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新疆包虫病外科救治定点医院模式运行现状分析及探讨 被引量:1
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作者 李波霖 段新宇 +1 位作者 林仁勇 温浩 《现代医院管理》 2018年第6期27-29,共3页
通过描述新疆包虫病外科救治定点医院模式的运行现状,探讨该模式对包虫病防控的有效性。认为新疆包虫病外科救治定点医院模式适用于地广人稀、交通不便利的地区,并且具有完善的质量控制体系,可以有效合理分配医疗资源,减轻患者负担等优... 通过描述新疆包虫病外科救治定点医院模式的运行现状,探讨该模式对包虫病防控的有效性。认为新疆包虫病外科救治定点医院模式适用于地广人稀、交通不便利的地区,并且具有完善的质量控制体系,可以有效合理分配医疗资源,减轻患者负担等优势,为我国其他省(自治区)的包虫病救治工作的开展提供科学参考。 展开更多
关键词 包虫病 定点医院 新疆模式 现状
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针刺配合口服真武汤治疗原发性慢性肾病的疗效观察 被引量:4
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作者 林仁勇 张乐 +3 位作者 栾韶东 韦杏 孙天赐 杨利 《上海针灸杂志》 2020年第7期813-817,共5页
目的观察针刺配合口服真武汤治疗原发性慢性肾病的临床疗效。方法将90例原发性慢性肾病患者随机分为A组、B组和C组,每组30例。A组采用常规营养及对症治疗,B组在A组基础上采用口服真武汤治疗,C组在A组基础上采用针刺配合口服真武汤治疗... 目的观察针刺配合口服真武汤治疗原发性慢性肾病的临床疗效。方法将90例原发性慢性肾病患者随机分为A组、B组和C组,每组30例。A组采用常规营养及对症治疗,B组在A组基础上采用口服真武汤治疗,C组在A组基础上采用针刺配合口服真武汤治疗。观察3组治疗前后各项生化指标[血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、血尿酸(UA)、24 h尿蛋白定量(24 h UPro)、肾小球滤过率(GFR)水平]及右肾皮质、髓质各项血流量灌注指标[皮质到达时间(AT)、达峰值时间(PT)、峰值强度(PI)、上升支斜率(A)、曲线下面积(AUC)]的变化情况,并比较3组临床疗效。结果B组和C组治疗后各项生化指标及右肾皮质、髓质各项血流量灌注指标(AT、PT、PI、AUC)与同组治疗前比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。A组治疗后SCr、24 h UPro、GFR指标及右肾皮质、髓质PT与同组治疗前比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。B组和C组治疗后BUN指标及右肾皮质、髓质AT、PT与A组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。A组总有效率为66.7%,B组为86.7%,C组为93.3%。C组总有效率与A组和B组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);B组总有效率与A组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论针刺配合口服真武汤是一种治疗原发性慢性肾病的有效方法,能改善患者肾功能及肾血流灌注状态。 展开更多
关键词 针刺疗法 慢性肾病 真武汤 针药并用 肾功能 肾血流灌注
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基于国产替代背景下的5.0T核磁共振新技术进展及其优势分析 被引量:1
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作者 曾开奇 韦少丽 +4 位作者 王光明 林仁勇 翟燕雪 谢庆 廖依灵 《中国医疗器械信息》 2023年第24期41-43,共3页
经过30多年的发展,磁共振成像已经成为临床医学影像学检查的重要手段之一,它对各种严重疾病具有早期诊断和疗效监控能力,因此,磁共振成像技术是现代医学的新领域,代表着影像医学的发展方向。本文阐述了5.0T磁共振成像技术的最新发展和... 经过30多年的发展,磁共振成像已经成为临床医学影像学检查的重要手段之一,它对各种严重疾病具有早期诊断和疗效监控能力,因此,磁共振成像技术是现代医学的新领域,代表着影像医学的发展方向。本文阐述了5.0T磁共振成像技术的最新发展和临床应用的各种方法,并展望了磁共振成像的发展前景。 展开更多
关键词 磁共振成像5.0T 技术进展 磁共振成像新技术
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调节性T细胞转录因子Foxp3和IL-8在棘球蚴病患者肝组织病灶中的表达 被引量:4
