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基于模型驱动的密码算法可视化开发平台研究
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作者 肖超恩 刘昌俊 +2 位作者 董秀则 王建新 张磊 《密码学报(中英文)》 CSCD 北大核心 2024年第2期357-370,共14页
针对密码算法开发平台普适性差、无法跨平台的问题,本文采用模型驱动实现密码算法开发的方法,设计了一种基于模型驱动的密码算法可视化开发平台,提出了一种基于模型驱动的密码算法开发的领域语言—MCL密码元语言;实现了基于模型的代码... 针对密码算法开发平台普适性差、无法跨平台的问题,本文采用模型驱动实现密码算法开发的方法,设计了一种基于模型驱动的密码算法可视化开发平台,提出了一种基于模型驱动的密码算法开发的领域语言—MCL密码元语言;实现了基于模型的代码生成器和代码映射器.实验证明,该开发平台仅需要开发者拖拽图形块的操作就可以实现密码算法模型的建立,然后平台可以根据建立的密码算法模型生成不同编程环境下的代码.平台实现了C和python的代码映射器模块,密码算法模型可快速映射为C、python代码.平台有较好的实用性,开发者的密码算法实现过程简洁、高效,不同编程环境下的代码均可以通过平台自动生成,提高了密码算法实现的跨平台性. 展开更多
关键词 密码算法实现 模型驱动 领域专用语言(DSL) 代码生成技术
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聚合工艺对聚吡咯改性石墨毡电极结构及其氧还原性能的影响 被引量:1
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作者 郭华珍 唐思扬 +6 位作者 钟山 吴潘 蒋炜 吴可荆 刘长军 鲁厚芳 梁斌 《应用化工》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期1-7,共7页
对石墨毡进行电化学聚合吡咯改性,考察聚合时间、脉冲次数和间隔时间对聚吡咯改性石墨毡电极形貌结构和电化学性能的影响。结果表明,通过聚合脉冲时间、脉冲次数和脉冲间隔时间可以调控聚吡咯涂层的厚度、形貌和亲水性。在聚合脉冲时间... 对石墨毡进行电化学聚合吡咯改性,考察聚合时间、脉冲次数和间隔时间对聚吡咯改性石墨毡电极形貌结构和电化学性能的影响。结果表明,通过聚合脉冲时间、脉冲次数和脉冲间隔时间可以调控聚吡咯涂层的厚度、形貌和亲水性。在聚合脉冲时间为100 s、间隔时间为120 s,脉冲次数为10次的条件下,得到的聚吡咯改性石墨毡电极的2电子氧还原活性最高,其电化学活性比表面积最大,达到1.5028 cm^(2)/cm^(3),在pH=3的硫酸钠溶液中,其H_(2)O_(2)累积速率最大,为25.775 mol/(m^(3)石墨毡·h),是未改性石墨毡上H_(2)O_(2)累积速率的3.17倍。 展开更多
关键词 碳电极 聚吡咯 聚合物 电化学
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血清Ⅱ型鸡马立克氏病毒的分离鉴定及SW14分离株pp24基因的序列分析
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作者 林雨萌 胡明雪 +10 位作者 刘长军 葛成菲 郭榕容 李凯 崔红玉 高立 祁小乐 王素艳 王笑梅 高玉龙 张艳萍 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期864-868,共5页
为了解鸡马立克氏病毒(MDV)在我国鸡群中的流行情况,本研究于2021年从福建省已免疫鸡马立克氏病(MD)疫苗鸡群且发生疑似MD病例的鸡场采集21份疑似发病蛋鸡外周血,分离其淋巴细胞接种鸡胚成纤维细胞(CEF),5 d后收集病毒,盲传1~2代后获得2... 为了解鸡马立克氏病毒(MDV)在我国鸡群中的流行情况,本研究于2021年从福建省已免疫鸡马立克氏病(MD)疫苗鸡群且发生疑似MD病例的鸡场采集21份疑似发病蛋鸡外周血,分离其淋巴细胞接种鸡胚成纤维细胞(CEF),5 d后收集病毒,盲传1~2代后获得21株能够形成典型MDV蚀斑的分离株,依次命名SW1~SW21,采用PCR分别扩增MDV血清Ⅰ型(MDV-1) Meq基因、Ⅱ型(MDV-2) ORF873基因、Ⅲ型(MDV-3) US3基因进行MDV分型鉴定,扩增鸡传染性贫血病毒(CAV) VP3基因、禽网状内皮组织增殖病病毒(REV) LTR基因、禽白血病病毒A亚群(ALV-A)、B亚群(ALV-B)、J亚群(ALV-J)的env基因进行外源病毒检测,结果显示MDV-1均为阴性,MDV-2均为阳性,MDV-3阳性率为38.1%(8/21),未检测到外源病毒基因。在MDV-2分离株中选择SW14株进行pp24基因的PCR扩增,测序后与MDV-2参考株SB-1、301B/1、HPRS24的pp24基因进行基因序列比对分析,结果显示,SW14和SB-1株同源性(96.3%)最高。通过透射电镜观察SW14,可见分离株呈双环型,直径约110 nm,符合MDV病毒粒子形态特征。本研究证实该鸡场中存在MDV-2流行,可能会影响疫苗的免疫效果,但其致病性有待进一步研究。本研究从疑似发病蛋鸡中分离到新的MDV-2株,为我国MDV-2的研究提供重要参考依据,同时为我国MD疫情防控提供有价值的研究材料。 展开更多
