基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体TaqMan检测方法的建立及其遗传演化分析

热休克蛋白70 (heat shock protein 70,Hsp70)是绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, Movi)的重要膜蛋白,是机体内高度保守的生物分子,但在种间差异大,可作为分子生物学检测的候选靶区。为建立基于Hsp70基因的Movi通用型TaqMan实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法,并进一步了解其遗传变异情况,本研究基于GenBank中Movi的Hsp70基因特征,设计特异性的引物及探针,建立了基于Hsp70基因的绵羊肺炎支原体qPCR检测方法。应用建立的检测方法对88份山羊鼻拭子样品及43份疑似羊支原体性肺炎(Mycoplasmal pneumonia of sheep and goats, MPSG)病料进行检测。将检测结果为Movi阳性的肺组织样品进行分离鉴定,并对分离株Hsp70基因进行序列分析。结果显示,建立的qPCR检测方法其相关系数为1.00,扩增效率为96.0%,斜率为-3.411,Y轴截距为37.29。特异性强,与丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri, Mmc)、山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae, Mccp)、莱氏无胆甾原体(Acholeplasmalaidlawii, AL)、无乳支原体(Mycoplasma agalactiae, Maga)、伪结核棒状杆菌(Corynebacterium pseudotuberculosis, CP)、羊口疮病毒(orf virus, ORFV)、牛支原体(Mycoplasma bovis, Mb)等牛羊常见病原均无交叉反应;敏感性高,最低检测限为5.72 copies·μL^(-1);重复性优,组内变异系数和组间变异系数均小于1.00%。6株Movi分离株Hsp70基因全长均为1 818 bp,与其它Movi参考株核苷酸和氨基酸同源性分别为96.0%~99.4%和98.0%~100.0%;进一步分析发现,山羊源Movi均比绵羊源多1个N-糖基化位点。遗传演化分析表明,其均处于ClusterⅠA亚分支(均为山羊源)。综上,本研究建立了特异性强、敏感性高、重复性优的基于Hsp70基因的Movi的qPCR检测方法。序列分析发现,不同来源Movi的Hsp70基因核苷酸同源性高;遗传演化分析证实,Movi福建株与山羊源分离株遗传关系较近。本研究不仅为Movi临床诊断提供了技术支持,更为进一步了解Movi遗传演化规律提供参考。

基于最优邻域搜索粒子群的低轨卫星通信任务规划方法

针对低轨卫星通信中的任务规划问题,提出了一种基于最优邻域搜索粒子群优化(Particle Swarm Optimization,PSO)群算法的任务规划方法。引入最优近邻搜索,通过最优粒子间的差分值来促进局部搜索,设计了惯性权值、社会和自我学习因子的优化方式,最终能够高效求解低轨卫星通信星座中多转发器与多任务的组合优化问题,用以应对低轨卫星过境时间限制和链路切换导致的时间段离散问题,并使得算法前期具有更强探索全局最优和后期快速收敛的能力。实验验证结果表明,该方法能够在低轨卫星中的约束条件下,有效提高卫星平均资源占用率(Average Occupancy Percentage,AOP)的同时减少算法收敛的迭代次数,显著降低运行时间开销。

呼吸道感染患儿监护人线上结合线下健康教育效果评估——以汕尾市某综合三甲医院为例

目的评估学龄前呼吸道感染患儿监护人的知信行现状,并探究健康教育的干预效果。方法选取某三甲医院儿科169名住院患儿的监护人,对其实施线上结合线下的健康教育干预措施,并通过问卷调查法收集健康教育干预前后监护人在呼吸道感染防控方面的知识、态度和行为数据,分析干预前后知信行得分的差异及影响干预效果的因素。结果干预前,69.8%的监护人知识得分达到了合格标准,显示出监护人对呼吸道感染的认知度有限。经过健康教育干预后,患儿监护人知识得分合格率达到94.1%,呼吸道感染知识、态度、行为各维度得分及总得分均有提升,干预前后得分差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析示,不同年龄的监护人干预前后的知识得分差值具有统计学意义(P<0.05)。结论健康教育提升了监护人对学龄前儿童呼吸道感染防控的认知度、态度和行为,对降低呼吸道疾病感染率和促进儿童健康具有关键作用。

