基于IDEAS的多元化护理对溃疡性结肠炎患者生活质量及满意度的影响

目的探究基于IDEAS的多元化护理模式对溃疡性结肠炎患者生活质量及满意度的影响。方法方便选取2018年9月—2023年9月盐城市第三人民医院消化内科收治的84例溃疡性结肠炎患者作为研究对象,以随机数表法分为两组,对照组(42例)实行常规护理,观察组(42例)实行基于IDEAS的多元化护理模式。比较两组生活质量评分及护理满意度。结果观察组生活质量评分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组护理总满意率远高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论基于IDEAS的多元化护理模式对溃疡性结肠炎护理效果具有积极影响,利于提高患者生存质量与护理满意度。

乳腺癌并发抑郁症模型小鼠血液及组织中白介素类细胞因子含量的变化

目的:观察乳腺癌并发抑郁症(BCRD)模型小鼠行为、白介素类细胞因子的变化。方法:BALB/c雌性小鼠,腋下接种1×106个4T1炎症乳腺癌细胞,7 d后观察是否成模,成模后的小鼠连续21 d背部皮下注射皮质酮(30 mg/kg)复制BCRD模型。所有小鼠按糖水消耗随机分为4组:乳腺癌组、抑郁症组、BCRD组、空白对照组。21 d后,测定各组小鼠糖水偏嗜度、旷场实验等行为学变化;采用悬液芯片技术检测血清、海马、肿瘤、皮质组织中IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、IL-12含量。结果:与空白组比较,BCRD小鼠蔗糖偏嗜度及垂直活动次数降低(P<0.01或P<0.05),血清、海马中IL-2、IL-6、IL-12含量显著升高(P<0.01或P<0.05),海马中IL-10含量显著增加(P<0.01或P<0.05);与乳腺癌组比较,BCRD组血清、海马、皮质中IL-6含量显著升高(P<0.05),与抑郁症组比较,血清、海马、皮质中IL-6含量差异无统计学意义(P>0.05),但均有升高趋势。结论:IL-6在血清、海马、皮质中表达均较高且均一,可能是BCRD的重要标志物。

基于城市更智慧目标下的园林管理创新策略研究——以张家口智慧园林平台为例

智慧园林是智慧城管中的一部分,智慧园林将在城市管理和生态建设中发挥着不可替代的作用。文章以张家口市智慧园林平台应用为基础,旨在探索城市园林的智慧养护、智慧服务、智慧管理的新型智能化手段,从而达到节约化、信息化、多样化、生态化、高效化的管理目标,为打造资源更节约、环境更生态、功能更智能、管理更精细的智慧城市样板提供可行性的建议。

百事乐加味方对脑卒中后抑郁模型大鼠海马-前额叶皮层神经细胞凋亡蛋白的影响

目的观察百事乐加味方对脑卒中后抑郁(PSD)大鼠神经功能、形态学及海马(HP)、前额叶皮层(PFC)组织Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响,从神经细胞凋亡方面探讨百事乐加味方防治PSD作用机制。方法采用MCAO+CUMS+孤养法复合因素建立PSD模型。分组前进行行为学评分,随机分为假手术组、抑郁组、卒中组、PSD组、阳性药组和百事乐加味方高、低剂量组,各给药组给予相应药物,连续28 d。采用HE和Nissl染色观察HP、PFC组织形态学;采用免疫组化检测大鼠HP、PFC组织Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达。结果对神经功能缺损评分的影响:与PSD组大鼠比较,百事乐加味方高、低剂量组第21、28日神经功能缺损评分显著改善(P<0.05,P<0.01);对HP、PFC组织形态学的影响:与PSD组比较,百事乐加味方高、低剂量组大鼠病变明显改善。对凋亡蛋白的影响:百事乐加味方高剂量组大鼠HP、PFC组织Bax、Caspase-3蛋白表达显著降低,Bcl-2蛋白表达显著升高,Bcl-2/Bax比值显著增大(P<0.01);百事乐加味方低剂量组大鼠HP、PFC组织Bcl-2蛋白表达显著升高,Caspase-3蛋白表达显著降低,HP组织Bax蛋白表达显著降低,Bcl-2/Bax比值显著增大(P<0.05,P<0.01)。结论百事乐加味方通过调控凋亡蛋白表达,抑制细胞凋亡,减少神经病变,改善神经功能,从而发挥治疗作用,是其抗PSD主要作用机制之一。

