猪源伪狂犬病病毒变异株AH02LA株细菌人工染色体的构建与鉴定

为构建猪源伪狂犬病病毒(PRV)变异株AH02LA的细菌人工染色体(BAC),本研究将转移载体pHA2-pUC19-H1-H2的DNA与PRV AH02LA株基因组DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF)进行同源重组,利用转移载体中的GFP为筛选标记,获得携带GFP基因的gE/gI基因缺失突变株PRV-AH02LA(gE-/gI-)-pHA2。提取纯化的该重组病毒DNA转化E.coli DH10B,对获得的阳性克隆命名为BAC^(PRV-G)。提取BAC^(PRV-G)的DNA,将含gE、gI和其上下游同源片段的DNA与BAC^(PRV-G)的DNA共转染CEF,获得gE、gZ基因恢复的病毒命名为PRVAH02LA^(Rec)。比较亲本株PRV AH02LA、基因缺失株和恢复株的生长动力学,结果表明,恢复株的生长特性与亲本株无显著差异。本研究成功构建了PRV变异株AH02LA的BAC,并证实其为全基因组的感染性克隆,为PRV变异株的致病机理研究和新型疫苗研制提供了重要的平台。

γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch通路并纠正脑卒中后抑郁大鼠Th17/Treg失衡

目的:探究γ-分泌酶抑制剂DAPT对Notch信号通路和脑卒中后抑郁(PSD)大鼠辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)失衡的影响。方法:SD大鼠采用线栓法结合慢性不可预知性温和应激(CUMS)刺激及孤养建立PSD模型,随机分为PSD组(等量生理盐水)和DAPT组(5 mg/kg DAPT),假手术(sham)组(等量生理盐水)为对照,每组10只。各组大鼠分别于术前(0 d)及术后7、14、21和28 d进行体重检测、敞箱实验(OFT)及蔗糖偏爱实验(SPT)。干预结束后,采用RT-qPCR和Western blot分别检测脑组织海马Notch1和Hes1 mRNA及蛋白表达水平,流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中Th17和Treg细胞比例,ELISA法检测血清白细胞介素17(IL-17)和IL-10水平。结果:术后7、14、21和28 d,与sham组比较,PSD组大鼠体重、水平运动评分、垂直运动评分和糖水消耗比例均显著降低(P<0.05),其中7和14 d PSD组与DAPT组大鼠体重、水平运动评分、垂直运动评分和糖水消耗比例差异无统计学意义(P>0.05);与PSD组比较,21和28 d DAPT组大鼠体重、水平运动评分、垂直运动评分和糖水消耗比例显著增加(P<0.05)。干预结束后,与sham组比较,PSD组大鼠海马Notch1和Hes1 mRNA及蛋白表达水平,PBMC中Th17细胞比例和Th17/Treg比值,以及血清IL-17水平显著升高(P<0.05),Treg细胞比例和血清IL-10水平显著降低(P<0.05);与PSD组比较,DAPT组大鼠海马Notch1和Hes1 mRNA及蛋白表达水平,PBMC中Th17细胞比例和Th17/Treg比值,以及血清IL-17水平显著降低(P<0.05),Treg细胞比例和血清IL-10水平显著升高(P<0.05)。结论:DAPT可阻断Notch信号通路并减轻PSD大鼠抑郁样症状,其机制可能与调节Th17/Treg失衡及炎症因子分泌有关。

重组伪狂犬病病毒的研究进展

伪狂犬病病毒(PRV)属于疱疹病毒,含有多个复制非必需区,可以通过基因缺失研制弱毒疫苗,也可以通过异源基因的插入或替换构建活载体疫苗。目前构建重组PRV的技术方法包括传统同源重组技术、细菌人工染色体技术(BAC)、CRISPR/Cas9介导的基因编辑技术。2011以来,一种毒力更强的变异株在我国暴发流行,应用变异株构建的基因缺失活疫苗(gE/gI、gE/TK或者TK/gE/gI)能对变异株提供完全的保护,为PRV在我国的净化和PRV变异株活载体疫苗的构建奠定了基础。研究发现以PRV基因缺失株为载体,与其他病原的抗原编码基因共同构建重组病毒,能快速地诱导细胞免疫和体液免疫,达到一针多防的效果,应用前景广阔。适合的插入位点选择、外源基因高效表达和克服PRV母源抗体干扰等是提高活载体效果的关键。

