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侧流免疫层析技术在兽医诊断中的应用
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作者 李娜 杜汉宇 +6 位作者 王真真 贾楠楠 宋若楠 朱杰 李传峰 刘光清 孟春春 《动物医学进展》 北大核心 2023年第4期104-108,共5页
侧流免疫层析使用有色标记物、荧光标记物或其他标记物等作为标记物,用于偶联抗原(抗体),用以检测抗体(抗原)的一种免疫化学反应。传统的侧流免疫层析依赖于肉眼观察,灵敏度较低,只能提供定性或半定量结果。新一代侧流免疫层析技术采用... 侧流免疫层析使用有色标记物、荧光标记物或其他标记物等作为标记物,用于偶联抗原(抗体),用以检测抗体(抗原)的一种免疫化学反应。传统的侧流免疫层析依赖于肉眼观察,灵敏度较低,只能提供定性或半定量结果。新一代侧流免疫层析技术采用不同类型标记物和应用外部设备,对待检物进行量化,来呈现待检物的含量,从而实现开发具有定量、多组分检测能力的免疫层析测试。论文总结了侧流免疫层析标记物、检测原理以及在兽医诊断中的应用,以期为今后侧流免疫层析技术在兽医临床诊断中的应用和改进提供理论参考。 展开更多
关键词 侧流免疫层析 荧光定量检测 兽医诊断
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新型小麦种衣剂JML对迟播冬小麦苗期生长和碳、氮代谢相关基因表达的影响 被引量:1
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作者 张小祥 肖宁 +18 位作者 张新钵 沈卫华 季红娟 李育红 潘存红 吉春明 吴政 吴云雨 蔡跃 刘建菊 余玲 陈梓春 时薇 张秀琴 刘广青 周长海 姚友礼 黄年生 李爱宏 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第3期625-634,共10页
为明确新型小麦种衣剂(JML)对迟播冬小麦幼苗生长及碳、氮代谢相关基因表达的影响,以扬麦23、扬麦24为试验材料,分析JML包衣处理后迟播冬小麦在种子活力、根系特征、干物质积累及碳、氮代谢相关基因表达等方面的变化特征。结果表明,JML... 为明确新型小麦种衣剂(JML)对迟播冬小麦幼苗生长及碳、氮代谢相关基因表达的影响,以扬麦23、扬麦24为试验材料,分析JML包衣处理后迟播冬小麦在种子活力、根系特征、干物质积累及碳、氮代谢相关基因表达等方面的变化特征。结果表明,JML处理后,扬麦23、扬麦24的发芽势和发芽率显著提高。茎叶与根器官中干物质积累增加,显著提高了植株氮积累量。根长、根表面积、根体积及根直径增加,与对照相比差异显著。JML处理提高了氮代谢中氮素吸收利用关键基因TaNRT1.1、TaNR、TaNIR、TaGS1、TaGS2等在幼苗植株中的表达水平,差异显著,但显著抑制了铵态氮转运蛋白基因TaAMT1.2的表达水平,促进了碳代谢中与光合作用密切相关的TaClpP、TaRBC、TaPSB基因的表达。因此,JML处理可以显著改善迟播冬小麦的种子活力,提高根系综合素质,增加苗期硝态氮的吸收转运、同化水平和叶片的碳同化能力,最终增加苗期植株干物质积累。 展开更多
关键词 冬小麦 幼苗 种子包衣剂 氮、碳代谢 基因表达
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妊娠期附件区包块所致急腹症的超声成像评估 被引量:7
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作者 崔晓菁 李云波 +3 位作者 刘光清 关莹 吴晓妹 童玉燕 《南昌大学学报(医学版)》 CAS 2019年第5期56-58,103,I0001,共5页
目的探讨妊娠期附件区包块所致急腹症的超声声像图表现及其诊断价值。方法以术中所见和病理诊断为金标准,对海南医学院第一附属医院2002年11月至2019年6月收治的26例妊娠期附件区包块所致急腹症患者的超声声像表现、手术治疗及妊娠结局... 目的探讨妊娠期附件区包块所致急腹症的超声声像图表现及其诊断价值。方法以术中所见和病理诊断为金标准,对海南医学院第一附属医院2002年11月至2019年6月收治的26例妊娠期附件区包块所致急腹症患者的超声声像表现、手术治疗及妊娠结局进行回顾性分析。结果26例患者附件区包块超声定位诊断准确率为96.1%(25/26),超声诊断结果与术中所见及病理诊断结果比较准确率为57.7%(15/26);26例患者术中所见附件区包块扭转18例,超声诊断9例,准确率为50.0%。26例患者手术治疗后流产1例(3.8%)、未产23例(88.5%),顺产后手术治疗1例(3.8%),剖宫产并附件区包块切除术1例(3.8%)。结论超声检查能及时发现妊娠期附件区包块所致急腹症的病变并进行定位诊断,但对病灶病理性质诊断价值有限。 展开更多
关键词 妊娠期 附件区包块 急腹症 超声成像
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1株番鸭源奇异变形杆菌的分离鉴定及其毒力基因分析 被引量:10
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作者 俞赵荣 杨侃侃 +9 位作者 王元红 张谦 苏莉 鲁智敏 张学琪 刘自敏 李传峰 刘光清 王勇 李永东 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2020年第3期14-20,共7页