从抑郁共病失眠机制探寻抑郁症新药研发的方向

抑郁症是一种常见的情感障碍类精神疾病,失眠是包括抑郁障碍在内的诸多精神疾病的独立危险因素,失眠不仅是抑郁的症状之一,抑郁与失眠是一种循环往复持续进展的一种共同疾病状态。本文就近年来抑郁症与失眠发病共同机制作一综述,初步探寻研发抑郁症新药的方向。

下丘脑-垂体-肾上腺轴紊乱对焦虑性抑郁模型大鼠海马结构的影响

目的研究下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴紊乱对焦虑性抑郁模型大鼠海马结构的影响,探讨焦虑性抑郁的潜在发病机制。方法将大鼠随机分为空白组、溶媒组、焦虑组、抑郁组和焦虑性抑郁组,每组12只。采用慢性束缚应激联合皮质酮注射方法建立焦虑性抑郁大鼠模型,连续21 d;造模后采用高架十字迷宫(EPM)、旷场实验(OFT)、强迫游泳实验(FST)评价大鼠焦虑和抑郁样行为;HE染色检测大鼠HPA轴各组织及海马病理变化;ELISA检测大鼠血浆中促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)含量;Western blot检测大鼠海马糖皮质激素受体(GR)蛋白表达。结果焦虑性抑郁组大鼠进入开臂的时间、次数及自主活动次数均与焦虑组相当,不动时间显著增加,与对照组及抑郁组比较有显著差异(P<0.01或P<0.05);HPA轴各组织均出现不同程度损伤,海马神经元肿胀,呈空泡状;同时,血浆中CRH、ACTH和CORT含量显著增加(P<0.01或P<0.05),海马GR表达显著下降。结论焦虑性抑郁模型组大鼠具有显著的焦虑及抑郁样行为,其发病机制可能与机体HPA轴紊乱及其引发的脑内海马损伤密切相关。

百事乐胶囊对皮质酮暴露大鼠海马神经元神经营养相关蛋白表达的影响

目的观察百事乐胶囊药物血清对皮质酮暴露大鼠原代海马神经元神经营养相关蛋白表达的影响,探讨其治疗抑郁症的潜在机制。方法采用受孕18 d的SD大鼠胎鼠进行海马神经元原代培养,将神经元随机分为正常组、空白血清组、皮质酮暴露组、氟西汀药物血清组、百事乐胶囊药物血清组。除正常组外,其余各组给予相应干预的同时进行高浓度皮质酮暴露。干预18 h后,光学显微镜下观察神经元生长情况,MTT法检测海马神经元细胞活力,高内涵分析技术检测神经营养相关蛋白的表达。结果与正常组比较,皮质酮暴露组神经元存活率显著降低(P<0.01),树突断裂或明显减少,神经网络连接减少,脑源性神经营养因子(BDNF)、神经营养因子-3(NT-3)及神经生长因子(NGF)蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01),血清和糖皮质激素诱导激酶1(SGK1)蛋白表达明显升高(P<0.01);与皮质酮暴露组比较,氟西汀药物血清组和百事乐胶囊药物血清组神经元存活率明显升高(P<0.05),胞间网络更丰富,BDNF、NT-3及NGF蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01),SGK1蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论百事乐胶囊可提高皮质酮暴露下海马神经元细胞活力,促进神经细胞可塑性,并可通过SGK1信号增强神经营养。

逍遥抗癌解郁方对乳腺癌并发抑郁症模型小鼠抑郁样指征的影响

目的观察逍遥抗癌解郁方对乳腺癌并发抑郁症模型小鼠的影响,探讨其作用机制。方法以BALB/c雌性小鼠为研究对象,采用腋下注射4T1炎性乳腺癌细胞联合腹腔注射皮质酮(CORT)建立乳腺癌并发抑郁症模型小鼠。根据糖水消耗量随机分为空白组、模型组、紫杉醇组、逍遥抗癌解郁方组、化疗+氟西汀组、化疗+逍遥抗癌解郁方组,分别给予相应药物21 d后,采用糖水偏好实验、Open-field实验和新奇摄食实验检测小鼠行为学变化;ELISA检测小鼠血浆促肾上腺激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、CORT,血清5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE),肿瘤标志物糖类抗原CA153、CA125和癌胚抗原(CEA)的含量。结果与空白组比较,模型组小鼠糖水偏好度、水平与垂直运动明显降低(P<0.01,P<0.05),摄食潜伏期明显增加(P<0.01,P<0.05),肿瘤标志物CA153、CA125和CEA含量及下丘脑-垂体-肾上腺轴相关指标显著升高(P<0.01);单胺神经递质NE、DA和5-HT明显下降(P<0.01);与模型组比较,化疗+逍遥抗癌解郁方组小鼠糖水消耗量显著升高,自主行为活动增加,行为绝望状态改善(P<0.01,P<0.05);肿瘤标物及HPA轴相关指标含量明显降低(P<0.01,P<0.05);5-HT、DA和NE含量明显升高(P<0.01,P<0.05)。结论逍遥抗癌解郁方联合紫杉醇可有效缓解乳腺癌并发抑郁症的抑郁样指征。