猪源伪狂犬病病毒传代致弱LA2017株的安全性和免疫效力研究

为检测猪源伪狂犬病病毒变异株AH02LA株作为疫苗后选株的安全性及免疫效力。本研究对4日龄初生仔猪和产前1个月妊娠母猪免疫LA2017株后的安全性、28~35日龄仔猪免疫效力以及免疫猪后排毒和同群传播性进行了研究。结果显示:滴鼻接种4日龄仔猪和肌肉注射产前1个月的妊娠母猪,均无任何临床症状,表明该疫苗株具有良好的安全性;肌肉注射接种28~35日龄的仔猪,免疫后7 d产生对PRV变异株AH02LA的完全保护并且可以阻止排毒,免疫14 d后攻毒均未发病和排毒,而PRV Bartha K61株免疫猪后7 d攻毒,有4头猪出现了体温升高,鼻拭子样品均检出病毒,免疫后14 d和21 d时对试验猪攻毒,PRV Bartha K61株免疫组均有猪发病,且鼻拭子样品均检出病毒;在抗体产生水平方面,PRV LA2017株免疫后14 d产生高水平中和抗体,PRV中和指数抗体≥10 000,且维持至免疫后5个月,而Batha-K61组免疫后1个月至3个月针对PRV变异株AH02LA的中和指数仅为178~1000,且4个月就开始下降;在同群感染方面,PRV LA2017株肌肉注射接种28~35日龄仔猪后14 d内均未从鼻拭子和肛门拭子检出排毒,gB抗体全部转为阳性,同群非免疫接种猪PRV gB和gE的ELISA抗体均为阴性,表明PRV LA2017株安全性好,无横向传播,不引起同群感染。结果表明,PRV LA2017株作为疫苗株对猪伪狂犬变异株的保护效果显著优于Bartha K61株,该毒株安全性好、抗体水平高和持续时间长,是一株极具开发价值的猪伪狂犬病流行株的弱毒疫苗候选株。

基于内质网应激的丹参酮ⅡA磺酸钠调节主动脉瓣膜间质细胞钙化机制研究

目的:研究丹参酮IIA磺酸钠对低密度脂蛋白(ox LDL)诱导的猪主动脉瓣膜间质细胞(porcine valvular interstitial cells,VICs)钙化模型内质网应激(ERS)因子作用的影响。方法:分离VICs免疫荧光法鉴定细胞,应用ox LDL建立细胞模型,MTT法筛选最佳丹参酮IIA磺酸钠干预浓度,茜素红染色测量钙化结节,免疫印记法及实时荧光定量PCR法检测ERS通路中BIP、Chop、Runx2及Osteocalcin蛋白及基因表达,ELISA法检测细胞培养上清液中炎症因子表达,应用MCP-1中和抗体观察MCP-1在成骨化中的作用。结果:在成功建立ox LDL诱导的VIC细胞模型基础上,茜素红染色显示丹参酮IIA磺酸钠组钙结节形成较ox LDL模型组差异有统计学意义;丹参酮IIA磺酸钠可抑制BIP、Chop细胞内基因的表达,抑制Runx2及Osteocalcin蛋白表达,同时可抑制IL-6、IL-8及MCP-1炎症因子的表达,其表达与模型组比较差异有统计学意义,但MCP-1中和抗体对成骨化因素影响较小。结论:丹参酮IIA磺酸钠可抑制ox LDL诱导的VIC炎症反应及成骨化,其具体机制可能与抑制ERS通路有关。

猪伪狂犬病病毒基因缺失灭活疫苗（LA-A株）的最小免疫剂量和制品保存期的研究

本研究将伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)变异株(PRV AH02LA株)的gE基因缺失株(LA-A株)接种BHK-21细胞,经纯悬浮培养制备抗原,甲醛灭活后制备油乳剂灭活疫苗,并确定该灭活疫苗的最小免疫剂量和效力检验方法,以及在2~8℃保存期。结果显示:猪伪狂犬病病毒基因缺失灭活疫苗(LA-A株)的效力检验方法为以2.0 mL(抗原含量108.20TCID50)接种4~5周龄PRV阴性健康仔猪,颈部肌肉注射,间隔28 d以相同剂量和方法加强免疫,加强免疫后第21 d,免疫猪血清PRV抗体中和指数应不低于10000,攻毒保护率应不低于80%;最小免疫剂量为1.0 mL(抗原含量107.90 TCID50);制品保存期:在2~8℃保存期为18个月。该研究结果为新型疫苗的研制提供了重要的试验依据。