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作者 单骄宇 热比亚.努力 +3 位作者 李瑞 林仁勇 温浩 李海涛 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期218-223,共6页
目的探究调节性T细胞转录因子Foxp3和IL-8在棘球蚴病患者肝组织病灶中的表达情况。方法收集2013年10月-2014年10月在新疆医科大学第一附属医院肝胆包虫外科住院的多房棘球蚴病(AE)患者、细粒棘球蚴病(CE)患者及其他非感染性肝病手术患... 目的探究调节性T细胞转录因子Foxp3和IL-8在棘球蚴病患者肝组织病灶中的表达情况。方法收集2013年10月-2014年10月在新疆医科大学第一附属医院肝胆包虫外科住院的多房棘球蚴病(AE)患者、细粒棘球蚴病(CE)患者及其他非感染性肝病手术患者的肝脏病变组织样品,制备切片,HE染色和免疫组织化学法观察肝脏组织中Foxp3的表达情况。蛋白质印迹(Western blotting)检测Foxp3的蛋白相对表达量。Trizol法提取肝脏组织总RNA,采用实时荧光定量PCR检测Foxp3、IL-8的mRNA相对表达水平。采用Spearman相关分析对AE组患者肝脏组织中的Foxp3与IL-8的相关性进行分析。组间两两比较采用t检验。结果共收集16例AE患者、23例CE患者和8例肝血管瘤手术患者的肝脏病变组织样品。HE染色后,镜下可见,AE患者肝脏组织角皮层和生发层均不完整,CE患者肝脏组织有较厚的板层状角皮层结构,肝血管瘤患者肝脏组织完整。免疫组织化学检测结果显示,AE患者肝脏组织中有大量表达Foxp3的阳性细胞,CE患者肝脏组织中有少量阳性细胞,肝血管瘤患者肝脏组织中无阳性细胞。Western blotting结果显示,AE患者、CE患者和肝血管瘤患者肝脏组织的Foxp3蛋白灰度值分别为0.977±0.082、0.728±0.094和0.290±0.084;AE患者、CE患者的蛋白灰度值分别与肝血管瘤患者两两比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);AE患者与CE患者间差异无统计学意义(P>0.05)。实时荧光定量PCR检测结果显示,AE患者、CE患者和肝血管瘤患者肝脏组织中的Foxp3 mRNA相对表达水平分别为0.013±0.003、0.007±0.002和0.004±0.001;AE患者的Foxp3 mRNA相对表达水平与肝血管瘤患者比较,差异有统计学意义(P<0.05);CE患者的Foxp3 mRNA相对表达水平分别与AE患者、肝血管瘤患者两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。AE患者、CE患者和肝血管瘤患者肝脏组织中的IL-8 mRNA相对表达水平分别为0.402±0.068、0.005±0.019和0.002±0.001;三者两两比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。Spearman相关分析结果显示,AE患者肝脏组织中的Foxp3与IL-8在mRNA相对表达水平上呈正相关(r=0.802,P<0.01)。结论 AE患者肝组织中的Foxp3 mRNA和IL-8 mRNA均高于CE患者,提示AE在一定程度上刺激机体分泌大量IL-8,并与Foxp3共同作用病患部位,形成严重的炎症反应。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴病 多房棘球蚴病 调节性T细胞 转录因子FOXP3 白细胞介素-8
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新疆棘球蚴病外科救助患者住院及相关费用影响因素分析 被引量:3
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作者 齐新红 李波霖 +5 位作者 殷雪峰 蔡焱 段新宇 林仁勇 卢晓梅 温浩 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期196-198,共3页
为了解新疆棘球蚴病患者的疾病负担,计算2014-2016年新疆棘球蚴病外科治疗定点医院救治的棘球蚴病手术患者住院及其相关费用,用t检验和方差分析进行连续变量的单因素分析,logistic回归分析患者住院及其相关费用的影响因素。结果共调查... 为了解新疆棘球蚴病患者的疾病负担,计算2014-2016年新疆棘球蚴病外科治疗定点医院救治的棘球蚴病手术患者住院及其相关费用,用t检验和方差分析进行连续变量的单因素分析,logistic回归分析患者住院及其相关费用的影响因素。结果共调查棘球蚴病外科救助项目手术患者1 448例,年总费用为80 407 344.75元,人均总费用为55 529.93元,中位数为44 740.47元。其中,住院费用为68 803 195.92元,人均费用为47 516.02元,中位数为36 652.37元;相关费用为11 604 148.83元,人均费用为8 013.91元,中位数为7 787.82元。单因素分析结果显示,有无医疗保险和住院天数是患者住院及其相关费用的影响因素。Logistic回归分析结果显示,有无医疗保险和住院天数是患者住院及其相关费用的主要影响因素(t=5.302、4.569,P<0.05)。建议可采取调整项目补助金额、提高医保报销比例、开展临床路径管理等措施,减轻患者住院及其相关费用的支出。 展开更多