为查清引起滁州地区某养殖场雏番鸭死亡原因,本研究通过对分离细菌的鉴定和动物致病性试验,确定奇异变形杆菌是引起此次雏番鸭发病的病原体,并将分离的奇异变形杆菌命名为AHcz-1株.根据其16S rRNA基因序列,建立其遗传进化树;根据已报道... 为查清引起滁州地区某养殖场雏番鸭死亡原因,本研究通过对分离细菌的鉴定和动物致病性试验,确定奇异变形杆菌是引起此次雏番鸭发病的病原体,并将分离的奇异变形杆菌命名为AHcz-1株.根据其16S rRNA基因序列,建立其遗传进化树;根据已报道的8个毒力基因ureC、zapA、mrpA、ucaA、rsbA、pmfA、atfA、atfC序列,设计引物进行PCR扩增,并对毒力基因进行序列分析.结果显示:AHcz-1株与日本株(AB932526.1)亲缘关系最近,同源性高达100%;毒力基因pmfA、atfA、ureC均未发生变异;AHcz-1株具有较强的致病性;致病菌对丁胺卡那高度敏感,对庆大霉素、恩诺沙星中度敏感,对其它17种抗生素不敏感,表明AHcz-1株具有多重耐药性.本研究为番鸭源奇异变形杆菌临床诊断、临床用药及遗传变异研究奠定了基础. 展开更多
关键词 番鸭 奇异变形杆菌 分离鉴定 毒力基因
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NDRVσC蛋白互作的宿主因子筛选及生物信息学分析 被引量:4
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作者 肖容 杜夏夏 +5 位作者 李传峰 马文戈 米晓云 刘光清 周海龙 陈宗艳 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第4期1-9,共9页
研究鸭呼肠孤病毒(Duck reovirus,DRV)σC蛋白与宿主因子之间的相互作用,对揭示σC蛋白在病毒复制过程中的功能及该病毒的致病机理具有重要作用。本研究采用免疫共沉淀法及质谱分析技术,筛选出与σC蛋白可能发生互作的宿主相关蛋白,并... 研究鸭呼肠孤病毒(Duck reovirus,DRV)σC蛋白与宿主因子之间的相互作用,对揭示σC蛋白在病毒复制过程中的功能及该病毒的致病机理具有重要作用。本研究采用免疫共沉淀法及质谱分析技术,筛选出与σC蛋白可能发生互作的宿主相关蛋白,并对所筛选出的宿主细胞蛋白进行了GO注释和KEGG代谢通路注释。结果表明,与空白对照组比较,获得与σC蛋白相互作用的宿主细胞蛋白有100个;筛选出的这些宿主细胞蛋白中,在病毒感染后不同时间点差异表达量均上升3倍以上的蛋白有6个,分别与病原致病性、蛋白质代谢途径、细胞信号通路转导有关。该研究结果为进一步探讨σC蛋白的生物学功能奠定了基础,也为揭示σC蛋白与宿主因子相互作用进而调控DRV复制等机制研究提供线索。 展开更多
关键词 鸭呼肠孤病毒 σC蛋白 宿主细胞蛋白 质谱分析 生物信息学分析
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ADM1模型对生物强化厌氧产甲烷体系的模拟 被引量:3
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作者 孙航宇 杨紫怡 +2 位作者 李潇男 刘广青 王雯 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第3期1049-1058,共10页
利用厌氧消化1号模型(ADM1)对高氨氮条件下生物强化促进厌氧消化产甲烷体系进行模拟,对原始ADM1参数进行修正,进而对修正模型进行验证.基于生物强化对厌氧消化产甲烷过程影响的实验数据,结合敏感度分析及参数意义,提出3种假设,选择乙酸... 利用厌氧消化1号模型(ADM1)对高氨氮条件下生物强化促进厌氧消化产甲烷体系进行模拟,对原始ADM1参数进行修正,进而对修正模型进行验证.基于生物强化对厌氧消化产甲烷过程影响的实验数据,结合敏感度分析及参数意义,提出3种假设,选择乙酸半饱和系数(ksac)、最大比乙酸降解速率系数(kmac)和氨氮抑制参数(KINH3,Xac)对原始ADM1进行修正.模拟结果表明,3种修正模型均可对生物强化过程进行较准确的描述,其中,修正kmac后的模型(ADM1_kmac)对甲烷产量和挥发性脂肪酸的拟合优度最高(R^2>0.87),说明在此过程中对kmac的修正更有意义.模型验证表明,修正后的ADM1_kmac模型可对生物强化技术强化厌氧消化产甲烷过程进行描述、分析及预测. 展开更多
关键词 ADM1 生物强化 厌氧消化 甲烷 最大比降解速率系数
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甲状腺上动脉血流速度改变对药物治疗甲亢复发的预测价值 被引量:2
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作者 刘光清 黄利 +2 位作者 郑海龙 梁娴 赵妍妍 《海南医学院学报》 CAS 2018年第5期647-650,653,共5页
