慢病毒介导的RNA干扰鉴定RIG-Ⅰ、MDA-5和TLR3在猪上皮细胞识别RNA病毒中的作用

病原体识别受体是宿主抗病毒免疫反应所必需的,这些特异的受体能识别保守的病毒化合物并诱导Ⅰ型干扰素(IFN)和促炎细胞因子。本试验在猪细胞系PK-15中研究了RIG-Ⅰ、MDA-5和TLR3在IFN-β对古典猪瘟病毒(CSFV)、口蹄疫病毒(FMDV)、水泡性口炎病毒(VSV)和A型流感病毒(IAV)的识别中的作用。本研究鉴定了猪基因特异性小干扰RNA序列,并用慢病毒(LV)系统来表达相应的短发夹RNA,构建了基因表达下调细胞系,并检测基因表达下调水平与时间和IFN-β刺激的相关性。试验细胞经多次传代,报告基因eGFP的表达和目的基因的RNA减少水平都是稳定的,而后者相对变化较大。IFN-β诱导干扰素应答基因(如RIG-Ⅰ)表达,但其水平在试验细胞系中仍低于对照细胞。病毒介导的IFN-βmRNA反应结果表明,在PK-15细胞中,口蹄疫病毒的识别完全是由MDA-5介导的,而VSV和IAV主要由RIG-Ⅰ检测到,MDA-5也起到一定作用,CSFV是通过MDA-5,RIG-Ⅰ和TLR3识别。