基于量子技术的跨域数据安全传输研究

在大数据时代下,多组织联合办公越来越普遍。数据在跨域传输时的安全共享、数据的分级分类安全管理是目前亟需解决的问题。设计一种基于量子技术的跨域数据安全传输模型,可以保证跨域传输时的数据安全共享及安全管理。将量子网关引入经典跨域传输系统,利用量子网关形成域内用户的身份证书,并完成跨域传输时的身份认证。当进行数据跨域传输时,数据发送方利用量子网关中的量子密钥保护跨域数据,并由量子网关为跨域数据形成数据签名,同时绑定跨域数据的唯一访问权限。当数据访问方的量子网关接收到跨域数据时,首先进行跨域身份的认证及数据完整性查验;然后由域控服务器进行权限的映射,只有权限相匹配的个人或部门才能解密跨域数据,最后数据访问者查看跨域数据,完成多组织的数据共享办公。理论分析表明提出的基于量子技术的跨域数据安全传输模型能够实现跨域数据的保护、用户及数据的分级分类管理、跨域身份认证,并具备更高的密钥安全性。

牛轮状病毒RT-PCR检测方法的建立及应用

【目的】建立牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)便捷检测方法,为福建省BRV的流行病学调查检测提供便捷技术支持。【方法】根据GenBank公布的BRV基因组序列,利用Oligo7.0软件设计并合成1对特异性引物,通过优化反应条件,建立了检测BRV的RT-PCR方法,同时开展了特异性、敏感性和重复性试验,并将建立的方法应用于22份临床样品的检测。【结果】建立的方法仅能够扩增出BRV的特异性片段,对其他畜禽常见病原体无特异性扩增;该方法的灵敏度为6.86×10^(5)copies·μL^(-1)。对22份临床样品进行检测,检测出12份阳性样品,阳性率为54.55%。【结论】本研究建立的BRV RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可应用于临床样本的检测,为福建省BRV的诊断和流行病学调查提供了技术支持。

福建省福清市山羊地方性鼻内肿瘤病毒2型感染流行病学调查

为了解福建省福清市山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)流行及遗传变异情况,通过Taq Man qPCR检测方法,对998份山羊鼻拭子样品进行ENTV-2核酸检测,并对阳性样品SU蛋白编码基因进行遗传进化分析。结果显示:在福清市16个镇街40个山羊养殖场户中,共检测出19个阳性场户、89份阳性样品,场阳性率为47.50%,个体阳性率为8.92%;9份阳性样品的SU蛋白编码基因均与ENTV-2位于同一进化分支,其中2份阳性样品处于相对独立的分支,与ENTV-2流行株同源性约为96%,且各有5处氨基酸突变,其他阳性样品与ENTV-2流行株同源性在99%以上,氨基酸序列一致。结果表明,ENTV-2在福清市流行较为广泛,流行毒株出现了一定的变异,需要持续加强监测,采取综合措施控制该病流行。本研究有助于了解和掌握ENTV-2在山羊群中的感染情况和遗传变异特征,为提高该病防治效果奠定了基础。

基于区块链的量子密钥全生命周期管理

为确保量子密钥从生成、分发、存储、使用、更新到销毁的安全性更高,提出一种基于区块链的量子密钥全生命周期管理方案。首先有保密通信需求的两方机构通过量子密钥分发设备产生真随机对称量子协商密钥,并将其分别存储在两方机构的量子设备管理员处;然后两方量子设备管理员协商量子密钥编号规则生成量子密钥文件;最后两方机构用户分别向各自量子设备管理员申请量子密钥用于通信。在通信过程中,与量子密钥生成、分发、使用、更新、销毁的相关日志信息上传到区块链,由量子设备管理员、通信用户协同区块链管理员完成量子密钥全生命周期的管理与追溯。理论分析表明:该方案能解决量子密钥在通信系统中无法有效追溯和管理的问题,可以实现对量子密钥全生命周期管理和追溯过程的透明可信。

山羊地方性鼻内肿瘤病毒SU蛋白的表达及其多克隆抗体的制备和特性分析

【目的】明确山羊地方性鼻内肿瘤病毒(ENTV-2)SU蛋白的功能。【方法】采用RT-PCR方法从ENTV-2FJ分离株中扩增获得SU基因片段,将其克隆到pMD-19T载体;测序验证后,再亚克隆到PET-32a(+)上,在RosettagamiB(DE3)感受态细胞进行表达,采用SDS-PAGE、Western-blot和ELISA对重组蛋白进行鉴定及抗原性分析。【结果】结果显示,表达的重组菌融合蛋白大小约64.38 kD,在IPTG终浓度0.4 mmol·L^(−1)、37℃诱导4 h表达效果最好。用纯化的ENTV-2进行SDS-PAGE,SU重组蛋白免疫小鼠制备的多克隆抗体作为一抗,进行Western-blot,结果显示鼠抗SU蛋白多克隆抗体能与ENTV-2抗原进行特异性的反应。【结论】表达的SU蛋白有较好的抗原性,为制备ENTV-2特异性单克隆抗体及建立ENTV-2特异性血清学方法奠定了基础。