目的:探讨药物治疗甲亢后检测甲状腺上动脉血流速度相对变化是否能预测甲亢药物治疗后复发。方法:根据甲亢诊疗规范选择和治疗70例甲亢患者,用彩色多普勒超声观察药物治疗前、疗程结束时的甲状腺上动脉血流参数,对这些参数进行分析;选... 目的:探讨药物治疗甲亢后检测甲状腺上动脉血流速度相对变化是否能预测甲亢药物治疗后复发。方法:根据甲亢诊疗规范选择和治疗70例甲亢患者,用彩色多普勒超声观察药物治疗前、疗程结束时的甲状腺上动脉血流参数,对这些参数进行分析;选择30例无甲状腺功能异常者作对照。结果:70例甲亢患者治疗停药后6个月有26例复发,复发率是37.1%。复发与未复发患者治疗前峰值流速差值比较无显著性差异(t=0.750,P=0.445)。治疗后未复发与复发者的峰值血流速度分别为(41.37±9.67)cm/s和(50.41±11.37)cm/s,二者比较有显著性差异(t=-0.538,P=0.001)。治疗后未复发与复发者的MV1-MV2/MV1分别为0.57±0.07和0.47±0.09,二者比较有显著性差异(t=5.526,P<0.001)。治疗后复发者与正常者的峰值血流速度ROC曲线下面积为0.773,取40.3cm/s为截断值时,敏感性为84.6%,特异性为65.0%。治疗后未复发与复发者的MV1-MV2/MV1ROC曲线下面积为0.870,取0.525为截断值时,敏感性为86.4%,特异性为69.2%。结论:测定甲亢药物治疗前后甲状腺上动脉血流速度下降幅度对预测甲亢复发有较高价值。 展开更多
关键词 甲状腺功能亢进 药物治疗 复发 甲状腺上动脉 彩色多普勒超声
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Morphological Structure and Genetic Mapping of New Leaf-Color Mutant Gene in Rice (Oryza sativa) 被引量:5
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作者 LI Yu-hong WANG Bao-he +5 位作者 DAI Zheng-yuan LI Ai-hong liu guang-qing Zuo Shi-min ZHANG Hong-xi PAN Xue-biao 《Rice science》 SCIE 2012年第2期79-85,共7页
Leaf-color mutations are a widely-observed class of mutations, playing an important role in the study of chlorophyll biosynthesis and plant chloroplast structure, function, genetics and development. A naturally-occurr... Leaf-color mutations are a widely-observed class of mutations, playing an important role in the study of chlorophyll biosynthesis and plant chloroplast structure, function, genetics and development. A naturally-occurring leaf-color rice mutant, Baihuaidao 7, was analyzed. Mutant plants typically exhibited a green-white-green leaf-color progression, but this phenotype was only expressed in the presence of a stress signal induced by mechanical scarification such as transplantation. Prior to the appearance of white ~eaves, mutant plant growth, leaf color, chlorophyll content, and chloroplast ultrastructure appeared to be identical to those of the wild type. After the changeover to white leaf color, an examination of the mutated leaves revealed a decrease in total chlorophyll, chlorophyll a, chlorophyll b, and carotenoid content, a reduction in the number of chloroplast grana lamella and grana, and a gradual degradation of the thylakoid lamellas. At maturity, the mutant plant was etiolated and dwarfed compared with wild-type plants. Genetic analysis indicated that the leaf mutant character is controlled by a recessive nuclear gene. Genetic mapping of the mutant gene was performed using an F2 population derived from a Baihuaidao 7 ~ Jiangxi 1587 cross. The mutant gene was mapped to rice chromosome 11, positioned between InDel markers L59.2-7 and L64.8-11, which are separated by approximately 740.5 kb. The mutant gene is believed to be a new leaf-color mutant gene in rice, and is tentatively designated as gwgl. 展开更多