关键词 鸡马立克氏病毒 分离鉴定 血清Ⅱ型 血清Ⅲ型 pp24基因序列分析
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“大思政课”的马克思主义理论基础探析 被引量:6
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作者 刘长军 王东宇 《北京科技大学学报(社会科学版)》 2023年第2期181-187,共7页
马克思主义既是“大思政课”建设的指导思想,也是其根本的理论支撑。“大思政课”强调的立德树人根本任务与马克思主义关于人的自由全面发展理论之间具有直接的承继关系,后者对破解人才培养的“单向性”弊端具有重要意义。“大思政课”... 马克思主义既是“大思政课”建设的指导思想,也是其根本的理论支撑。“大思政课”强调的立德树人根本任务与马克思主义关于人的自由全面发展理论之间具有直接的承继关系,后者对破解人才培养的“单向性”弊端具有重要意义。“大思政课”所倡导地发挥好各部门、各环节之间的“协同效应”,与辩证唯物主义的系统观念之间存在高度的契合性,后者对于从大局观念等方面推进“大思政课”建设提供方法论指导。“大思政课”的构成要素之间以及“大思政课”与环体之间所呈现的矛盾关系,能够用马克思主义矛盾理论很好地阐释。“大思政课”基于中国特色社会主义实践而形成的新理念新思想,可以用实践、认识、再实践、再认识的马克思主义认识论阐释清楚。总体看,“大思政课”建设既需要马克思主义作为其理论基础,更需要我们将马克思主义基本理论与“大思想课”的建设实际相结合,不断推进“大思政课”建设创新发展。 展开更多
关键词 大思政课 理论基础 马克思主义 创新发展
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基于改进Xception的槟榔分类算法 被引量:1
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作者 刘昌俊 焦建格 邹国平 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2023年第3期96-102,共7页
目的:降低槟榔分类对人工的需求,同时提升槟榔分类的准确度和缩小分类模型。方法:以扩充Xception的输入层作为特征提取骨干网络;在特征提取网络后加入双路压缩激励模块;使用ELU激活函数代替ReLU;使用数据增强扩充槟榔的数量,将数据集以9... 目的:降低槟榔分类对人工的需求,同时提升槟榔分类的准确度和缩小分类模型。方法:以扩充Xception的输入层作为特征提取骨干网络;在特征提取网络后加入双路压缩激励模块;使用ELU激活函数代替ReLU;使用数据增强扩充槟榔的数量,将数据集以9∶3∶1划分为训练集、验证集和测试集,用于训练改进Xception模型。结果:使用改进的Xception对测试集1100张槟榔图像分类时达到了99.182%的分类准确度,同时模型大小仅有15.7 MB。结论:改进后的模型能够满足对槟榔分类的准确度和模型大小的要求。 展开更多
关键词 Xception 双路注意力 ELU 准确度 轻量
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海南捕鸟蛛毒素-Ⅳ在大肠杆菌中的分泌表达及纯化
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作者 刘长军 王健杰 +4 位作者 易可 张哲扬 李慧敏 严青 孟尔 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期1191-1199,共9页
海南捕鸟蛛毒素-Ⅳ(hainantoxin-Ⅳ,HNTX-Ⅳ)是从海南捕鸟蛛(Selenocosmia hainana)的毒液中分离得到的一种可以特异性抑制河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道的多肽毒素,并且能够选择性抑制Nav1.7亚型电压门控钠离子通道。HNTX-Ⅳ的成熟肽含... 海南捕鸟蛛毒素-Ⅳ(hainantoxin-Ⅳ,HNTX-Ⅳ)是从海南捕鸟蛛(Selenocosmia hainana)的毒液中分离得到的一种可以特异性抑制河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道的多肽毒素,并且能够选择性抑制Nav1.7亚型电压门控钠离子通道。HNTX-Ⅳ的成熟肽含有35个氨基酸残基,其结构通过3对二硫键稳定。HNTX-Ⅳ是研究钠通道结构和功能以及镇痛药物开发过程中非常有用的一种分子探针,但是其在天然毒素中的含量较少,很难分离足够量的组分进行后续研究。在本研究中,我们通过OEPR克隆构建了HNTX-Ⅳ的大肠杆菌分泌表达质粒pSE-G1M5-SUMO-HNTX-Ⅳ。