健康中国战略下健康体育文化培育路径研究

健康体育文化由价值与观念、规范、技术与教育和物质设施四个层次构成健康体育文化以培育和践行社会主义核心价值观为主线,实现传统文化、器物文化、制度文化与价值观层面的有机融合贯通。为满足健康中国战略对健康体育文化的需求,需注重从体育管理部门、社会智库机构、学校教育机构、民间组织以及公民个体等五个角度审视并构建健康体育文化的培养路径。

非紧致阻抗圆柱气动噪声数值预测与控制方法

为预测非定常流动与非紧致阻抗固体边界相互作用产生的气动噪声,开发一种基于精确格林函数和声模拟理论的气动噪声数值预测方法。非紧致阻抗边界对声波的散射作用计入精确格林函数,远场噪声采用FW-H方程计算。对具有任意几何外形的非紧致阻抗边界,采用边界元方法计算满足声学硬边界或声学阻抗边界条件的精确格林函数。同时,推导了具有阻抗边界条件的二维非紧致圆柱精确格林函数的解析解用以验证数值计算方法。数值计算结果表明数值解与解析解的结果一致,数值解要取得好的网格收敛效果需要在一个波长内布置至少20个网格点。圆柱绕流气动噪声预测结果表明,非紧致边界的阻抗特性对声传播有显著影响,采用合适的阻抗布置方式可以取得有效的噪声控制效果。

热处理对泡桐木防腐性能的影响

以泡桐木为研究对象,对其进行炭化、真空热处理和蒸汽热处理,分析经这3种改性处理后泡桐木防腐性能的变化。结果表明:与素材相比,经过改性处理的泡桐木耐白腐和褐腐性能均提高,耐褐腐能力提升比例高于耐白腐。随处理温度升高,保温时间增加,木材耐腐性能提高。处理温度和保温时间与失重率呈显著负相关,加热方法与失重率无显著相关性。

高职物流专业学生基于物联网技术的创新应用能力提升实践与探索——以天津城市职业学院物流管理专业为例

通过调研物联网技术应用给物流企业带来的变化、物流岗位的需求变化以及企业人才需求变化,分析我院物流管理专业在人才培养创新应用能力培养的薄弱环节,依托基于物联网技术的创新应用中心建设,与区域典型物流企业合作,探索和实践新形势下产教融合、校企联手精准对接,加快以发展型、创新型、复合型技术技能人才培养,形成有推广价值的成果.

案例教学在《电力系统不确定性理论与测度》课程中的应用研究

《电力系统不确定性理论与测度》是电力专业里一门交叉型课程,根据电力系统课程的独特性,结合现有教学环境,按照课程教学目的,文章根据课程教学中出现的缺点与不足,从教学内容、教学理念和教学方式等方面进行了改革。通过引入案例教学,激发学生对电力系统不确定性理论深入了解的热情,使学生更加充分理解课程内容,同时培养学生的分析解决问题能力、工程实践能力,整体上提高学生的综合素质。

唐竹秆枝纤维形态特征的研究

以唐竹为对象,采用显微图像分析方法,对唐竹4个不同部位的纤维形态特征进行了研究。结果表明,1.5m处秆的纤维长、直径和腔径依次是910.939、12.872μm和2.233μm;梢部的秆的纤维长、直径和腔径依次是915.870、12.182μm和2.148μm;梢部的枝的纤维长、直径和腔径依次是993.414、11.561μm和1.969μm。差异分析表明,除纤维长度在最下活枝与1.5m处秆,以及纤维长度、宽度在最下活枝与梢部枝间显著外,其余两者间差异均不显著。除最下活枝外,唐竹其余部位纤维都适合做造纸原料。