关键词 Oryza sativa leaf-color mutant morphological structure genetic analysis gene mapping
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番茄抗病品种吉美08 SlDFR基因的克隆与表达 被引量:2
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作者 梁思桃 高雁茹 +4 位作者 刘广清 黄瑞基 刘强 任振新 乔清华 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期813-820,共8页
【目的】克隆番茄(Solanum lycopersicum)抗病品种吉美08二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)基因,并分析枯萎病菌尖孢镰刀菌番茄专化型(Fol4287)诱导下其在番茄不同组织中的表达模式,为深入研究SlDFR基因在番茄抗病... 【目的】克隆番茄(Solanum lycopersicum)抗病品种吉美08二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)基因,并分析枯萎病菌尖孢镰刀菌番茄专化型(Fol4287)诱导下其在番茄不同组织中的表达模式,为深入研究SlDFR基因在番茄抗病过程中的调控机制提供理论依据。【方法】采用同源克隆技术从番茄中克隆SlDFR基因cDNA全长序列,并进行生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测番茄根、茎、叶中SlDFR基因在枯萎病菌诱导下的表达模式。【结果】从番茄抗病栽培品种吉美08中克隆得到SlDFR基因,cDNA序列全长1659 bp,包含1个1149 bp的开放阅读框(ORF),编码379个氨基酸。SlDFR蛋白的相对分子质量为42.43 kD,等电点(pI)为6.08,是一个亲水的、稳定的酸性蛋白,亚细胞定位在高尔基体上,无信号肽和跨膜结构域,有38个磷酸化位点,其中,丝氨酸18个,苏氨酸15个,酪氨酸5个。SlDFR蛋白的二级结构中α-螺旋占37.73%,延伸链占13.98%,无规则卷曲占40.69%。系统发育进化树分析结果表明,SlDFR蛋白序列与同属茄科马铃薯(Solanum pennellii)亲缘关系较近,其次为黑果枸杞(Lycium ruthenicum)。qRT-PCR分析结果显示,SlDFR基因在番茄叶中表达量最高,在根中表达量最低。SlDFR基因在番茄根、茎、叶中表达量受番茄枯萎病菌诱导,均呈现不同程度上调,其中,在根中表达量变化最大,在叶中表达量变化较小,推测SlDFR基因的表达量与番茄枯萎病菌胁迫响应有关,且番茄根部类黄酮的合成为重要胁迫响应途径。【结论】SlDFR基因表达量受Fol4287的诱导,可能参与番茄枯萎病胁迫响应过程,且对番茄枯萎病菌的响应在番茄根部更强烈,并通过调控番茄根部黄酮类物质的合成提高根系分泌物的抑菌活性从而增强番茄对枯萎病的抗性。 展开更多
关键词 番茄 二氢黄酮醇4-还原酶(DFR) 基因克隆 表达分析
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建筑消防检测中防排烟存在的问题及对策探讨 被引量:6
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作者 姜海坤 王健康 刘光青 《建筑技术开发》 2020年第24期113-114,共2页
随着我国经济在不断的发展,我国的建筑行业也在不断发展,越来越多的房屋建筑在不断的建设当中,相应的消防安全检测提出了更高的要求,由于房屋的建筑面积越来越密集,在这个过程中如果不能做好消防检查工作,一旦出现火灾情况,将会直接影... 随着我国经济在不断的发展,我国的建筑行业也在不断发展,越来越多的房屋建筑在不断的建设当中,相应的消防安全检测提出了更高的要求,由于房屋的建筑面积越来越密集,在这个过程中如果不能做好消防检查工作,一旦出现火灾情况,将会直接影响城市之后的发展及相关居民的生命财产安全,因此须提升整个建筑的消防设计及检测的问题。主要针对建筑消防检测当中,防排烟存在的问题及对策进行一个详细的分析和介绍,希望能够为日后的消防检测提供更好的参考和借鉴。 展开更多
关键词 建筑消防检测 防排烟 主要问题 解决对策
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Study on characteristics of wood and basalt fibers and preparation of a novel ecocomposite wood fiber filtration sheet 被引量:1
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作者 WANG Guang-jian liu guang-qing +4 位作者 GUO Ya-jie YANG Zheng-xin liu Zheng-wang ZHANG Shuai XU Ming-xia 《材料科学与工程(中英文版)》 2008年第10期59-65,共7页
关键词 玄武岩纤维 纤维过滤 木材 制备 过滤性能 节约用水 硅烷偶联剂 重复利用率