关键词 棘球蚴病 住院及相关费用 影响因素
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包虫感染过程中Stub1负性调节Treg细胞的实验研究 被引量:1
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作者 单骄宇 李海涛 +4 位作者 热比亚.努力 周晓涛 林仁勇 丁剑冰 温浩 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期263-266,共4页
目的研究在包虫囊液刺激下泛素连接酶Stub1对Treg细胞转录因子Foxp3表达的影响。方法采用不同浓度比的包虫囊液粗抗原HCF(1∶2、1∶5、1∶10、1∶100)体外刺激HA-Foxp3a-Jurkat稳转系细胞;收集细胞,进行CD4^+CD25^(hi)CD127^(lo)T细胞分... 目的研究在包虫囊液刺激下泛素连接酶Stub1对Treg细胞转录因子Foxp3表达的影响。方法采用不同浓度比的包虫囊液粗抗原HCF(1∶2、1∶5、1∶10、1∶100)体外刺激HA-Foxp3a-Jurkat稳转系细胞;收集细胞,进行CD4^+CD25^(hi)CD127^(lo)T细胞分选,对分选的nTreg进行体外扩增,然后分别用1∶10、1∶100浓度比的HCF体外24、48h;收集nTreg细胞,利用Western blot方法检测Foxp3、Stub1蛋白表达情况。将工具细胞HEK293T细胞系分为两份,均进行HA-Foxp3a、myc-Stub1两种质粒的共转染,其中一份直接于转染后36h收集并裂解细胞,另一份在转染36h后进行HCF刺激时间依赖试验(HCF干预24、48h),收集细胞。两份细胞分别用anti-HA和anti-myc抗体作双向免疫共沉淀试验并检测Foxp3与Stub1两种蛋白的相互作用有无影响。结果 HCF为1∶10、1∶100时均可检测到HAFoxp3a蛋白;HCF浓度为1∶2或1∶5时未检测到HA-Foxp3a蛋白表达;且当HCF在较低浓度时(1∶100),HAFoxp3a的蛋白表达较其它各组增强。在一定浓度HCF刺激下,nTreg细胞随着HCF干预时间的延长,Foxp3蛋白表达减弱,而Stub1的蛋白表达与Foxp3蛋白相反。干预nTreg细胞24、48h时,HCF 1∶100刺激组Foxp3蛋白表达较1∶10刺激组增强。双向免疫沉淀试验显示,HEK293T细胞共转染HA-Foxp3a、myc-Stub1质粒后,随着HCF作用细胞的延长,Foxp3和Stub1蛋白的相互作用减弱。结论在持续感染状态下,包虫囊液参与调节Foxp3蛋白的表达。HCF可减弱Foxp3与Stub1蛋白间的相互作用,具有增强Stub1蛋白的负性调节作用。 展开更多
关键词 调节性T细胞 转录因子FOXP3 泛素连接酶Stub1 包虫感染
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FGL2在泡球蚴感染所致DC细胞成熟中的作用研究
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作者 郭琼 王俊华 +1 位作者 林仁勇 温浩 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第10期952-955,共4页
目的研究FGL2在泡球蚴感染所致DC细胞成熟中的作用及意义。方法 8~10周龄雌性野生型BALB/c小鼠12只和FGL2基因敲除小鼠12只,均随机分为2组:感染组6只,对照组6只。实验组腹腔注射0.1ml泡球蚴混悬液,对照组于相同部位注射等量PBS。感染后... 目的研究FGL2在泡球蚴感染所致DC细胞成熟中的作用及意义。方法 8~10周龄雌性野生型BALB/c小鼠12只和FGL2基因敲除小鼠12只,均随机分为2组:感染组6只,对照组6只。实验组腹腔注射0.1ml泡球蚴混悬液,对照组于相同部位注射等量PBS。感染后4个月将小鼠处死,取脾,制备脾细胞悬液,采用流式细胞术检测DC细胞成熟表面标记CD80及CD86的表达。留取血清,采用ELISA测定FG12水平。结果泡球蚴载量感染晚期fgl2-/-小鼠低于野生型小鼠,(F=8.426,P<0.05)。