我国“智慧养老”模式的核心问题与发展方向

利用智能信息技术开展养老服务的"智慧养老"模式为我国应对不断加剧的老龄化形势提供了新的思路和路径,为满足老年人不断增长的多样化和个性化养老服务需求提供了新选择。虽然,我国许多地方开展了"智慧养老"服务模式的试点实践,但就其所应发挥的潜力而言,"智慧养老"模式的健康发展仍然受到我国养老服务社会化水平不足的制约,亟需提高各种类型"智慧养老"服务平台的自身运作水平,增强社会养老服务资源调度和配置能力;加强"智慧养老"服务平台资源整合能力建设,提高社会养老服务资源供给水平;强化社会养老服务体系建设,为"智慧养老"模式提供优质服务资源。

“互联网+”视角下我国居家养老服务供给治理研究——以“虚拟养老院”为例

居家养老是我国九成以上老年人倾向的养老方式,大力发展社会养老服务,推进居家养老是我国制定各类养老政策的出发点。受社会养老服务体系建设不足、现代养老观念欠缺和智能信息技术落后等条件制约,处于分割离散状态的社会养老服务资源与多样化居家养老服务需求之间的供需失衡问题长期存在,严重影响了我国居家养老服务发展进程和广大老年人居家养老服务体验。"互联网+智能信息技术"的发展为我国居家养老服务供给问题治理提供了契机。作为这一理念的探索模式,"虚拟养老院"在我国历经10年发展,成就显著,但当下正遭遇政府财政压力加大、企业参与意愿走低和服务质量提升困难等"瓶颈"制约,亟需从服务主体、服务供给和服务运行等方面提升"虚拟养老院"服务社会化水平,推动我国居家养老服务供给实现优化。

我国特色小镇的理解维度与发展定位研究

当前,我国特色小镇建设的广度和深度都已经进入到一个新阶段。作为供给侧结构性改革的成功实践,特色小镇建设对各地的经济和社会发展起着重要的推动作用。特色小镇建设热潮的兴起反映了其巨大的扩张潜力和植根市场的旺盛生命力。在创新、协调、绿色、开放、共享的新发展理念指导下,特色小镇的"特色"定位必须致力于大做产业本色、人文底色、自然景色和宜居气色的"四色"文章,而对特色小镇之于当下中国经济和社会发展意义的理解更不能局限于经济转型、产业升级、城镇化、区域发展或者社会治理的任何单一环节,只有从统筹城乡发展,实现城乡一体化的高度与层次去认识和评定特色小镇的战略地位,才能为特色小镇建设创造创新性的政策空间和理解共识。

养老矛盾“溢出效应”下城镇居民养老保障的政府责任

当前我国的养老矛盾正在产生"溢出效应",养老责任边界从传统的家庭内部扩张至全体社会;养老主要责任主体从家庭成员转移至社会和政府;养老问题的经济属性升级为养老问题的政治属性。城镇居民养老保障是城镇养老保障体系中的短板。同时,城镇居民养老保障仍然面临政府养老观念更新、养老主体责任划分、养老服务资源供需失衡和养老服务满足率低下四个问题。政府应该从法律、经济、管理和引导四方面履行政府职责,完善城镇居民养老保障,为城镇居民提供老有优养的老年生活。

面向工业互联网隐私数据分析的量子K近邻分类算法

分析和利用工业互联网蕴含的海量人、机、物、系统数据信息,对优化覆盖全产业链、全价值链的制造体系和服务体系有重要的意义.然而对工业互联网大数据进行处理和分析,在带来无限机遇的同时,也带来了前所未有的隐私忧患.隐私安全是工业互联网安全的重要组成部分,研究带有保护隐私特性的工业互联网大数据分析算法已经非常紧迫和严峻.工业互联网大数据处理也对隐私性、高效性和准确性等有了更高的要求.鉴于此,提出了带有保护隐私特性的量子K-近邻(K-nearest neighbor,KNN)算法,找到了一种对原始训练样本集和待测样本的加密方法,使得向量子云服务器输入密文样本可以得到与输入原始样本相同的预测结果.该算法中一个预测结果反推可以得到N+1个输入数据,很难通过多次访问量子云服务器得到的预测结果反推模型、参数、输入数据及其相关属性特征,因此该算法可以很好地抵御模型提取攻击、模型逆向攻击、成员推断攻击、属性推理攻击等.与已有的量子机器学习算法隐私保护方案相比较,该隐私保护方案在隐私性、复杂度和可用性等3个方面均优于已有方案,实现了保护隐私性的同时,不增加额外计算开销,不降低算法效率和可用性,不影响算法准确性.该研究为量子机器学习隐私保护提供了一种新方法,也为提高工业互联网大数据分析在隐私性、高效性和准确性等方面的综合性能提供了一种新思路.

