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奶牛乳房炎相关IFNE基因的克隆、表达及功能研究
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作者 王正兴 罗仍卓么 +2 位作者 王晋鹏 包斌武 王兴平 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第2期420-428,共9页
【目的】研究干扰素ε(Interferon epsilon,IFNE)基因在奶牛乳腺上皮细胞(Bovine mammary epithelial cells,bMECs)炎症中的表达模式及其潜在的分子功能。【方法】通过PCR和测序技术得到IFNE基因的编码区(Coding sequence,CDS)序列,并... 【目的】研究干扰素ε(Interferon epsilon,IFNE)基因在奶牛乳腺上皮细胞(Bovine mammary epithelial cells,bMECs)炎症中的表达模式及其潜在的分子功能。【方法】通过PCR和测序技术得到IFNE基因的编码区(Coding sequence,CDS)序列,并采用生物信息学方法分析IFNE基因及其蛋白质特性;利用RNAi和qPCR技术检测IFNE、干扰素β(Interferon beta,IFNB)、干扰素κ(Inter⁃feronκ,IFNK)、半胱天冬酶3(Cystathione aspartase 3,CASP3)、半胱天冬酶9(Cystathione aspartase 9,CASP9)等基因在脂多糖(Li⁃popolysaccharide,LPS)诱导bMECs炎症反应中的表达量。【结果】IFNE基因的CDS长度为582 bp,可编码由193个氨基酸组成的具有亲水性且不稳定的非分泌蛋白。与对照组(0 h)相比,在LPS诱导3、6、12和24 h的bMECs中白细胞介素⁃6(Interleukin⁃6,IL⁃6)和白细胞介素⁃1β(Interleukin⁃1β,IL⁃1β)的表达量均显著上调(P<0.05,下同),白细胞介素⁃8(Interleukin⁃8,IL⁃8)的表达量极显著上调(P<0.01,下同),表明成功构建了炎症细胞模型。在炎症细胞模型构建成功的基础上,采用qPCR检测bMECs内IFNE基因的表达量结果表明,与对照组(0 h)相比,IFNE基因在LPS诱导bMECs 3、6、12和24 h的表达量均极显著上调,且在诱导6 h的表达量最高。RNAi实验结果表明,干扰IFNE可使得炎症性bMECs内的IL⁃8、IFNB、IFNK和白细胞介素⁃10受体亚基β(Interleu⁃kin⁃10 receptor subunitβ,IL⁃10RB)基因的表达量均显著上调,IL⁃6、IL⁃1β、CASP3、CASP9和BAD基因的表达量均呈极显著上调。【结论】IFNE基因在LPS诱导的bMECs炎症反应中的表达量极显著上调,干扰IFNE基因可通过调控IL⁃6、IL⁃8、IL⁃1β、IFNB、IF⁃NK、CASP3和CASP9等基因的表达而缓解bMECs炎症反应,为奶牛乳房炎的分子治疗和抗乳房炎分子育种奠定理论基础。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺上皮细胞 IFNE 生物信息学分析 乳房炎
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Novel Splice Variants of Bovine Interleukin-1 Receptor-Associated Kinase 2(IRAK2)
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作者 WANG Xing-ping luoren zhuo-ma +4 位作者 XU Shang-zhong GAO Xue LI Jun-ya REN Hong-yan CHEN Jin-bao 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2009年第4期508-512,共5页
Interleukin-1 receptor-associated kinases (IRAKs) are important signaling elements of the toll-like receptors family, which play a role in innate immune responses by coordinating host defense mechanisms. Presently d... Interleukin-1 receptor-associated kinases (IRAKs) are important signaling elements of the toll-like receptors family, which play a role in innate immune responses by coordinating host defense mechanisms. Presently different isoforms of human and murine IRAK2 molecules are cloned, but there is no report on the sequences and structure of bovine IRAK2 gene. In this study, we cloned the bovine IRAK2 gene by RT-PCR and RACE and discovered that there exist two alternative splicing of bovine IRAK2 genes, IRAK2a and 1RAK2b (GenBank accession no. EU528620 and EU528621). IRAK2a gene is 2 148 bp coding 622 aa, which contains a death domain (aa 14-94) and a kinase domain (aa 205-440), but 1RAK2b lacks 147 bp of exon 3 corresponding to 1RAK2a, and codes 386 aa which contains only partly kinase domain. 展开更多
关键词 CATTLE IRAK2 alternative splicing
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