qRT-PCR检测泡球蚴感染晚期Em14-3-3mRNA表达,fgl2-/-小鼠低于野生型小鼠,(F=16.070,P<0.05);ELISA检测泡球蚴感染早期野生型小鼠和对照组血清FGL2,感染组高于对照组(F=13.995,P<0.05);流式细胞术检测泡球蚴感染小鼠腹腔细胞和脾脏细胞中CD11b+DC和CD11c+DC细胞CD80表达水平发现前者泡球蚴感染fgl2-/-小鼠晚期腹腔细胞中CD80表达水平显著高于野生型小鼠(F=236.303,P<0.05),后者在泡球蚴感染fgl2-/-小鼠晚期腹腔细胞和脾脏细胞CD80的表达水平均显著高于野生型小鼠(F=35.096,P<0.05);ELISA检测泡球蚴感染鼠中血清TNF-α水平发现泡球蚴感染fgl2-/-小鼠表达高于野生型小鼠(F=13.612,P<0.05)。结论在泡球蚴感染小鼠晚期,FGL2高表达可能参与泡球蚴感染引起的DC细胞成熟度降低及由此所致的免疫逃避有关。 展开更多
关键词 FGL2 泡球蚴 DC细胞成熟
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中国棘球蚴病防诊治体系建设与创新实践 被引量:16
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作者 阿卜杜萨拉木·艾尼 邵英梅 +5 位作者 吐尔干艾力·阿吉 张文宝 林仁勇 侯岩岩 张壮志 温浩 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期388-394,共7页
棘球蚴病(又称包虫病)是由棘球绦虫的幼虫感染所致的人兽共患寄生虫病,属于被忽视的热带病,呈全球性分布。在中国,细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病流行情况均居全球首位,对公共卫生构成威胁并造成巨大经济损失。我国西部地区多房棘球蚴病的... 棘球蚴病(又称包虫病)是由棘球绦虫的幼虫感染所致的人兽共患寄生虫病,属于被忽视的热带病,呈全球性分布。在中国,细粒棘球蚴病和多房棘球蚴病流行情况均居全球首位,对公共卫生构成威胁并造成巨大经济损失。我国西部地区多房棘球蚴病的疾病负担占全球90%以上。自中华人民共和国成立以来,我国棘球蚴病的防治取得了巨大成就,临床治愈率得到显著提高,并发症和死亡率明显下降,人群及动物宿主的感染率降低。21世纪以来,我国在棘球绦虫的遗传学、基因组学、分子流行病学和免疫学,棘球蚴病的诊断措施、治疗技术、防控策略以及疫苗研发等方面取得了鼓舞人心的成就。本文着重提出并阐述棘球蚴病防诊治体系的建设与创新实践,主要包括:科学防控体系、规范诊断体系、创新术式与药物治疗体系以及创新研究与转化应用。 展开更多
关键词 棘球蚴病 科学防控 规范诊断 创新术式 药物治疗 研究与转化
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多房棘球绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆、表达及其免疫诊断价值初步评价 被引量:4
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作者 孙立 林仁勇 +3 位作者 房彬彬 李亮 毕晓娟 王慧 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第6期634-638,642,共6页
目的克隆多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)硫氧还蛋白过氧化物酶(Thioredoxin peroxidase, TPx)基因,构建原核表达载体,诱导表达EmTPx蛋白,并初步评价其免疫诊断价值。方法从沙鼠中分离多房棘球绦虫原头蚴,提取总RNA,采用R... 目的克隆多房棘球绦虫(Echinococcus multilocularis,Em)硫氧还蛋白过氧化物酶(Thioredoxin peroxidase, TPx)基因,构建原核表达载体,诱导表达EmTPx蛋白,并初步评价其免疫诊断价值。方法从沙鼠中分离多房棘球绦虫原头蚴,提取总RNA,采用RT-PCR方法获取EmTPx的cDNA片段,克隆至原核表达载体pET-28a,构建重组表达质粒pET-28a-EmTPx,转化大肠埃希菌BL21进行目的蛋白的诱导表达及纯化,免疫小鼠制备抗EmTPx重组蛋白(rEmTPx)的多抗血清。通过Western blot对rEmTPx的免疫学特性进行鉴定,通过间接ELISA试验评价其免疫诊断价值。结果 PCR扩增EmTPx基因片段长度为582 bp,测序证实重组表达质粒pET-28a-EmTPx构建正确,表达的目的蛋白相对分子质量约为26×10^3,与理论值相符。Western blot显示该蛋白可被鼠抗rEmTPx多抗血清识别,以rEmTPx为抗原采用间接ELISA法检测AE患者血清,特异抗体的敏感性为66.2%,特异性为87.5%。结论成功构建了pET28a-EmTPx原核表达载体,表达蛋白具有Em原头蚴天然TPx的生物学功能表位,且具有一定的免疫学诊断价值,可作为AE血清学诊断的候选靶抗原。 展开更多