将质粒pSE-G1M5-SUMO-HNTX-Ⅳ转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行自动诱导分泌表达,含有6×His标签和SUMO标签的融合蛋白质6×His-SUMO-HNTX-Ⅳ成功分泌到大肠杆菌的细胞外培养基中。通过弱阳离子交换柱富集和Ni-NTA柱纯化之后,成功获得了纯度较高的融合蛋白质6×His-SUMO-HNTX-Ⅳ。通过Ulp1激酶切割,重组HNTX-Ⅳ(rHNTX-Ⅳ)被释放出来,并通过RP-HPLC分离获得。通过MALDI-TOF质谱鉴定rHNTX-Ⅳ分子量为3.9876kD。通过膜片钳技术,10μmol/L的rHNTX-Ⅳ能够抑制90%以上的hNav1.7的电流,其IC_(50)值为126 nmol/L。本研究成功将HNTX-Ⅳ分泌到了大肠杆菌的细胞外培养液中,并最终获得了纯度较高且具有生理活性的rHNTX-Ⅳ分子,丰富了HNTX-Ⅳ的制备方法,为其后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 海南捕鸟蛛毒素-Ⅳ 细胞外分泌表达 大肠杆菌
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养殖中华鳖蜡样芽孢杆菌的分离、鉴定和致病性研究 被引量:10
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作者 孟庆珍 尹飞 +6 位作者 傅超英 陈凡 刘长军 袁娜 王力 张鸿鹄 钱冬 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期570-578,共9页
2016年夏杭州某中华鳖(Pelodiscus sinensis)养殖场出现大量发病,病鳖呈厌食、反应迟钝、四肢无力、池边独游、濒死前不停摇头等病症,死亡率20%以上。用营养琼脂从典型症状濒死中华鳖分离到革兰阳性短杆状,芽孢近中生或中生的分菌株; AP... 2016年夏杭州某中华鳖(Pelodiscus sinensis)养殖场出现大量发病,病鳖呈厌食、反应迟钝、四肢无力、池边独游、濒死前不停摇头等病症,死亡率20%以上。用营养琼脂从典型症状濒死中华鳖分离到革兰阳性短杆状,芽孢近中生或中生的分菌株; API 50 CHB对分离菌株T91-1鉴定结果显示与蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)参考菌株ATCC 14579 97.4%相似; T91-116S rDNA和gyrB基因序列与ATCC 14579相似度为99%,确认T91-1为蜡样芽孢杆菌。T91-1在羊血平板呈典型β溶血,牛奶平板上出现明显透明圈,表明存在溶血性和胞外蛋白酶类毒素。用T91-1肌肉注射感染健康中华鳖LD50为4.91×10~5CFU/ind.,死亡鳖出现与自然发病鳖类似症状;感染发病中华鳖血和肝印/涂片瑞氏-姬姆萨染色可见组织间隙有大量芽孢杆菌。自然发病鳖肾、肝、肺、心病理切片可见大量芽孢杆菌,病鳖血管扩张充血,嗜酸性粒细胞浸润。T91-1灌胃ICR乳鼠3d后可全部死亡,死亡鼠呈皮下出血等症状; T91-1腹腔注射和灌胃ICR 4周龄小鼠12—24h可出现迟钝、厌食等症状, 1周内未出现死亡。上述结果表明蜡样芽孢杆菌对中华鳖有很强毒力,对小鼠有较强肠毒性,是引起本次杭州中华鳖暴发性疾病的病原。 展开更多
关键词 中华鳖 蜡样芽孢杆菌 鉴定 致病性
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顺北1-4H井超深小井眼中短半径水平井钻井难点及技术对策 被引量:8
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作者 张建龙 温伟 +2 位作者 刘卫东 刘长军 高炳堂 《探矿工程(岩土钻掘工程)》 2018年第4期17-22,共6页
顺北油田是中国石化西北油田分公司塔河油田接替区域,顺北油田是目前国内最深的油气藏,地层温度、压力高,很多地方奥陶系桑塔木组含有辉绿岩,受辉绿岩影响,不得不用超深小井眼中短半径水平井钻井。以顺北1-4H井为例,该井面临托压、温度... 顺北油田是中国石化西北油田分公司塔河油田接替区域,顺北油田是目前国内最深的油气藏,地层温度、压力高,很多地方奥陶系桑塔木组含有辉绿岩,受辉绿岩影响,不得不用超深小井眼中短半径水平井钻井。以顺北1-4H井为例,该井面临托压、温度高而仪器配套难、轨迹难以控制等难题。针对顺北1-4H井难题进行分析,形成了相应的技术对策,顺北1-4H井采取这些对策成功钻至目标地层,获得了良好的油气发现。顺北1-4H井采用■120.65mm小井眼钻井,完钻井深8049.50m,创造了■120.65mm小井眼水平井井深最深纪录。顺北1-4H井的成功完井,为超深小井眼水平井钻井的施工提供了很好的借鉴经验。 展开更多
关键词 超深井 中短半径水平井 托压 井身轨迹 顺北地区
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地方高校临床医学专业本科生循证医学认知及态度调查 被引量:2
