glass. The influences of BBSZL glass on wetting behavior, sinterin... A novel low temperature co-fired ceramic(LTCC) material was fabricated by zinc titanate(ZnTiO_3) ceramics doped with B_2O_3-BaO-SiO_2-ZnO-Li_2O(BBSZL) glass. The influences of BBSZL glass on wetting behavior, sintering activation energy, phase composition, microstructure and microwave dielectric properties were investigated. The experimental results show that the sintering temperature of ZnTiO3 ceramics can be reduced from 1 100 to 925 ℃, meanwhile the sintering activation energy is decreased from 465.32 to 390.54 kJ·mol^(-1) by BBSZL glass aid, respectively. Moreover, BBSZL glass can inhibit the high Q×f ZnTiO_3 phase decompose into the low Q×f value Zn_2TiO_4 phase, which is propitious to obtain high Q×f value LTCC material. The ZnTiO_3-BBSZL composite sintered at 925℃ displays the excellent microwave dielectric properties with ε_r of 21.8, Q×f value of 42000 GHz, and τ_f of-75 ppm·℃^(-1). 展开更多
关键词 ZnTiO3 CERAMICS BBSZL GLASS SINTERING behavior DIELECTRIC properties
下载PDF
2018-2019年欧盟化妆品通报情况统计及化妆品不合格原因分析 被引量:3
8
作者 高爱环 黄月梅 +2 位作者 林慧钘 吴利欢 钱初洪 《肇庆学院学报》 2020年第5期37-42,共6页
通过网上调研的方法,以欧盟非食品类产品快速预警官方网站发布的不合格化妆品信息为基础,统计了不合格产品的种类、来源和不合格项目,分析了主要不合格项目的危害和中国与欧盟在化妆品原料监管上的异同.
关键词 欧盟 不合格化妆品 风险 统计与分析
下载PDF
我国中东部主要养猪地区死亡育肥猪呼吸道病原菌的流行病学调查及猪多杀性巴氏杆菌的特性鉴定
9
作者 罗素贤 周红 +1 位作者 蔺辉星 范红结 《中国农业科学》 CAS 2024年第11期2254-2264,共11页
【目的】从我国中东部主要养猪地区因呼吸道疾病死亡的育肥猪病料中分离主要病原菌,并进行鉴定和分型,为近年流行的猪呼吸道病原菌的防控治疗提供流行病学依据。此外,对分离的猪多杀性巴氏杆菌(Pm)特性进行鉴定,为Pm疫苗研制提供参考。... 【目的】从我国中东部主要养猪地区因呼吸道疾病死亡的育肥猪病料中分离主要病原菌,并进行鉴定和分型,为近年流行的猪呼吸道病原菌的防控治疗提供流行病学依据。此外,对分离的猪多杀性巴氏杆菌(Pm)特性进行鉴定,为Pm疫苗研制提供参考。【方法】收集2021-2023年我国中东部主要养猪地区规模化猪场因呼吸道疾病死亡的育肥猪的病猪肺脏;用血琼脂和TSA培养基分离病原菌,通过微生物学和分子生物学方法鉴定分离菌株;合成adk、est、gdh、mdh、pgi、pmi和zwf基因引物,以分离的Pm为模板进行PCR,通过测序7对管家基因对Pm进行MLST分型;通过PCR对Pm进行荚膜分型和脂多糖分型;通过PCR对Pm的毒力因子进行检测;在ICR小鼠对单一分离的A型和部分D、F型Pm进行毒力鉴定;检测JS-65、JS-51和JS-34在ICR小鼠的LD_(50)。【结果】共分离Pm 73株,分离率为15.53%;分离猪链球菌(SS)71株、猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)29株和副猪格拉菌(GPS)10株,分离率分别为15.11%、6.17%和2.13%。分型结果表明,Pm主要为A:L3型,占55%;SS主要为9型,占38.03%;APP主要为15型,占51.72%;GPS主要为5/12型,占60%。混合感染包括Pm+SS,Pm+APP,SS+APP和Pm+APP+GPS,混合感染占总猪群的16.67%。共分离到3种Pm荚膜型:A(67%)、D(30%)和F(3%)型;2种脂多糖型:L3型(56%)和L6型(44%);9种ST分型:ST79、ST50、ST7、ST74、ST13、ST27、ST9、ST287和ST370,所占比例分别为33%、26%、16%、10%、4%、4%、3%、3%和1%。毒力基因检测结果表明:ptfA、fimA、hsf-2、exbB、exbD、tonB、fur、nanH、sodA和sodC的阳性率大于95%;hsf-1、pfhA、tadD、hgbA、hgbB、pmHAS、ompA、ompH、oma87和plpB阳性率在40%-90%之间;tbpA和nanB阳性率在10%-30%;未检出toxA。毒力鉴定结果表明A型菌株在剂量小于10^(2)CFU时导致小鼠全部死亡,D型菌株在10^(3)CFU剂量时小鼠死亡率为60%-100%,F型菌株在5×10^(3)CFU剂量时小鼠死亡率为60%。在ICR小鼠检测JS-65、JS-51和JS-34的LD_(50),结果表明JS-65 LD_(50)<10 CFU,JS-51 LD_(50)=6.3×10^(2)CFU,JS-34 LD_(50)=3.98×10^(3)CFU。【结论】2021-2023年我国中东部主要养猪地区病原菌分离结果表明,Pm、SS、APP和GPS是死亡育肥猪的主要呼吸道病原菌,Pm在肺脏中的分离率最高。采用RIRDC分型鉴定到一株ST370 Pm,拓展了猪Pm的MLST分型数据。Pm优势基因型为A:L3:ST79,其在ICR小鼠中毒力最强,最小致死量小于10 CFU,为后续Pm灭活疫苗研制奠定基础。 展开更多
关键词 流行病学 猪多杀性巴氏杆菌 鉴定 分子分型
下载PDF
二维编织陶瓷基复合材料偏轴拉伸力学性能预测 被引量:9
10
作者 王奇志 林慧星 许赟泉 《复合材料学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2018年第12期3423-3432,共10页
基于二维编织C/SiC复合材料的细观结构,建立了碳纤维丝/热解碳界面/SiC基体和纤维束/表层SiC基体两种尺度下的细观单胞模型,通过有限元方法计算碳纤维丝/热解碳界面/SiC基体模型的等效弹性常数和强度,然后代入纤维束/表层SiC基体模型中... 基于二维编织C/SiC复合材料的细观结构,建立了碳纤维丝/热解碳界面/SiC基体和纤维束/表层SiC基体两种尺度下的细观单胞模型,通过有限元方法计算碳纤维丝/热解碳界面/SiC基体模型的等效弹性常数和强度,然后代入纤维束/表层SiC基体模型中计算,并引入Tsai-Wu失效准则,考虑不同失效模式的损伤,建立了二维编织C/SiC复合材料的渐进损伤模型,模拟了其偏轴拉伸应力-应变行为。针对该模型,阐述了二维编织C/SiC复合材料单胞模型在复杂应力状态下其纤维束的损伤过程。数值模拟结果与实验数据吻合较好,验证了模型的有效性,为该种材料的力学性能分析提供了一种有效方法。 展开更多
关键词 二维编织陶瓷基复合材料 力学性能 多尺度分析 渐进损伤 有限元法
原文传递
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部