关键词 泡型包虫病 多房棘球绦虫 免疫诊断 硫氧还蛋白过氧化物酶 重组蛋白
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细粒棘球蚴感染对小鼠脾脏NKT细胞免疫功能的影响 被引量:3
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作者 尚琳琳 李玲慧 +3 位作者 李静 李亮 林仁勇 张传山 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2021年第8期902-908,共7页
目的探讨不同剂量细粒棘球蚴感染对小鼠脾脏NKT细胞(natural killer T cells)免疫功能的影响。方法经肝门静脉注射细粒棘球蚴建立C57BL/6小鼠感染模型,对照组注射生理盐水。感染组分为低剂量组(50个原头蚴,LD)、中剂量组(500个原头蚴,MD... 目的探讨不同剂量细粒棘球蚴感染对小鼠脾脏NKT细胞(natural killer T cells)免疫功能的影响。方法经肝门静脉注射细粒棘球蚴建立C57BL/6小鼠感染模型,对照组注射生理盐水。感染组分为低剂量组(50个原头蚴,LD)、中剂量组(500个原头蚴,MD)和高剂量组(2 000个原头蚴,HD)。于造模后12周采集小鼠肝脏和脾脏标本,采用HE及Masson染色检查肝脏病灶和纤维化程度;采用流式细胞术检测小鼠脾脏NKT细胞表型、不同NKT亚群比例,以及相关细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-10及IL-17A)的表达情况。结果不同剂量细粒棘球蚴感染组小鼠肝脏均可见囊泡结构样病灶,病灶周围出现胶原沉积,对照组肝脏仅汇管区可见少量胶原沉积。中、高剂量感染组小鼠脾脏NKT细胞比例分别为(1.34±0.27)%和(1.33±0.21)%,与对照组(2.54±0.43)%和低剂量组(2.41±0.53)%比较差异有统计学意义(F=16.451,P<0.05)。中、高剂量感染组小鼠脾脏CD69^(+)CD4^(+) NKT细胞比例分别为(15.6±2.00)%和(17.5±3.98)%,与对照组(11.1±2.82)%和低剂量组(11.1±1.31)%比较差异有统计学意义(F=8.130,P<0.05)。高剂量感染组小鼠脾脏CD69^(+)CD8^(+) NKT细胞比例为(70.1±7.52)%,与对照组(85.3±2.68)%和低剂量组(83.1±3.90)%比较差异有统计学意义(F=12.42,P<0.05)。中、高剂量感染组小鼠脾脏CD69^(+)DN NKT细胞比例分别为(29.3±2.02)%和(27.2±5.20)%,与对照组(35.6±4.26)%比较差异有统计学意义(F=3.277,P<0.05)。中、高剂量感染组小鼠脾脏NKT1型细胞分泌IFN-γ比例低于对照组和低剂量组(F=40.00,P<0.01)。高剂量感染组小鼠脾脏NKT2型细胞分泌IL-4比例高于对照组、低剂量组和高剂量组(F=10.54,P<0.001)。中、高剂量感染组脾脏NKT17型细胞分泌IL-17A比例低于对照组和低剂量组(F=13.00,P<0.01)。低、中、高剂量感染组脾脏NKT10型细胞分泌IL-10比例高于对照组(F=45.59,P<0.01)。中、高剂量感染组脾脏CD4^(+)NKT1型细胞分泌IFN-γ比例分别为(14.55±2.12)%和(10.43±0.85)%,与对照组(25.88±6.82)%和低剂量组(22.13±4.36)%比较差异有统计学意义(F=16.73,P<0.01)。低、中、高剂量感染组脾脏CD4^(+)NKT2型细胞分泌IL-4比例分别为(10.14±1.00)%、(10.64±0.73)%和(12.97±1.66)%,与对照组(7.07±0.72)%比较差异有统计学意义(F=19.99,P<0.01)。中、高剂量感染组脾脏CD4^(+)NKT17型细胞分泌IL-17A比例分别为(2.46±0.72)%和(2.26±0.57)%,与对照组(4.11±1.07)%和低剂量组(4.56±0.91)%比较差异有统计学意义(F=10.54,P<0.01)。低、中、高剂量感染组脾脏CD4^(+)NKT10型细胞分泌IL-10比例分别为(8.42±1.38)%、(12.65±4.19)%和(15.7±3.72)%,与对照组(4.66±0.87)%比较差异有统计学意义(F=15.78,P<0.01)。中、高剂量感染组脾脏CD8^(+)NKT型细胞分泌IFN-γ比例与对照组和低剂量组比较差异有统计学意义(F=20.08,P<0.01)。低、中、高剂量感染组脾脏CD8^(+)NKT型细胞分泌IL-10与高于对照组比较差异有统计学意义(F=24.41,P<0.01或P<0.001)。中、高剂量感染组脾脏DN NKT型细胞分泌IFN-γ比例与对照组和低剂量组比较差异有统计学意义(F=26.82,P<0.01)。低、中、高剂量感染组脾脏DN NKT型细胞分泌IL-10比例与对照组比较差异有统计学意义(F=22.96,P<0.05)。结论细粒棘球蚴感染中期,不同剂量感染诱导小鼠机体产生的细胞免疫反应由NKT1型和NKT17型模式转向NKT2型和NKT10型亚群优势,导致NKT细胞亚群之间的偏移失衡,造成细粒棘球蚴在宿主体内慢性寄生。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 细粒棘球蚴病 脾脏 自然杀伤T细胞