上海市普陀区2015—2017年病媒生物监测分析

目的通过对2015-2017年上海市普陀区病媒生物的调查,全面掌握本区蚊、蝇、鼠、蟑螂的种类、数量、分布及季节变化情况,为预测、预报和控制病媒生物性传染病提供科学依据。方法蚊密度监测采用CO2诱蚊灯法,蝇密度监测采用笼诱法,蟑螂密度监测采用粘捕法,鼠密度监测采用夹夜法。结果普陀区主要蚊种为淡色库蚊,白纹伊蚊占比逐年增加,全区平均蚊密度为8.64只/台,逐年降低,其中公园平均蚊密度最高达到10.85只/台,成蚊季节消长表现为双峰型,高峰出现在7月和9月;全区平均蝇密度为0.64只/笼,在大型绿化和农贸集市蝇密度较高(平均密度分别为0.96和0.92只/笼),季节消长表现为单峰型,最高峰出现在7月;全区平均鼠密度为0.37只/百夹,鼠种主要是黄胸鼠,其中餐饮行业单位鼠密度最高,达到1.10只/百夹,有2个高峰分别是4月和10月;普陀区蟑螂以德国小蠊为主,全区平均密度为0.16只/张,平均侵害率为7.41%,平均密度逐年降低,在农贸市场中蟑螂密度最高,达到0.43只/张,季节消长表现为单峰型,最高峰出现在8月。结论 2015-2017年上海市普陀区主要病媒生物危害均处于较低水平,对病媒生物的控制有效,但仍需加强病媒生物高峰季节的控制,同时白纹伊蚊占比逐年增加,与此相关的登革热等蚊媒传染病危险性增加。今后应持续提升监测系统敏感性,重点关注媒介伊蚊的监测方法,提高监测与预警预报的水平,为本区病媒生物防治提供科学依据。

“单部脉数”探微

单部脉数的论述首见于《脉经》,此后众多医籍亦有论述。在寸口脉诊中,寸、关、尺三部脉率应为一致,为何会出现“单部脉数”的脉象?对此鲜有医家进行探讨。故本文从“脉势”与“病机”两个角度进行探微。从“脉势”理解,认为“至数”与“脉势”均是构成数脉脉象的基本要素,而“脉势”是判断单部脉数的决定因素;从“病机”理解,认为单部脉数之脉象揭示了疾病的病位病机,是为了更好地辨证论治。然而在临床中察觉到单部脉数时,应脉、症相结合判断病位病机,做到“当随其部而察其证”。

曼氏裂头蚴糖原磷酸化酶的生物学特性分析及功能域克隆、表达

目的通过生物信息学软件分析曼氏裂头蚴(Sparganum mansoni,Sm)糖原磷酸化酶(glycogen phosphorylase,GP)的生物学特性,并对SmGP功能域(fSmGP)进行基因克隆及蛋白原核表达。方法利用生物信息学相关软件,分析Sm GP基因的生物信息学特征。通过PCR扩增得到功能域序列片段,克隆至原核表达载体pET-28α,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达fSmGP,并对表达蛋白进行western blot鉴定。结果Sm GP蛋白由519个氨基酸残基组成,相对分子质量为59.80 kDa,等电点为6.95,由C、H、N、O、S 5种原子组成。SmGP的序列与其他物种的氨基酸序列一致性在70%以上。其氨基酸序列中具有32个磷酸化位点、10个潜在的B细胞表位和15个潜在的T细胞表位。在二级结构中,以α螺旋为主,三维空间结构分析显示以二聚体形式存在,且分子中的功能位点空间分布集中。PCR、双酶切鉴定、测序结果均表明pET-28α-fSmGP的功能区重组质粒构建成功;western blot结果显示成功诱导fSmGP蛋白表达。结论SmGP属于Glycosyltransferase-GTB-type超基因家族,是一个高度保守的蛋白分子,但在蛋白分子的C端是功能区域较为集中和表位集中的区域,表达该功能域为后续对fSmGP免疫学分析等实验提供了指导,同时也为研究曼氏裂头蚴的糖代谢规律奠定了一定基础。

骨科外洗方对桡骨远端骨折术后康复的临床疗效观察

【目的】观察骨科外洗方对桡骨远端骨折内固定术后腕关节功能康复情况的临床疗效。【方法】将52例桡骨远端骨折术后患者(均已行切开复位内固定术)随机分为治疗组和对照组,每组各26例。对照组给予骨折术后常规治疗及护理,治疗组在骨折术后常规治疗及护理的基础上给予骨科外洗方外洗治疗,5 d为1个疗程,共治疗2个疗程。观察2组患者治疗前后患侧腕关节周径的变化情况,评价2组患者术后腕关节功能恢复情况,并比较2组患者的住院时间与满意度。【结果】(1)研究过程中,有4例患者脱落,最终有48例患者完成全部疗程的治疗,其中治疗组和对照组各24例。(2)治疗后,2组患者的患侧腕关节周径数值均较治疗前明显减少(P<0.01),且治疗组患侧腕关节周径数值的减少幅度大于对照组,组间治疗后及差值比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。(3)术后1个月,治疗组的恢复率为91.7%(22/24),对照组为62.5%(15/24),组间比较,治疗组的腕关节功能恢复率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)治疗组患者的住院时间为(7.48±1.60)d,明显少于对照组的(11.67±1.42)d,差异有统计学意义(P<0.05)。(5)术后1个月追踪调查,观察组的满意度为97.23%,明显高于对照组的90.14%,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】骨科外洗方可有效促进桡骨远端骨折内固定术后患者患肢的功能恢复,有助于提高临床疗效、缩短住院时间。