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Attenuation of Virulent Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Strain CH-1a and Genetic Variation of ORF5 Gene
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作者 CAI Xue-hui WU Guo-jun +6 位作者 liu Yong-gang liu guang-qing SHI Wen-da WANG Shu-jie MA Ping LI Cheng-jun HAN Wen-yu 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2012年第12期2035-2042,共8页
To develop a modified live vaccine (MLV) against porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), virulent CH-Ia strain was attenuated by serial passages up to 130 passage (P130) in Marc-145 cells. T... To develop a modified live vaccine (MLV) against porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), virulent CH-Ia strain was attenuated by serial passages up to 130 passage (P130) in Marc-145 cells. The virulence and immune efficacy of the attenuated CH-1 a were evaluated in pigs. The results showed that animals inoculated with P130 did not develop any clinical sign of the disease, but produced rapid and effective humoral immune responses against PRRSV challenge, indicating that attenuated CH-1 a P 130 is the candidate as the effective vaccine against PRRSV. To define the potential mutations in the attenuated CH-la genome, we sequenced and analyzed the ORF5 gene of CH-la strain of different passages (P39, P55, P65, P70, P85, P100, P115, P120, P125, and P130) and found that three mutations (C5Y, H38Q and L146Q) which may be related with the attenuation of CH-la. In addition, we also found a unique restriction enzyme site (TspEI) in the ORF5 gene of attenuated CH-la, which can be used as a genetic marker to distinguish original and attenuated CH- 1 a. 展开更多
关键词 ATTENUATION porcine reproductive and respiratory syndrome virus genetic variation ORF5 gene
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某新建机场地基淤泥质土流变特性试验研究
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作者 刘光庆 刘海旺 +2 位作者 陈缘 李文乾 崔伦凯 《地基处理》 2021年第6期482-487,共6页
为准确预测和分析某新建机场的工后沉降大小与发展趋势,对该工程填海造地范围内的两组海相淤泥质土进行了一维流变固结试验,试验考虑了分级加载和分别加载两种工况。通过对试验中试样的固结变形随时间变化的规律分析,得到了该场地内软... 为准确预测和分析某新建机场的工后沉降大小与发展趋势,对该工程填海造地范围内的两组海相淤泥质土进行了一维流变固结试验,试验考虑了分级加载和分别加载两种工况。通过对试验中试样的固结变形随时间变化的规律分析,得到了该场地内软土次固结系数的大小及其影响因素,试验结果表明,该海相淤泥质软土的次固结系数先随着荷载的增大而快速增长,达到一定荷载后呈缓慢增长,并且在一定深度范围内也随深度的增大而增大。此外还分析了试验中软土次固结与主固结变形比例随荷载的变化情况,结果显示主次固结变形比例与该软土先期固结压力存在明显关联性。试验结果与分析结论可为该地区类似工程中软土的后期沉降变形分析与计算提供借鉴与参考。 展开更多
关键词 软土 机场 沉降 流变 次固结 试验