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EG14-3-3真核表达蛋白的纯化及空间结构的生物信息学预测 被引量:1
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作者 赵商岐 郑佳 +5 位作者 李艳敏 张传山 贾海英 龚巧巧 林仁勇 周晓涛 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第5期532-536,共5页
目的构建真核表达载体pcDNA3.1-EG14-3-3-myc-his,经表达、纯化后获得融合蛋白EG14-3-3-myc-his,并通过生物信息学预测EG14-3-3蛋白的空间结构。方法以pet41a-EG14-3-3为模板PCR扩增EG14-3-3基因的CDS区,经限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ... 目的构建真核表达载体pcDNA3.1-EG14-3-3-myc-his,经表达、纯化后获得融合蛋白EG14-3-3-myc-his,并通过生物信息学预测EG14-3-3蛋白的空间结构。方法以pet41a-EG14-3-3为模板PCR扩增EG14-3-3基因的CDS区,经限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后连接到真核表达质粒pcDNA3.1-myc-his A(-)中,构建真核表达质粒pcDNA3.1-EG14-3-3-myc-his。将质粒转染入293T细胞中表达EG14-3-3-myc-his蛋白,经亲和层析纯化后进行Western blot鉴定,通过在线网站对EG14-3-3蛋白空间结构进行生物信息学预测。结果成功构建pcDNA3.1-EG14-3-3-myc-his真核表达质粒,表达产物纯化后经SDS-PAGE电泳分析其分子质量为27.9 ku,与预期一致,且以第3次(4℃过夜)洗涤的靶蛋白含量较高。Western blot检测纯化后带有His标签的重组蛋白EG14-3-3-myc-his能被His单克隆抗体识别。生物信息学预测EG14-3-3蛋白无信号肽和跨膜区,其二级结构中的N端为无规则卷曲,之后紧连两个α螺旋,C末端为无规则卷曲和较短的片层结构。结论成功构建了pcDNA3.1-EG14-3-3-myc-his真核表达载体,通过蛋白纯化技术获得高纯度的蛋白。表达的EG14-3-3蛋白含有无规则卷曲,可能为抗原表位所在位置,为进一步研究14-3-3蛋白的功能及应用奠定了实验基础。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 EG14-3-3 真核蛋白表达 生物信息学预测
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泡球蚴感染小鼠肝脏α-SMA和Ⅰ型胶原的表达及其意义 被引量:4
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作者 谭雅超 李亮 +6 位作者 李智德 章宁 尚琳琳 王慧 张传山 林仁勇 张爱莲 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第11期1324-1327,共4页
目的探讨α-SMA和Ⅰ型胶原在不同剂量泡球蚴感染C57BL/6小鼠肝脏中的表达及其意义。方法采用门静脉注射法建立泡球蚴感染C57BL/6小鼠模型,分别设假手术(生理盐水)组、低剂量泡球蚴感染组(250个原头蚴)和高剂量泡球蚴感染组(1000个原头蚴... 目的探讨α-SMA和Ⅰ型胶原在不同剂量泡球蚴感染C57BL/6小鼠肝脏中的表达及其意义。方法采用门静脉注射法建立泡球蚴感染C57BL/6小鼠模型,分别设假手术(生理盐水)组、低剂量泡球蚴感染组(250个原头蚴)和高剂量泡球蚴感染组(1000个原头蚴),16周后采集小鼠肝脏标本,HE和天狼猩红染色鉴定肝脏纤维化程度,免疫组化法检测ɑ-SMA和Ⅰ型胶原的表达。结果HE染色显示高剂量泡球蚴感染组小鼠肝脏以成囊病灶为主要病理表现,低剂量泡球蚴感染组小鼠肝脏以修复病灶为主;天狼猩红染色显示高剂量泡球蚴感染组小鼠肝脏纤维化阳性面积比值为(32.63±9.24)%,低剂量泡球蚴感染组为(3.48±0.67)%,和假手术组为(0.50±0.17)%,差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化显示α-SMA在高剂量泡球蚴感染组小鼠肝脏中阳性表达面积比值为(10.68±1.18)%,低剂量泡球蚴感染组(2.38±0.35)%,假手术组为(0.36±0.09)%,差异有统计学意义(P<0.01);Ⅰ型胶原在高剂量泡球蚴感染组小鼠肝脏中阳性表达面积比值为(7.93±0.78)%,低剂量泡球蚴感染组为(2.38±0.35)%,假手术组为(0.26±0.08)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论Ⅰ型胶原的表达与泡球蚴感染剂量的增加和小鼠肝脏纤维化程度的加重呈正相关。 展开更多