血清Ⅲ型前胶原氨基端肽及半乳糖凝集素3水平与老年顽固性心力衰竭患者心功能的相关性

目的探讨血清Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)及半乳糖凝集素3(Gal-3)水平与老年顽固性心力衰竭患者心功能的相关性。方法回顾性分析95例顽固性心力衰竭老年患者的临床资料,根据美国纽约心脏病学会(NYHA)心功能分级标准将心功能Ⅲ级患者59例纳入A组,将心功能Ⅳ级患者36例纳入B组,设计一般情况调查量表,详细记录2组患者一般资料(性别、年龄、合并症、体质量指数及吸烟史等)及血清PⅢNP、Gal-3水平,采用Spearman方法对血清PⅢNP及Gal-3水平与老年顽固性心力衰竭患者心功能的相关性进行分析。结果2组患者一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05);A组患者血清PⅢNP、Gal-3水平均低于B组,差异有统计学意义(P<0.05);血清PⅢNP、Gal-3与老年顽固性心衰患者心功能分级呈正相关(r=0.429、0.424,P均<0.05)。结论血清PⅢNP及Gal-3水平与老年顽固性心力衰竭患者心功能严重程度呈正相关。

ELK-1/JNK/c-Fos对左归降糖解郁方(ZGJTJYF)体外培养的模拟糖尿病并发抑郁症(DD)大鼠海马神经元凋亡中的作用

目的:研究信号通路ELK-1/JNK/c-Fos在左归降糖解郁方(ZGJTJYF)对模拟糖尿病并发抑郁症(DD)环境下抗海马神经元凋亡中的作用。方法:原代培养海马神经元,加入高糖(150 mmol/L)+皮质酮(200μmol/L),构建DD体外细胞模型;将培养的海马神经元细胞随机分为5组:空白血清组、正常组、左归降糖解郁方含药血清组、阳性药(二甲双胍+氟西汀)含药血清组和模型组(每组3个复孔)。模型组和正常组给予等量培养液,其余组加入相应体积分数10%的相应血清,均干预18 h。分别采用Hoechst染色、高内涵细胞成像分析技术和RT-PCR技术分别检测海马神经元凋亡情况及检测凋亡相关ELK-1、JNK和c-Fos蛋白和基因的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞凋亡明显,其海马神经元凋亡数量明显增多,ELK-1、JNK和c-Fos的mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与模型组比较,左归降糖解郁方含药血清组和阳性药含药血清组大鼠海马神经元可见局部亮点明显减少,凋亡细胞数显著减少,ELK-1、JNK和c-Fos蛋白及mRNA表达均明显下调(P<0.05),且神经网络及树突连接情况得到明显改善。结论:左归降糖解郁方可以减低DD环境下海马神经元中Elk-1、JNK、c-fos表达而起到抗凋亡的效果。

糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元凋亡情况及潜在机制研究

目的研究糖尿病并发抑郁症(DD)大鼠海马神经元凋亡情况,探讨其可能的分子机制。方法采用高脂灌胃联合尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,随机分为糖尿病模型组和DD模型组,另取正常大鼠随机分为空白对照组和抑郁症模型组,抑郁症模型组和DD模型组继续给予28 d慢性不可预见性应激。造模结束后,采用Open-field实验和Morris水迷宫实验评价大鼠行为活动能力,HE染色观察大鼠海马病理改变,Western blot检测大鼠海马p-JNK、Bax、Bcl-2、Caspase8、Caspase3蛋白表达。结果 Open-field实验结果显示,各模型组大鼠自主活动能力显著下降,其中DD模型组大鼠较糖尿病模型组明显下降;Morris水迷宫实验结果显示,各模型组大鼠逃避潜伏期延长,其中DD模型组大鼠较糖尿病模型组明显延长;HE染色结果显示,DD模型组大鼠海马损伤最为严重;Western blot结果显示,各模型组大鼠较空白对照组p-JNK、Bax、Caspase8、Caspase3表达显著升高,Bcl-2表达显著降低,其中DD模型组差异更显著。结论基于糖尿病,DD引起海马神经元凋亡,其机制可能与细胞凋亡相关蛋白p-JNK、Bax、Bcl-2、Caspase8、Caspase3等异常表达相关。

4T1炎性乳腺癌细胞接种联合皮质酮注射诱导乳腺癌并发抑郁症小鼠模型的研究

目的研究4T1炎性乳腺癌细胞接种联合皮质酮注射所致BABL/c小鼠病理行为和核心标志物的变化。方法采用4T1炎性乳腺癌细胞接种的方法建立乳腺癌小鼠模型,并随机分为2组,乳腺癌组和乳腺癌皮质酮组;另将未接种乳腺癌细胞的小鼠也随机分为2组,正常对照组和抑郁症组。随后给予抑郁症组和乳腺癌皮质酮组21 d皮质酮注射(30 mg/kg)。实验结束后,采用糖水消耗实验、旷场实验、新奇摄食实验观察各组小鼠的抑郁样行为。小鼠断头处死后,测量各组小鼠乳腺肿瘤瘤重和瘤体积,采用ELISA法检测小鼠肿瘤标志物肿瘤抗原CA153、糖类抗原CA125、癌胚抗原(CEA)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)的含量。结果乳腺癌皮质酮组小鼠瘤重和瘤体积明显增大,血浆CA153、CA125和CEA水平显著升高,糖水偏嗜度明显降低,对环境的好奇探索欲望减弱,体内5-HT、DA、NE含量显著降低。结论乳腺癌小鼠在接受慢性皮质酮注射后,可表现出明显的抑郁样行为、神经递质和乳腺癌标志物以及肿瘤瘤体变化,可为乳腺癌并发抑郁症动物实验提供模型参考。

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症胎鼠海马神经元NR及mEPSC的影响

目的探讨左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁(diabetes mellitus with depression,DD)症状态下胎鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体(n-methyl-d-aspartic acid receptor,NR)和微小兴奋性突触后电流(miniature excitatory postsynaptic current,mEPSC)频率及幅度的干预作用。方法取胎鼠(16~18 d)的海马,进行分离纯化和培养,用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学染色法鉴定。随机把海马原代神经元分6组:空白组、模型组、空白血清组、MK-801组、二甲双胍+氟西汀组、左归降糖解郁方组。根据分组,于空白组加10%的培养液;其他5组加15 mmol/L的高糖和50μmol/L的皮质酮予以造模;造模后,空白血清组、二甲双胍+氟西汀组、左归降糖解郁方组中分别加10%的空白血清、二甲双胍+氟西汀含药血清、左归降糖解郁方含药血清,MK-801组中加10μmol/L的MK-801,同时干预18 h。蛋白NR2A、NR2B的表达运用高内涵细胞成像技术(high content analysis,HCA)检测;海马神经元细胞的mEPSC采用全细胞膜片钳技术来记录,并对比不同组间神经元细胞的mEPSC频率和电流幅度。结果经镜下观察及NSE鉴定,所培养的细胞是海马神经元细胞,阳性率在95%以上。经HCA检测,空白组细胞的胞体明显,形态完整,突触之间形成丰富的神经网络。与空白组比,模型组和空白血清组的海马神经元细胞出现萎缩、突触断裂或神经网络消失,蛋白NR2A、NR2B的荧光值增强(P<0.01);与空白血清组比,MK-801组、二甲双胍+氟西汀组、左归降糖解郁方组细胞突触间的连接恢复,蛋白NR2A、NR2B荧光值减弱(P<0.01或P<0.05)。膜片钳结果显示,对比空白组,模型组、空白血清组的mEPSC频率和幅度上升(P<0.01);与空白血清组比,MK-801组、二甲双胍+氟西汀组和左归降糖解郁方组的mEPSC频率和幅度下降(P<0.01)。结论左归降糖解郁方抗DD大鼠海马神经元细胞受损的保护作用机制,可能在于其能够调控DD状态下的海马神经元蛋白NR2A、NR2B的表达及突触可塑性功能。