辐射制冷材料的制备及其性能

采用静电纺丝法和涂覆法制备了一系列含有无机添加剂的聚合物薄膜辐射制冷材料,利用自组装的辐射制冷测试装置,研究了不同聚合物不同添加剂对薄膜辐射制冷效果的影响。结果表明,加入ZnO、CaF2和ZnS的聚合物薄膜具有明显的辐射制冷效果。其中,涂覆法制备添加CaF2的聚合物薄膜辐射制冷效果最好。聚乙烯薄膜中添加0.2 g的CaF2(聚乙烯质量为5.0 g)测得的平衡温度从未添加时的37.1℃降低到34.0℃;聚氯乙烯纤维薄膜中添加0.023 4 g的CaF2(聚氯乙烯质量为3.6 g)测得的平衡温度从未添加的37.8℃降低到35.2℃。

新型鹅星状病毒FJ-NP株的分离鉴定

【目的】确定福建某鹅场雏鹅以痛风为主要病征导致高死亡率的病原。【方法】2019年8月福建省南平市某鹅场暴发一种以痛风为主要特征的疾病,该病在5~20日龄的雏鹅中发病率高达40%,死亡率为80%,对该场采集的3份样品进行实验室检测和病原分离鉴定。【结果】PCR检测结果显示3份样品新型鹅星状病毒均为阳性;细菌分离结果显示,未分离到细菌,排除细菌感染引起;接种11日龄鹅胚未出现死亡,但胚体全身皮肤出现点状出血,肾脏、肺脏均有出血点,对收集尿囊液和组织样品进行PCR检测结果显示只有新型鹅星状病毒阳性,未检测到其他鹅常见病毒,将其命名为FJ-NP;并对分离株部分ORF2基因进行遗传进化分析,结果表明该分离株与安徽(GD AHAU2、AHAU3、AHAU5)、黑龙江(AstV-Goose-2018-HLJ01)和河南(AstV-HN02-Goose-1119-18、AstV-AH02-Goose-0715-18、AstV-HB02-Goose-0310-19、AstV-HN03-Goose-0402-19)株在同一进化分支上,与湖北、北京、福建株亲缘关系较远。【结论】成功分离到了1株新型鹅星状病毒,同时进行ORF2部分基因遗传进化分析,为福建省后续开展新型鹅星状病毒相关研究提供了素材。

福建省部分养殖场鸡圆圈病毒3型病原检测及VP2基因分析

为了解福建省鸡场圆圈病毒3型(GyV3)的流行及其VP2基因变异情况,2021年在南平市、龙岩市和福州市的36个鸡场,采集365份疑似GyV3感染病鸡的腺胃样品,通过PCR进行GyV3核酸检测。结果显示:共检出GyV3核酸阳性55份,阳性检出率为15.06%。对5份GyV3阳性样品进行VP2基因序列分析发现,5份样品的VP2基因核苷酸和推导氨基酸序列相似性分别为98.6%~99.9%和98.3%~100%,与参考株山东肉鸡分离株SDAU-1和巴西家鸡分离株核苷酸和推导氨基酸序列的相似性分别为98.3%~99.2%和97.5%~99.2%,均属于Group A分支中的GyV3小分支。结果表明:福建省鸡场存在GyV3流行;其VP2基因遗传序列稳定,可作为GyV3感染流行病学监测的首选基因。本研究为GyV3的后续研究提供了理论依据。