关键词 泡球蚴 Α-SMA Ⅰ型胶原 纤维化
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泡球蚴感染C57BL/6小鼠不同阶段Ⅲ型胶原的表达及意义 被引量:4
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作者 马洋洋 毕晓娟 +5 位作者 李亮 张传山 吕国栋 杨宁 林仁勇 曾幼玲 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期382-386,共5页
目的探讨Ⅲ型胶原(Col3a1)在泡球蚴感染C57BL/6小鼠早期(1月,Em-1m)和中期(3月,Em-3m)的表达变化及意义。方法采用门静脉注射法建立泡球蚴感染小鼠模型,分别于感染后1个月和3个月将小鼠处死,取肝脏,HE染色和天狼星红染色观察纤维化程度... 目的探讨Ⅲ型胶原(Col3a1)在泡球蚴感染C57BL/6小鼠早期(1月,Em-1m)和中期(3月,Em-3m)的表达变化及意义。方法采用门静脉注射法建立泡球蚴感染小鼠模型,分别于感染后1个月和3个月将小鼠处死,取肝脏,HE染色和天狼星红染色观察纤维化程度,免疫组化检测Col3a1的表达。用60μg/ml泡球蚴蛋白体外刺激人肝星状细胞(LX-2)12h、24h、48h和72h后,qRT-PCR检测LX-2细胞中Col3a1mRNA表达水平。结果 HE染色显示泡球蚴感染组小鼠发生肝脏纤维化。天狼星红染色显示泡球蚴感染Em-1m组和Em-3m组胶原纤维阳性面积与假手术组(Sham组)比较有统计学意义(Em-1mvs Sham-1m:8.14±0.84vs 1.00±0.37;Em-3mvs Sham-3m:34.40±5.07vs1.00±0.08,P<0.01);Col3a1免疫组化检测阳性面积比值泡球蚴感染Em-1m和Em-3m组与假手术组比较有统计学意义(Em-1mvs Sham-1m:32.05±5.24vs 1.00±0.37;Em-3mvs Sham-3m:37.58±10.84vs 1.00±0.08,P<0.01)。qRT-PCR结果显示60μg/ml泡球蚴组织蛋白刺激LX-2 72h后Col3a1mRNA相对表达量为1.29±0.49,与刺激12h时的Col3a1mRNA相对表达量0.35±0.08相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论随着泡球蚴感染时间的增加,小鼠肝脏Col3a1表达逐渐增加且纤维化程度加重。 展开更多
关键词 泡球蚴 肝纤维化 肝星状细胞 Ⅲ型胶原
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Molecular characterization of a signal-regulated kinase homolog from Echinococcus granulosus 被引量:3
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作者 LI Jing ZHANG Chuan-shan +5 位作者 LU Guo-dong WANG Jun-hua WEN Hao YAN Gen-qiang WEI Xu-fa lin ren-yong 《Chinese Medical Journal》 SCIE CAS CSCD 2011年第18期2838-2844,共7页
Background Cystic echinococcosis due to Echinococcus granulosus (E. granulosus) is one of the most important chronic helminthic diseases, especially in sheep/cattle-raising regions. The larval stage of the parasite ... Background Cystic echinococcosis due to Echinococcus granulosus (E. granulosus) is one of the most important chronic helminthic diseases, especially in sheep/cattle-raising