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细小病毒入胞途径的研究进展
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作者 王锦斌 王薏敏 +6 位作者 毕庄莉 刘禹含 朱恩宇 王勇 刘光清 许发芝 李传峰 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2023年第12期1585-1592,共8页
细小病毒(parvovirus)是一类侵袭脊椎动物与无脊椎动物的无囊膜单链DNA病毒,严重危害着人类与动物的健康。病毒的感染过程包括吸附、穿入、脱壳、复制、组装以及子代病毒的释放。其中细小病毒成功入侵宿主细胞是启动感染的先决条件,而... 细小病毒(parvovirus)是一类侵袭脊椎动物与无脊椎动物的无囊膜单链DNA病毒,严重危害着人类与动物的健康。病毒的感染过程包括吸附、穿入、脱壳、复制、组装以及子代病毒的释放。其中细小病毒成功入侵宿主细胞是启动感染的先决条件,而病毒的受体和入胞途径决定了组织嗜性和致病机制。本文系统总结了细小病毒基因的结构和功能的特点以及细小病毒利用不同的受体和入胞途径入侵宿主的研究进展。对细小病毒入胞途径的系统总结,一方面有助于开发靶向细小病毒入胞途径药物以及基因治疗载体,另一方面为后续细小病毒入侵机制的深入研究提供参考。 展开更多
关键词 细小病毒 基因组 入胞途径 受体 内吞
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基于猫细小病毒VP2蛋白B细胞抗原表位的间接ELISA方法的建立与应用
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作者 王真真 汤傲星 +9 位作者 刘春草 宋若楠 贾楠楠 杜汉宇 李娜 朱杰 李传峰 刘光清 王金泉 孟春春 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期310-316,共7页
为建立一种检测猫细小病毒抗体的间接ELISA方法,将猫细小病毒VP2蛋白共有的多个B细胞抗原表位进行串联表达为重组蛋白并纯化作为包被抗原。采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时比较了间接ELISA方法的其他反应条件... 为建立一种检测猫细小病毒抗体的间接ELISA方法,将猫细小病毒VP2蛋白共有的多个B细胞抗原表位进行串联表达为重组蛋白并纯化作为包被抗原。采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时比较了间接ELISA方法的其他反应条件。结果显示,抗原包被量为8μg/m L,血清最佳稀释度为1∶400,二抗的最佳工作稀释度为1∶10000;TMB底物显色液37℃避光显色反应15 min。特异性试验结果显示,同猫杯状病毒和猫疱疹病毒阳性血清均无交叉反应。此方法对猫细小病毒阳性血清的敏感性为1∶5120,组内、组间变异系数均小于10%。与包被全病毒的方法平行比较,显示其检测阴阳性血清的值高度一致。结果表明,基于猫细小病毒串联表达的VP2蛋白B细胞抗原表位建立的间接ELISA方法适合临床样本的检测,为猫瘟的防控工作提供了技术支撑。 展开更多
关键词 猫细小病毒 VP2蛋白 间接ELISA
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Ⅰ型猫疱疹病毒gB蛋白的截短表达及多克隆抗体的制备
16
作者 李娜 王真真 +8 位作者 杜汉宇 贾楠楠 宋若楠 朱杰 李传峰 程松 梁留存 刘光清 孟春春 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1531-1537,共7页
为获得免疫原性好的Ⅰ型猫疱疹病毒(FHV-1)gB截短蛋白和制备特异性的多克隆抗体,以用于检测gB蛋白的表达水平变化及FHV-1的血清学诊断技术研究,本试验截取gB蛋白的优势抗原区并插入pET-30a载体,构建原核表达质粒pET-30a-gB,测序正确后转... 为获得免疫原性好的Ⅰ型猫疱疹病毒(FHV-1)gB截短蛋白和制备特异性的多克隆抗体,以用于检测gB蛋白的表达水平变化及FHV-1的血清学诊断技术研究,本试验截取gB蛋白的优势抗原区并插入pET-30a载体,构建原核表达质粒pET-30a-gB,测序正确后转入BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达。通过亲和层析纯化蛋白,将获得的重组蛋白免疫6周龄雌性新西兰大白兔制备多克隆抗体。采用固定病毒-稀释血清法测定多抗中和效价,使用FHV-1感染后的细胞样本进行间接免疫荧光和West-blotting检测其反应性和特异性。结果显示,成功构建了表达FHV-1截短gB蛋白的重组质粒pET-30a-gB,在37℃诱导8 h后主要以包涵体形式表达。中和试验结果显示,制备FHV-1 gB截短蛋白多克隆抗体中和效价为1∶48。间接免疫荧光和West-blotting试验结果表明,所制备多克隆抗体具有良好的反应性和特异性,可特异性检测出FHV-1感染细胞中的gB蛋白。结果表明,原核表达的gB截短重组蛋白具有良好的免疫原性,制备的多克隆抗体具有较高的中和效价以及较好的反应性和特异性,为进一步解析gB蛋白的生物学功能和建立FHV-1血清学诊断方法提供了生物材料保障。 展开更多
关键词 Ⅰ型猫疱疹病毒(FHV-1) 原核表达 gB截短重组蛋白 多克隆抗体
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