曲古抑菌素A抑制人脑肿瘤细胞增殖及提高p21和p27蛋白表达

背景和目的:研究提示组蛋白乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A能诱导细胞凋亡。本研究拟探讨曲古抑菌素A对人脑肿瘤细胞的杀伤作用和机制。材料和方法:选用两种人脑肿瘤细胞株,一株为p53突变型的人胶质瘤细胞株T98G,另一株为p53野生型的人神经母细胞瘤细胞株SKNSH;采用SRB细胞毒测定方法检测TSA作用后肿瘤细胞的增殖状态,用琼脂糖凝胶DNA电泳和流式细胞仪定性和定量分析肿瘤细胞凋亡情况,应用Western印迹分析TSA作用前后,肿瘤细胞中高度乙酰化的组蛋白H3、H4,内源性p53蛋白、乙酰化p53蛋白、以及细胞周期相关蛋白p21、p27的变化。结果:TSA在纳摩尔级浓度即能有效抑制肿瘤细胞增殖,并引起高度乙酰化的组蛋白分子H3和H4集聚;用320nM的TSA作用肿瘤细胞24小时,即发生显著的肿瘤细胞凋亡;TSA刺激肿瘤细胞48小时内,p21和p27蛋白表达显著增强,其中p21蛋白水平在4小时后时即明显升高,8小时达高峰;p27蛋白水平升高发生在8小时后,而内源性p53蛋白水平和乙酰化的p53蛋白水平未发生变化。结论:TSA在体外能有效抑制对传统化疗耐药的人脑肿瘤细胞生长,其抗肿瘤生长机理可能是通过上调p21和p27蛋白水平实现的,而不受内源性p53基因状态和蛋白改变的影响。

人肿瘤细胞ERCC2基因表达与抗癌药耐药的相关性

【目的】探讨切割修复交叉互补基因 2 (excisionrepaircross complementingrodentrepairdeficiencygene 2 ,ERCC2 )表达与人肿瘤对抗癌药耐药的关系。【方法】采用Westernblot检测美国国家癌症研究所 (NationalCancerInstitute,NCI)用于抗癌药筛选的 6 0株人肿瘤细胞的ERCC2表达 ,并与 170种抗癌药物的细胞毒试验结果进行相关性分析。【结果】肿瘤细胞ERCC2的蛋白表达水平高低不一 ,其中 6株细胞的ERCC2蛋白水平在可测定范围以下。 170种抗癌药物中有 2 8种化疗药物的耐药性与肿瘤细胞的ERCC2蛋白水平相关性显著或非常显著。根据药物作用机理分析 ,肿瘤细胞ERCC2表达与其对烷化剂和抗有丝分裂剂类抗癌药耐药相关性显著。【结论】肿瘤细胞具有DNA修复能力 ,如核苷酸切割修复 。

转染ERCC2的人脑胶质瘤细胞增加对烷化剂类抗癌药耐药性

目的 探讨切割修复交叉互补基因 2 (excisionrepaircross complementingrodentrepairdeficiencygene 2 ,ERCC2 )在人脑胶质瘤耐药中的作用。方法 采用来自p2E ER2的 2 4kbEcoRⅠ片段和pcDNA3载体组建成pcDNA3ERCC2质粒。再用脂质体转染技术 ,将pcDNA3ERCC2质粒转入SKMG 4细胞。转染ERCC2的细胞用G41 8连续筛选 2周。再从存活的细胞集落挑取单细胞进行克隆。克隆细胞进一步增殖并经RT PCR和Westernblot证实为稳定转染细胞用于下一步试验。转染不带ERCC2的pcDNA3载体作为对照。然后 ,采用改良的SulforhodamineB(SRB)抗癌药筛选法 ,对稳定转染和亲代SKMG 4细胞进行细胞毒试验。结果 细胞毒性试验结果显示转染ERCC2的SKMG 4胶质瘤细胞对顺铂和麻法林的耐药性明显增加。顺铂的IC90 ( μmol/L)在亲代SKMG 4、转染pcDNA3载体的对照SKMG 4和转染ERCC2的SKMG 4细胞分别为 1 1 75、1和 1 75 ;麻法林的IC90 ( μmol/L)分别为 5、5 6和 9。转染ERCC2的SKMG 4细胞与转染空载体的对照细胞相比较 ,顺铂和麻法林的IC90 分别增加了 75 %和 61 %。结论 转染ERCC2基因的胶质瘤细胞对顺铂和麻法林的耐药性明显增加 ,证明ERCC2在烷化剂类抗癌药物耐药中起重要作用。

肌氨酰胺亚硝脲在荷神经元外单胺递质载体和DNA修复基因表达的人肺癌裸鼠中的抗肿瘤作用

目的 探讨抗癌新药肌氨酰胺亚硝脲 (2 chloroethyl 3 sarcosinamide 1 nitrosourea ,SarCNU)在体内对DNA修复基因表达阳性肿瘤的抗肿瘤作用。方法 将人肺癌细胞株NCI H5 2 2接种于裸鼠皮下 ,制作肿瘤模型 ,观察SarCNU的抗肿瘤作用。同时 ,采用逆转录 -聚合酶链反应 (reverse transcriptionpolymerasechainreac tion ,RT PCR)测定肿瘤标本的神经元外单胺递质载体 (extraneuronalmonoaminetransporter ,EMT)和DNA修复基因六氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶 (O6 methylguanine DNAmethyltransferase ,MGMT)、核苷酸剪切修复基因ER CC1 6 (excisionrepaircross complementingrodentrepairdeficiencygene 1 6 )的表达。结果 荷瘤鼠接受SarCNU治疗后肿瘤均明显缩小 ,实验组肿瘤与对照组肿瘤大小变化 (T/C % )最佳比值为 2 3 ,肿瘤生长延缓达 5 5天 ,显示了良好的抗肿瘤作用。肿瘤细胞的EMT和DNA修复基因MGMT以及ERCC1 6的表达均为阳性。结论 在EMT阳性的肿瘤 ,即使具有DNA修复基因表达 。