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作者 王静 刘锐 +5 位作者 曾敬 刘颖 陈晋 郑弘 刘长俊 郭怀兰 《当代医学》 2017年第5期5-7,共3页
目的解地方高校临床医学专业本科生对循证医学的认知及态度,为提高本科生循证医学教学水平提供依据。方法采用自制问卷,对大学三年级314名临床医学专业学生在涉及循证医学知识的相关课程开课前后进行两次调查。结果发放问628卷份,有效问... 目的解地方高校临床医学专业本科生对循证医学的认知及态度,为提高本科生循证医学教学水平提供依据。方法采用自制问卷,对大学三年级314名临床医学专业学生在涉及循证医学知识的相关课程开课前后进行两次调查。结果发放问628卷份,有效问卷596份。学生获取循证医学知识的途径主要通过课程,学术讲座和医学杂志;49.6%的学生学对认为循证医学是最佳证据和临床经验及患者价值的结合,学习循证医学可以指导临床科研和提高业务水平,但77.5%的比例认为循证医学有助于发文章。学习循证医学的困难主要集中在英语水平和文献检索方面。结论地方高校临床医学专业本科生对循证医学的认知程度较低,但对循证医学有较高的学习积极性。应针对学生的背景和需求开展循证医学教学。 展开更多
关键词 医学生 循证医学 教学 调查
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涂料生产行业RTO设备典型爆炸及泄爆过程模拟 被引量:3
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作者 刘长军 闵春燃 沈晓波 《安全与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期1369-1375,共7页
采用Fluent软件建立典型的物理模型及数值模型来模拟RTO燃烧室发生苯气体爆炸事故及其泄爆过程。结果表明:点火源设置在RTO底部且泄爆口设置在顶部时,更有利于保证RTO设备的系统安全。泄爆口开启后,燃烧室内的压力会在20 ms内达到常压,... 采用Fluent软件建立典型的物理模型及数值模型来模拟RTO燃烧室发生苯气体爆炸事故及其泄爆过程。结果表明:点火源设置在RTO底部且泄爆口设置在顶部时,更有利于保证RTO设备的系统安全。泄爆口开启后,燃烧室内的压力会在20 ms内达到常压,泄爆过程普遍存在二次峰值现象。燃烧室爆炸过程中燃烧室内达到压力峰值的时间随初始温度的升高而缩短,最大爆炸压力随温度升高而减小;燃烧室内达到的爆炸压力峰值随苯蒸气-空气初始化学计量比的增大呈现先增大后减小趋势,在化学计量比为1.4时,爆炸压力峰值最大。 展开更多
关键词 安全工程 挥发性有机气体 蓄热式废气焚烧炉 泄爆 FLUENT
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我国传染性法氏囊病病毒新型变异株分析研究 被引量:21
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作者 范林进 王雨龙 +13 位作者 吴甜甜 李凯 姜楠 高玉龙 高立 刘长军 崔红玉 潘青 张艳萍 刘玉凤 孙先本 刘俊启 王笑梅 祁小乐 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1164-1169,共6页
近期非典型传染性法氏囊病(IBD)给养禽业带来了新的威胁,本研究团队率先鉴定发现其病原为IBDV新型变异株。为了解该IBDV新型变异株流行规律和致病特点,本研究对2018年9月~2019年6月分离自黑龙江、辽宁、河北、山东、江苏、浙江、云南7... 近期非典型传染性法氏囊病(IBD)给养禽业带来了新的威胁,本研究团队率先鉴定发现其病原为IBDV新型变异株。为了解该IBDV新型变异株流行规律和致病特点,本研究对2018年9月~2019年6月分离自黑龙江、辽宁、河北、山东、江苏、浙江、云南7个省的32个IBDV代表株的VP2基因高变区进行了遗传演化分析,结果显示,IBDV新型变异株虽然属于变异株分支,但却不同于美国早期变异株,其形成了一个独立的亚群。动物回归试验结果显示,IBDV新型变异株不致死鸡,但造成其中枢免疫器官法氏囊严重萎缩,B淋巴细胞崩解坏死,复制出了非典型IBD的症状。本研究测定了IBDV新型变异株的最低致病剂量,并依据病毒自身特殊性状,首次提出用法氏囊半数萎缩量(BAD50)作为IBDV新型变异株的病毒效价单位。本研究为IBDV新型变异株的流行规律监测和综合防控提供了数据支撑。 展开更多
关键词 非典型传染性法氏囊病 传染性法氏囊病病毒 新型变异株 法氏囊半数萎缩量
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中国部分地区鸡传染性贫血流行病学调查及病原分离鉴定 被引量:14
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作者 李岳 闫娜娜 +13 位作者 刘爱晶 兰兴鸽 杨搏 刘长军 高玉龙 高宏雷 祁小乐 崔红玉 高立 李凯 潘青 王永强 张艳萍 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期760-765,共6页