猪源伪狂犬病病毒变异株传代致弱株LA2017株的获得与鉴定

将猪源伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)的强毒变异株AH02LA株在鸡胚成纤维细胞上进行连续传代,获得了不同代次的弱毒株,检测其安全性、免疫效力、生长特性及稳定性,并对其gE基因上、下游片段进行测序。对PRV AH02LA株的F151代进行3轮挑斑纯化,获得了1个毒株并将其命名为PRV LA2017株。用该毒株接种(剂量为106.00TCID50/头)试验猪,在接种后14 d内无任何临床症状;在免疫(106.00 TCID50/头)后21 d攻毒(106.50TCID50/头),所有试验猪未出现任何猪伪狂犬病症状,体温正常,没有排毒。在攻毒前用ELISA检测,PRV gB抗体全部为阳性,PRV gE抗体全部为阴性;在攻毒后14 d这两种抗体均为阳性,体现出良好的安全性与保护性。对照组BarthaK61在攻毒后试验猪全部发病,体温高至40.5℃以上,且均检出排毒。测序结果显示LA2017株的gI部分基因与gE全部基因缺失。该毒株在CEF细胞及ST细胞上生长良好,在CEF上的滴度达到108.0TCID50/mL,在ST细胞上的滴度最高达109.5TCID50/mL,能满足活疫苗生产的要求。LA2017株安全性好,免疫效力强,生长滴度高,可以作为研制针对PRV变异株疫苗的候选毒株。

超声-表面活性剂提取青钱柳总黄酮的工艺优化

目的优化表面活性剂结合超声提取青钱柳中的总黄酮的工艺。方法以总黄酮含量为指标,在单因素实验的基础上运用Box-Behnken响应面法(response surface methodology,RSM)设计四因素三水平实验获得最佳提取条件。结果青钱柳总黄酮的最佳提取工艺为:吐温80浓度5%、液料比41:1(V:m)、超声时间26 min和超声温度60℃。此条件下,实际测得总黄酮含量为(76.27±0.27)mg/g,与预测值77.32 mg/g非常接近,是比较理想的模型。结论超声与表面活性剂的结合可以较好地提取青钱柳中的总黄酮。

基于选择实验法的大豆种质农户选择偏好研究

农业部于2016年提出"调减玉米,增加大豆"的农业供给侧结构改革,在国产大豆产量和效益低,农民种植意愿不强的背景下,本研究立足于农户种植意愿,利用山东省381户农民对不同大豆种质属性选择的数据,运用选择实验法与多元Logit模型研究农户对大豆种质属性选择偏好并测算各属性经济价值。以低产、早熟、倒伏和低抗病虫的大豆为参照组,研究结果显示:(1)农户对大豆种质属性的选择偏好:抗倒伏>倒伏,高产>中产≥低产,中熟>早熟>晚熟,中抗病虫>高抗病虫>低抗病虫;(2)虽然农户种植大豆的用途有所差异,但是对大豆种质属性选择偏好基本一致;(3)大豆各品种市价低于其种质各属性加总价值,种质经济价值被市场低估。以上结果为提高农户种植大豆的积极性,制定合理的大豆种子市场价格体系,引导大豆育种产业的研究和发展,有效推进大豆产业供给侧改革提供了一定的科学依据。

多维视角下情境制约惯用语的规约性与创造性

情境制约惯用语(situation-boundutterance,以下简称SBUs)是指那些受制于具体的交际语境,并具有高度文化规约性和程式性的语用行为。SBUs的意义结构和意义生成不是约定俗成的,而是和目的语的文化概念系统密切相关,反映了人类的一般认知规律,具有语用规约性、情境制约性、可预测性和文化制约性等特征,同时SBUs的使用也体现了语言创造性特征。社会文化和个体认知会影响二语学习者使用SBUs,应从加大接触目标语国家的文化和多使用SBUs两方面加以改善。