百事乐加味方对卒中后抑郁大鼠海马神经元自噬蛋白的影响

目的观察百事乐加味方对卒中后抑郁(PSD)大鼠神经功能缺损评分、形态学改变及海马自噬蛋白m TOR、Beclin-1、LC-3Ⅱ表达的影响,探讨PSD神经元细胞自噬机制及中药防治作用。方法采用大脑中动脉栓塞+慢性不可预见温和应激+孤养法制作PSD模型,分组前进行行为学评分,随机分为假手术组、抑郁组、卒中组、PSD组、阳性药组、百事乐加味方组,各给药组给予相应药物,连续28 d。HE、Nissl染色观察大鼠海马形态;免疫组化检测PSD大鼠海马m TOR、Beclin-1、LC-3Ⅱ的表达。结果与假手术组比较,PSD组大鼠神经功能缺损评分明显升高,海马m TOR表达明显降低,Beclin-1、LC-3Ⅱ表达明显升高(P<0.01);与PSD组比较,百事乐加味方组大鼠功能缺损评分显著降低,海马组织病理形态明显改善,海马m TOR蛋白表达明显升高,Beclin-1、LC-3Ⅱ蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论百事乐加味方可有效改善PSD大鼠行为学、病理学表现,抑制神经细胞异常自噬可能是其抗PSD的重要机制之一。

左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁症环境下海马NVU结构蛋白的作用及机制研究

目的:从海马神经血管单元(neurovascular unit,NVU)结构蛋白探讨左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症(diabetes mellitus with depression,DD)的作用机制。方法:采用海马神经元、星形胶质细胞、脑微血管内皮细胞建立海马NVU体外共培养体系,采用葡萄糖联合皮质酮干预模拟DD环境,将实验分为正常组、模型组、空白对照组、阳性药含药组、左归降糖解郁方含药组,造模干预18 d后,细胞电阻仪检测跨内皮细胞电阻值,千分尺检测4 h渗漏试验的液面高度值,Western blot法检测胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、间隙连接蛋白(Connexin43,Cx43)与脑微血管内皮细胞(The brain microvascular endothelial cells,BMECs)结构蛋白occluding的表达变化。结果:与正常对照组比较,模型组跨内皮细胞电阻值显著降低(P<0.05),4 h渗漏试验液面差显著增加(P<0.01),NVU结构蛋白GFAP、CX43、occluding表达均显著下调(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,中药复方左归降糖解郁方与阳性药二甲双胍+氟西汀均能明显逆转上述现象(P<0.01,P<0.05)。结论:左归降糖解郁方对模拟DD环境下海马NVU损伤具有一定修复作用,其作用机制可能与调控海马NVU结构蛋白GFAP、CX43及occluding的表达有关。

优化的SD大鼠小胶质细胞原代培养、纯化及采用高内涵细胞成像分析技术进行的细胞鉴定

目的建立一种优化的大鼠小胶质细胞(microglia,MG)原代培养及纯化方法,采用高内涵细胞成像分析技术(high content analysis,HCA)对其进行细胞鉴定。方法取1 d的新生SD大鼠,解剖显微镜下分离大脑皮质,机械剪碎成1 mm^3组织块,加入质量分数为0. 125%的胰蛋白酶和质量分数为0. 1%的胶原酶(体积比为1∶1)消化10 min后进行体外培养,分别观察接种5、7 d后小胶质细胞基本形态结构;采用低速震摇+温和消化+差速贴壁的三联法纯化细胞,分别观察纯化1、3、6 d后小胶质细胞基本形态结构;采用HCA技术对小胶质细胞进行其特异性抗体(ionized calcium binding adapter molecule 1,Iba-1)免疫细胞化学染色鉴定。结果经优化法培养的小胶质细胞,数量多、纯度高、活性好,细胞胞体狭长,突起形状不规则,呈单极、双极、蜘蛛状或其它分枝状,且分别可见静息态与活化态的细胞,并呈现典型的小胶质细胞特征和良好的生长状态;经优化法培养的小胶质细胞,采用HCA进行Iba-1免疫细胞化学染色鉴定,MG纯度质量分数达98%以上。结论建立了一种小胶质细胞原代培养及纯化方法,同时采用HCA技术成功对其进行细胞鉴定,为后续小胶质细胞相关体外研究奠定了良好的实验基础。