regions. The larval stage of the parasite forms a cyst that grows in the liver, lung, or other organs ofthe host. To ensure a long life in the host tissues, the parasite establishes complex inter-cellular communication systems between its host to allow its differentiation toward each larval stage. Recent studies have reported that this communication is associated with the extracellular signal-regulated kinase (ERK) mitogen-activated protein kinase cascade in helminth parasites, and in particular that these protein kinases might serve as effective targets for a novel chemotherapy for cystic echinococcosis. The aim of the present study investigated the biological function of a novel ERK ortholog from E. granulosus, EgERK. Methods DNA encoding EgERK was isolated from protoscolices of E. granulosus and analyzed using the LA Taq polymerase chain reaction (PCR) approach and bioinformatics. Reverse transcription PCR (RT-PCR) was used to determine the transcription level of the gene at two different larval tissues. Western blotting was used to detect levels of EgERK protein. The expression profile of EgERK in protoscolices was examined by immunofluorescence. Results We cloned the entire Egerk genomic locus from E. granulosus. In addition, two alternatively spliced transcripts of Egerk, Egerk-A, and Egerk-B were identified. Egerk-A was found to constitutively expressed at the transcriptional and protein levels in two different larval tissues (cyst membranes and protoscol(ces). Egerk-A was expressed in the tegumental structures, hooklets, and suckers and in the tissue surrounding the rostellum of E. granulosus protoscolices. Conclusions We have cloned the genomic DNA of a novel ERK ortholog from E. granulosus, EgERK (GenBank ID HQ585923), and found that it is constitutively expressed in cyst membrane and protoscolex. These findings will be useful in further study of the biological functions of the gene in the growth and development of Echinococcus and will contribute to research on novel anti-echinococcosis drug targets. 展开更多
关键词 Echinococcus granulosus CYST extracellular signal-regulated kinase
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