4份临床样品中羊口疮病毒F1L、B2L和GIF基因的进化分析

【目的】研究2021年福建省部分羊场羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)分子流行病学情况。【方法】对2021年采集的4份病料经PCR鉴定ORFV阳性的临床样品分别克隆其F1L、B2L和GIF基因,将获得的克隆质粒送往测序公司进行测序,将测序拼接后的序列上传至GenBank数据库中,利用生物信息学软件进行对比分析。【结果】4份临床样品中ORFV的F1L、B2L和GIF基因核苷酸序列相似性分别为98.0%~98.8%、98.4%~99.5%和97.2%~99.6%;与国内流行毒株核苷酸序列相似性分别为97.4%~99.4%、97.4%~99.9%和95.7%~99.0%;与国外流行毒株核苷酸序列相似性分别为97.5%~98.6%、97.9%~98.9%和95.6%~98.0%;与德国D1701弱毒株核苷酸序列相似性分别为96.5%~96.8%、98.0%~98.7%和96.0%~96.4%,与NZ2参考株核苷酸序列相似性分别为97.7%~98.1%、97.5%~98.1%和95.9%~96.1%。遗传进化树结果显示4份临床样品中ORFV与吉林(NA17、SY17和CL18株)、福建SJ1株和印度MP株亲缘关系较近;与美国OV-IA82株、德国D1701弱毒株、新西兰NZ2参考株和中国疫苗株亲缘关系较远;表明当前流行毒株可能是本省毒株、国内吉林GZ18株和国外印度MP株的重组毒株。【结论】获得4份临床样品中ORFV B2L、F1L和GIF基因序列并上传至GenBank数据库中,丰富了ORFV相关基因序列的数据库,同时阐明福建省部分羊场当前ORFV的流行特征,为福建省今后有效防控Orf提供理论依据。

羊口疮病毒115基因的克隆及原核表达

[目的]获得羊口疮病毒(ORFV)115基因表达蛋白。[方法]利用Oligo 7软件设计并筛选出115基因特异性扩增引物,以ORFV FJ-ND株基因组为模板,通过PCR技术扩增获得其基因序列,再将115基因克隆至pGEX-6p-1上,重组质粒pGEX-6p-115,并对其进行测序鉴定,鉴定正确后转化RosettaganmiB(DE3)感受态细胞,通过优化IPTG浓度和诱导时间获得重组融合蛋白最佳表达条件,用SDS-PAGE对表达的目的蛋白进行分析。[结果]115基因全长450 bp,编码149个氨基酸;115基因可以在RosettaganmiB中表达,重组蛋白分子大小约42 kDa,主要以包涵体形式表达。[结论]成功克隆了ORFV 115基因,构建了pGEX-6P-115原核表达质粒,优化了重组蛋白表达条件并进行纯化,为进一步探索ORFV 115蛋白在感染宿主过程中的机制和作用奠定基础。

碳化-氧化废报纸用于太阳能水蒸发

碳材料有优异的宽波段光吸收特性和良好的光热转换性能,因此可以用于太阳能水蒸发。将废旧报纸碳化-氧化处理后得到碳材料,用X射线粉末衍射仪和扫描电子显微镜对样品进行相组成和微观结构表征,用紫外-可见光谱仪测试样品的光吸收性能,并且用自组装的装置进行太阳能水蒸发性能测试。结果表明:经过碳化-氧化处理后的废旧报纸在太阳光谱范围吸收率高于87%,在紫外-可见光区的吸收率达到93%,和水的接触角接近零。在一个太阳光强度下,碳化-氧化废旧报纸的水蒸发速率为0.76 kg·(m 2·h)-1,是未加样品时的4倍。样品用于海水淡化时所得淡水的离子含量符合国家饮用水标准,用于甲基橙溶液的处理可以实现完全脱色。

一例鸡细小病毒、鸡传染性贫血病毒及鸡传染性支气管炎病毒共感染病例的检测

【目的】对福建省南平市某肉鸡场不明病因造成肉鸡死亡的病原进行确诊。【方法】通过对鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)、腺病毒(Fowl adenovirus, FadV)、鸡细小病毒(Chicken parvovirus,ChPV)、新城疫病毒(Newcastlediseasevirus, NDV)、鸡传染性贫血病毒(Chickeninfectiousanemiavirus,CIAV)、传染性法氏囊病毒(InfectiousbursalDiseasevirus, IBDV)、喉气管炎病毒(Laryngotracheitisvirus,LTV)、禽肾炎病毒(Avian nephritis virus,ANV)等病原进行PCR检测,并对扩增片段进行克隆测序,利用生物信息学软件对测序结果进行分析。【结果】PCR检测结果及测序结果显示:鸡细小病毒ChPV、鸡传染性支气管炎病毒IBV、鸡传染性贫血病病毒CIAV为阳性,其余病原检测结果均为阴性。同源性分析结果显示分离株与ChPV的同源性为92.17%~100%,与IBV的同源性为76.9%~84.3%,与CIAV的同源性为91.19%~92.14%;遗传进化树分析结果显示分离到的IBV毒株及CIAV毒株均独处于一个单独的分支,分离到的ChPV毒株与广西参考株亲缘关系较近。【结论】从南平市某鸡场检测到ChPV、IBV、CIAV等3种病原的共感染病例,分离到的IBV毒株的S1基因及CIAV毒株的VP1基因可能已经发生变异。