为了调查近年来鸡传染性贫血病(CIA)在我国发病鸡群中的流行特点、分布及其危害,本研究于2016年1月~2019年9月,从黑龙江、北京、山东等13个省市的381个疑似CIA发病鸡群中采集肝脏样品1677份,PCR检出鸡传染性贫血病毒(CAV)阳性样品共242... 为了调查近年来鸡传染性贫血病(CIA)在我国发病鸡群中的流行特点、分布及其危害,本研究于2016年1月~2019年9月,从黑龙江、北京、山东等13个省市的381个疑似CIA发病鸡群中采集肝脏样品1677份,PCR检出鸡传染性贫血病毒(CAV)阳性样品共242份,分布于85个鸡群,阳性样品检出率为14.43%(242/1677),阳性鸡群率为22.31%(85/381)。CAV与鸡马立克氏病病毒、鸡白血病病毒等免疫抑制病病毒混合感染在检测鸡群中普遍存在,占CAV感染总量的52.94%(45/85)。将来自山东临沂某CAV阳性鸡场的病鸡肝脏样品处理后接种MDCC-MSB 1细胞,连续传代6次,经PCR及间接免疫荧光鉴定,确定分离到一株CAV细胞适应病毒株,命名为CAV-SD19/4604。对分离株VP1基因测序并与GenBank中19株CAV参考株VP1基因序列比对,显示同源性为95.00%~98.80%,遗传进化树表明CAV-SD19/4604与多数亚洲病毒株位于同一分支。本研究为CAV感染的研究和疾病防控提供了数据支持。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病 鸡传染性贫血病毒 流行病学调查 分离鉴定 序列分析
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新型鸭呼肠孤病毒的分离鉴定及其σC基因遗传进化分析 被引量:10
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作者 罗丹 高立 +6 位作者 孟照洁 高玉龙 李凯 祁小乐 刘长军 崔红玉 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期445-450,共6页
新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)病,是一种以肝脾不规则坏死、出血斑/点和心肌、腔上囊出血为主要特征的新疫病。为研究某养鸭企业不同年份分离的NDRV病株的生物学特性,本研究将2019年从25份樱桃谷鸭脏器组织中分离的3株病毒以及2016年和2017年... 新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)病,是一种以肝脾不规则坏死、出血斑/点和心肌、腔上囊出血为主要特征的新疫病。为研究某养鸭企业不同年份分离的NDRV病株的生物学特性,本研究将2019年从25份樱桃谷鸭脏器组织中分离的3株病毒以及2016年和2017年分离的2株病毒同时进行了生物学特性比较研究。RT-PCR及基因测序结果表明,该5株分离病毒均为NDRV,且纯净性良好。体外复制研究表明,该5株分离病毒均能100%致死鸡胚,且在Vero细胞中增殖良好;除2017年的分离株外,其余4株分离病毒均能在CEF中产生明显的细胞病变。σC基因同源性及遗传进化分析显示,5株NDRV分离株与其它NDRV病毒株之间具有较高的同源性(90.0%~98.2%),而与番鸭呼肠孤病毒(MDRV)同源性较低(29.6%~46.1%),再次证明5株分离病毒均为NDRV,但2017年分离株NDRV-SD19/6202与其余4株病毒的遗传距离稍远。σC基因编码氨基酸序列分析结果显示,以CEF适应病毒为代表的NDRV-SD19/6201株与CEF非适应病毒NDRV-SD19/6202株之间存在13个氨基酸差异位点,但这些差异位点是否是引起两株病毒复制特性差异的关键氨基酸还需要进一步研究。综上,本研究结果表明来源于同一养殖企业不同年份分离的NDRV病毒株之间生物学特性存在一定差异,提示持续开展该病流行病学调查的必要性,同时为了解NDRV的遗传进化特征和基因变异情况提供参考。 展开更多
关键词 新型鸭呼肠孤病毒 分离鉴定 σC基因 遗传进化
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黏附与聚集、抗肿瘤及抗菌特性乳杆菌的筛选 被引量:7
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作者 宋雨心 王文骞 +13 位作者 张园 刘琳琳 王婷婷 祁小乐 高玉龙 王永强 高宏雷 李凯 刘长军 张艳萍 高立 王笑梅 崔红玉 何高明 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期986-991,共6页
