日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗抗生殖免疫的研究

目的 探讨日本血吸虫组织蛋白酶ＢＤＮＡ疫苗的保护。方法 分别用Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫昆明鼠和ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠，攻击感染后６ｗ 计数成虫负荷及粪便和组织内虫卵数。结果 用构建的Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫小鼠可影响成虫发育，肝组织减卵率为５９－３％～６５－０％ ，肠组织减卵率为５７－６％ ～６２－１％ ，粪便减卵率为８６－５％ 。结论 Ｓｊ３１ＢＩＮ 可诱导小鼠产生抑制雌虫生殖的免疫力。

日本血吸虫重组铁蛋白的粘膜免疫效果研究

目的 构建日本血吸虫铁蛋白 (SjFer)原核表达质粒。以壳聚糖作佐剂 ,探讨重组日本血吸虫铁蛋白(rSjFer)粘膜免疫诱导小鼠抗血吸虫感染的保护力。 方法 用PCR扩增SjFer基因 ,亚克隆入原核表达载体pTWIN1上intein 2的N端 ,经PCR、限制性酶切筛选阳性重组子并经测序鉴定。将阳性重组子转化大肠埃希菌 ,在低温和低浓度的异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)条件下诱导表达可溶性重组融合蛋白。利用重组融合蛋白的壳聚糖结合功能域 (CBD)结合位点 ,使其与壳聚糖结合 ,经滴鼻免疫小鼠 ,于第 3次免疫后 2周攻击感染 ,用减虫率和减卵率表示保护力。感染前采血和唾液用ELISA检测抗体。 结果 成功克隆并表达了rSjFer。rSjFer以壳聚糖作佐剂经滴鼻免疫获得了 3 5 .5 1%的减虫率和 5 2 .17%的减卵率。免疫后小鼠血清IgG和IgA及唾液SIgA抗体水平与对照组比较均明显升高。 结论 获得了rSjFer ,该蛋白以壳聚糖作佐剂经粘膜免疫能诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染的保护力。

日本血吸虫尾蚴抗原模拟表位的筛选及其免疫保护性

目的 筛选日本血吸虫尾蚴抗原的模拟表住,探讨其对日本血吸虫的免疫保护性。方法 用粗提日本血吸虫尾蚴抗原的抗体IgG作配体筛选噬菌体12肽库,按“吸附-洗脱-扩增”的过程进行三轮筛选;随机挑取单个噬菌体克隆进行Dot-ELISA检测;用混和噬菌体克隆免疫小鼠3次,攻击感染45d后剖杀冲虫,计算虫数及肝卵数。结果 经三轮筛选,特异性噬菌体得到富集,挑取11个噬菌体克隆经Dot-ELISA鉴定,均与日本血吸虫尾蚴抗原免疫血清呈特异性反应。与对照组相比,混和噬体克隆免疫小鼠的减虫率为18.79％,减卵率为38.00％。结论 利用噬菌体随机肽库技术获得了日本血吸虫尾蚴抗原的模拟表位,这些表位能诱导对日本血吸虫的保护性免疫。

日本血吸虫RhoGTPaseDNA及重组蛋白免疫保护效果研究

目的 研究日本血吸虫中国大陆株Rho家族小分子G蛋白(Sj-Rho GTPase)DNA疫苗及重组蛋白疫苗免疫保护效果。方法 将pcDNA3.1-SjRho GTPase DNA疫苗和pGEX-5X-3原核载体所表达的重组蛋白疫苗三次分别或联合免疫昆明鼠,3周后,每鼠感染40条尾蚴,42 d后剖杀小鼠,记数成虫和肝脏虫卵数。结果 与佐剂或空白质粒对照组相比,DNA疫苗、重组蛋白疫苗及联合免疫分别获得22.16％(P<0.01)、18.71％(P<0.05)和39.20％(P<0.001)的减虫率以及34.55％、20.07％和49.55％(P<0.001)的肝组织减卵率。结论Sj-Rho GTPase DNA疫苗及重组蛋白疫苗均可诱导小鼠产生一定的免疫保护作用,且联合免疫方案保护效果好于单一疫苗。