为获得具有高黏附与聚集、抗肿瘤及抗菌特性的益生乳杆菌,本研究以10株经16s r DNA鉴定的乳杆菌为候选菌,以结肠癌HT-29细胞为体外模型研究其黏附能力和抗肿瘤特性及其黏附能力与自聚集能力的相关性。将乳杆菌与致病性大肠埃希氏菌、鸡... 为获得具有高黏附与聚集、抗肿瘤及抗菌特性的益生乳杆菌,本研究以10株经16s r DNA鉴定的乳杆菌为候选菌,以结肠癌HT-29细胞为体外模型研究其黏附能力和抗肿瘤特性及其黏附能力与自聚集能力的相关性。将乳杆菌与致病性大肠埃希氏菌、鸡白痢沙门氏菌及金黄色葡萄球菌分别共孵育,探究了乳杆菌的共聚集能力与抗菌能力。结果显示:有6株乳杆菌的自聚集能力在20%以上;4株乳杆菌粘附内化HT-29细胞的内化率超过5%,经荧光显微镜观察,菌株Lac.99对HT-29细胞具有最强的黏附特性;菌株Lac.117和Lac.56对HT-29细胞的生长具有较好的抑制作用;4株乳杆菌对指示致病菌具有较强的拮抗作用,其中Lac.117菌株作用最强。综上所述,候选菌株中Lac.56在黏附、抗菌和抗肿瘤方面均表现出良好的益生特性,本实验为进一步研究和开发具有潜在应用价值的益生菌制剂提供了依据。 展开更多
关键词 乳杆菌 黏附 抗肿瘤 抗菌活性
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进口白羽肉种鸡J亚群禽白血病病毒的全基因组序列分析 被引量:6
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作者 马美哥 于蒙蒙 +11 位作者 许传田 黄庆华 孟照洁 王素艳 邢立晓 常方方 刘长军 祁小乐 王永强 孙延鸣 王笑梅 高玉龙 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期750-754,共5页
为研究引起我国部分地区进口白羽肉种鸡发生禽白血病疫情的病毒来源及其变异趋势,本研究对从进口白羽肉种鸡分离的8株J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的全基因组序列进行测序分析。8株ALV-Jgp85氨基酸遗传演化分析显示,其与ALV-J肉鸡分离株(包... 为研究引起我国部分地区进口白羽肉种鸡发生禽白血病疫情的病毒来源及其变异趋势,本研究对从进口白羽肉种鸡分离的8株J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的全基因组序列进行测序分析。8株ALV-Jgp85氨基酸遗传演化分析显示,其与ALV-J肉鸡分离株(包括ALV-J原型病毒株HPRS-103、美国肉鸡ALV-J分离株、国内肉鸡分离株)及蛋鸡分离株氨基酸序列同源性均低于92.5%,而与国内2014年父母代白羽肉种鸡ALV-J分离株GD14J2同源性较高,为93.5%~95.1%,处于同一分支。8株ALV-J的3'非编码区(3'UTR)在rTM区缺失203bp,DR-1区缺失7bp,E元件位置缺失125bp,仅保留了22个碱基,这一缺失特征与GD14J2一致。8株ALV-J的3'LTRU3区序列与ALV-J肉鸡分离株及蛋鸡分离株的相应基因序列同源性均低于91.5%,而与GD14J2病毒株的同源性较高,为94.3%~96.3%。序列分析发现U3区存在连续11bp缺失和164位碱基突变(C/T),该突变形成2个新的转录调控元件AIBREP1、AIBREP2。综合gp85、3'UTR和U3区序列特征,推测引起本次进口白羽肉种鸡禽白血病的ALV-J与国内2014年父母代白羽肉种鸡ALV-J分离株GD14J2为同一来源。但本次分离到的ALV-J病毒株也有新的变异趋势,这些变异是否与ALV-J致病性相关,还需进一步研究。本研究为ALV-J有效防控和净化提供数据支持。 展开更多
关键词 进口肉种鸡 禽白血病 J亚群禽白血病病毒 全基因组序列分析
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进口白羽肉种鸡禽白血病疫情鉴定 被引量:6
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作者 马美哥 于蒙蒙 +13 位作者 许传田 黄庆华 孟照洁 王素艳 邢立晓 常芳芳 李猷 何希君 刘长军 祁小乐 王永强 孙延鸣 王笑梅 高玉龙 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期526-529,共4页
2018年以来,某进口品种肉种鸡发生疑似禽白血病病例,流行范围广,危害严重,为确定该次疫情的病原,本研究从辽宁、山东等地发病鸡场采集55份疑似禽白血病病料样品。病理组织切片观察显示,病料样品肝脏和脾脏均有髓细胞样肿瘤细胞增生。针... 2018年以来,某进口品种肉种鸡发生疑似禽白血病病例,流行范围广,危害严重,为确定该次疫情的病原,本研究从辽宁、山东等地发病鸡场采集55份疑似禽白血病病料样品。病理组织切片观察显示,病料样品肝脏和脾脏均有髓细胞样肿瘤细胞增生。针对禽白血病病毒(ALV)、鸡马立克氏病病毒(MDV)和网状内皮组织增生症病毒(REV)的特异性PCR检测结果显示,55份病料样品中ALV阳性样品12份(21.8%),MDV阳性样品1份(1.82%),REV均为阴性。将12份ALV阳性病料样品经处理后接种DF-1细胞进行病毒分离,ELISA检测结果显示有8份ALV群特异性抗原阳性。ALV多重PCR检测结果表明,8个分离株均为J亚群ALV(ALV-J),测序结果显示,8个分离株之间核苷酸序列同源性为99.5%~100%,与A、B、C、D、E亚群ALV的同源性仅为56.5%~58.8%,与ALV-J的同源性为90.7%~96.6%,进一步表明所有分离株均为ALV-J。上述结果表明,引起该次进口白羽父母代肉种鸡发生禽白血病的病原主要以ALV-J为主,该研究结果为疫情的溯源和有效防控奠定了基础。 展开更多
关键词 进口白羽肉种鸡 禽白血病 J亚群禽白血病病毒 病毒分离
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表达禽网状内皮组织增生病病毒gp90蛋白的重组马立克氏病病毒的构建及生物学特性分析 被引量:4
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作者 许曾焜 李凯 +7 位作者 刘永振 高立 刘长军 张艳萍 高玉龙 祁小乐 崔红玉 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期867-871,共5页
禽网状内皮组织增生病(RE)是禽类一种重要免疫抑制性疾病,目前尚无有效的商品化疫苗预防该病。为研制表达RE病毒(REV)gp90蛋白的重组鸡马立克氏病病毒(MDV),本研究构建了含有REV保护性抗原基因gp90的pCAGGS-gp90表达质粒,将gp90表达框... 禽网状内皮组织增生病(RE)是禽类一种重要免疫抑制性疾病,目前尚无有效的商品化疫苗预防该病。为研制表达RE病毒(REV)gp90蛋白的重组鸡马立克氏病病毒(MDV),本研究构建了含有REV保护性抗原基因gp90的pCAGGS-gp90表达质粒,将gp90表达框架克隆入pENTR1载体,获得重组质粒pENTR1-gp90。通过pENTR1-gp90与p814-5US2KanccdB重组粘粒的LR反应,将gp90表达框架插入p814-5粘粒中MDV 814疫苗株基因组US2基因内,构建重组粘粒p814-5-gp90。将该重组粘粒转染鸡胚成纤维细胞(CEF),获得重组MDV r814-gp90株。将该重组病毒在CEF中连续传至20代后对第5、10、15、20代病毒经PCR扩增并测序鉴定;利用间接免疫荧光试验(IFA)和western blot检测重组MDV感染细胞中gp90蛋白的表达;绘制重组MDV的生长曲线,分析其体外复制特性。结果显示,正确构建了含有gp90表达框架的重组粘粒p814-5-gp90。将该重组粘粒转染CEF后能够引起典型的蚀斑病变,且蚀斑形态大小与亲本病毒814株无明显差异。PCR及测序鉴定结果显示,重组病毒r814-gp90基因组中正确插入gp90基因表达框架,且其能够在该重组病毒中稳定存在。IFA及western blot检测结果表明,r814-gp90株能够在感染的CEF中表达gp90蛋白。体外生长曲线显示,r814-gp90株在CEF中的复制能力与亲本病毒无明显差异。以上结果表明,本研究正确构建了表达REV保护性抗原gp90基因的重组MDV,为研制RE重组MDV活载体疫苗奠定了基础,对RE以及REV与MDV混合感染的防控具有重要意义。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生病 gp90蛋白 马立克氏病病毒 重组病毒
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抗炎免疫调节活性益生菌的体外筛选及其相关组分的初步鉴定 被引量:2
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作者 米洁兰 王志浩 +9 位作者 王婷婷 刘长军 祁小乐 张艳萍 李凯 高立 潘青 王笑梅 高玉龙 崔红玉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1283-1289,共7页
为筛选出具有抗炎、抗感染免疫调节活性的益生菌并探究益生菌免疫调节活性的主要成分,本研究分别以10株益生菌Lac.1~Lac.10作为候选菌株,将益生菌的活菌体、灭活菌体、菌体裂解物分别作用于由脂多糖+尼日利亚菌素(LPS+Nigericin)诱导的... 为筛选出具有抗炎、抗感染免疫调节活性的益生菌并探究益生菌免疫调节活性的主要成分,本研究分别以10株益生菌Lac.1~Lac.10作为候选菌株,将益生菌的活菌体、灭活菌体、菌体裂解物分别作用于由脂多糖+尼日利亚菌素(LPS+Nigericin)诱导的急性炎症巨噬细胞模型及NF-κB和IRF信号通路报告细胞系J774-DualTM巨噬细胞,经荧光定量PCR检测细胞因子Il-1β和Il-10 mRNA的转录水平,通过检测报告基因SEAP和Lucia荧光素酶的活性分析NF-κB和干扰素调节因子(IRF)信号通路的激活情况。结果显示,在排除发酵液中MRS培养基干扰的情况下,益生菌株Lac.5活菌体能够极显著下调巨噬细胞炎症模型下Il-1β mRNA的转录水平(P<0.0001)、极显著上调Il-10 m RNA的转录水平(P<0.0001),并且能够极显著激活巨噬细胞的NF-κB和IRF信号通路(P<0.0001),进一步将益生菌Lac.5活菌体热灭活和超声破碎后显示,益生菌Lac.5灭活菌体和菌体裂解物的免疫调节活性均显著降低,仅益生菌Lac.5活菌体组分起到抗炎、抗感染的免疫调节活性。综上所述,本研究筛选出一株具有抗炎、抗感染的免疫调节活性的益生菌株Lac.5,并确认了其活菌体为免疫调节组分,对功能益生菌的筛选和新型益生菌治疗制剂的开发具有重要意义。 展开更多
关键词 益生菌 抗炎 免疫调节 NF-ΚB信号通路 IRF信号通路
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禽网状内皮组织增生病病毒env蛋白在毕赤酵母中的表达及其免疫原性研究 被引量:2
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作者 杨彦超 王静 +6 位作者 李凯 祁小乐 崔红玉 高玉龙 刘长军 高宏雷 王笑梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1147-1151,共5页
为评价禽网状内皮组织增生病病毒(REV) env蛋白的免疫原性,本研究将env基因克隆至毕赤酵母表达载体pAO815,构建了含有两个env表达盒(已突变env基因中BglⅡ和Bam HⅠ酶切位点)的重组表达质粒pAO815-2env,并电转至毕赤酵母宿主菌GS115,构... 为评价禽网状内皮组织增生病病毒(REV) env蛋白的免疫原性,本研究将env基因克隆至毕赤酵母表达载体pAO815,构建了含有两个env表达盒(已突变env基因中BglⅡ和Bam HⅠ酶切位点)的重组表达质粒pAO815-2env,并电转至毕赤酵母宿主菌GS115,构建重组酵母菌株pAO815-2env/GS115,经发酵培养得到的env蛋白(蛋白含量达到4.8 g/L)经亲和层析纯化后免疫SPF鸡,利用ELISA试剂盒和中和试验检测血清中的REV抗体。结果显示,重组酵母菌株表达的env蛋白,不仅能够诱导SPF鸡产生抗REV抗体,还能诱导其产生中和抗体,且产生的中和抗体效价较高,具有良好的免疫原性。本研究为开展禽网状内皮组织增生病亚单位疫苗的研制提供了实验依据。 展开更多
关键词 禽网状内皮组织增生病病毒 ENV基因 毕赤酵母 发酵
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B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗对商品蛋鸡的免疫效果研究 被引量:2
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作者 包媛玲 宋守生 +12 位作者 于蒙蒙 刘鹏 任殿新 孟令宅 王素艳 李欣翼 张卓 刘爱晶 张艳萍 刘长军 祁小乐 王笑梅 高玉龙 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期521-525,共5页
为研究B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗对商品蛋鸡的免疫保护效果,本研究选取21日龄的商品蛋鸡,将本团队前期研制的B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗通过肌肉注射方式免疫蛋鸡(0.5 mL/只),并于首免后3周以相同剂量加强免疫1次。免疫后1周~6周每周采... 为研究B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗对商品蛋鸡的免疫保护效果,本研究选取21日龄的商品蛋鸡,将本团队前期研制的B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗通过肌肉注射方式免疫蛋鸡(0.5 mL/只),并于首免后3周以相同剂量加强免疫1次。免疫后1周~6周每周采血,分离血清,采用ELISA检测及中和试验分别检测相应抗体,结果显示,初次免疫后6周,免疫组血清平均ELISA抗体效价达到1:73 522,平均中和抗体效价达到7.6log2。加强免疫后3周通过滴鼻的方式攻毒(aMPV/B LN16强毒滴鼻200μL,5 000 TCID50/只),观察攻毒后1 d~8 d蛋鸡的临床症状。结果显示,攻毒对照组蛋鸡发病率为92.3%,免疫组蛋鸡不发病;攻毒后1 d~8 d采集各组蛋鸡的鼻腔拭子,通过RT-qPCR方法检测病毒拷贝数,结果显示,免疫组蛋鸡鼻腔拭子中的病毒拷贝数较攻毒对照组下降约73.7%~95.0%;攻毒后9 d,采集各组蛋鸡的鼻甲、气管、肺脏制备病理切片后进行病理组织学观察,结果显示,攻毒对照组蛋鸡鼻甲、气管、肺脏出现不同程度的病理损伤,免疫组蛋鸡各组织器官未见明显病理变化。本研究结果首次表明,B亚型禽偏肺病毒病灭活疫苗对商品蛋鸡具有良好的免疫保护效果。本研究为商品蛋鸡的B亚型禽偏肺病毒病的防控和免疫程序的制定提供了参考。 展开更多
关键词 B亚型禽偏肺病毒 灭活疫苗 商品蛋鸡 免疫保护
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