非小细胞肺癌不同部位组织样本PD-L1表达水平比较研究

背景与目的程序性死亡配体1(programmed cell death ligand 1,PD-L1)作为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)免疫治疗患者分层标志物已进入临床病理常规检测。然而PD-L1表达在肺内和肺外不同转移部位的空间异质性是困扰临床检测的难题。本研究旨在探讨NSCLC不同部位组织样本的PD-L1表达评分的差异,从而有助于晚期肺癌患者的PD-L1检测策略的制定。方法回顾性收集PD-L1(22c3抗体,Dako)临床病理连续检测的131例肺外转移性NSCLC以及同期非配对肺内肿瘤972例进行对照分析,对比肺外与肺内肿瘤组织样本检测的PD-L1肿瘤阳性比例评分(tumor proportion score,TPS)差异。结果肺外转移性NSCLC的PD-L1阳性表达率(TPS≥1%)为61.83%,TPS评分显著高于同期肺内肿瘤(P=0.03)。不同部位组织样本的PD-L1表达评分具有显著差异(P=0.007)。肝脏和肾上腺转移瘤的PD-L1阳性率高,分别为85.71%和77.78%,其TPS评分均显著高于肺内肿瘤(P<0.05)。淋巴结、骨、脑、软组织和胸膜转移瘤的PD-L1表达率为40.00%-66.67%,TPS评分与肺内肿瘤无显著差异。组织学和样本类型分析显示,腺癌类型和手术切除的肺外样本PD-L1表达评分显著高于同类型肺内肿瘤。临床病理参数分析显示,PD-L1阳性表达和高表达均与患者男性、吸烟史以及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)野生型显著相关。结论肺外转移性NSCLC样本的PD-L1表达评分高于肺内肿瘤,且不同部位组织样本的PD-L1表达阳性率存在差异。肺外转移性肿瘤与肺内肿瘤的PD-L1检测差异可能与不同转移部位、组织学和样本类型相关。

基于TRP/KYN代谢通路探讨左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元保护作用

目的探讨左归降糖解郁方(ZGJTJYF)对糖尿病并发抑郁症(DD)大鼠海马神经元的保护作用及其机制。方法(i)体内实验中,取60只SPF级雄性SD大鼠,随机分为6组,每组10只:空白组、模型组、阳性药组(1.8 mg/kg氟西汀+0.18 g/kg二甲双胍)、高剂量ZGJTJYF组(ZGJTJYF-H,40.500 g/kg ZGJTJYF)、中剂量ZGJTJYF组(ZGJTJYF-M,20.250 g/kg ZGJTJYF)和低剂量ZGJTJYF组(ZGJTJYF-L,10.125 g/kg ZGJTJYF)。除空白组外,其余各组均予以高脂乳剂灌胃联合单次尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)及4周慢性不可预见性温和应激(CUMS)建立DD模型。所有给药组在CUMS造模期间分别经灌胃给予对应药物处理,空白组和模型组给予等量蒸馏水灌胃。处理4周后,通过检测大鼠的血糖、血清中糖化血红蛋白含量判断ZGJTJYF的降糖效果;通过开野实验和Morris水迷宫测试评价ZGJTJYF的抗抑郁作用;采用高效液相色谱联合电化学检测器(HPLC-ECD)检测大鼠海马中5-羟色胺(5-HT)水平;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠海马中色氨酸(TRP)、犬尿氨酸(KYN)及吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的含量变化;采用免疫组织化学染色法(IHC)检测大鼠海马中突触素(SYN)、突触后致密物质95(PSD-95)蛋白的表达水平;采用蛋白印迹法检测N-甲基-D-天冬氨酸受体(NR)2A和NR2B蛋白的表达水平。(ii)体外实验中,分别取5只SPF级SD孕鼠(E16–18),6只SPF级SD新生鼠用于原代海马神经元(Ne)、星形胶质细胞(As)和小胶质细胞(MG)提取,构建Ne-As-MG共培养体系,并将其分为6组:空白组(PBS)、模型组[150 mmol/L葡萄糖+200μmol/L皮质酮(G&P)+PBS]、空白血清组(G&P+10%空白血清)、阳性药组(G&P+10%阳性药含药血清)、ZGJTJYF组(G&P+10%ZGJTJYF含药血清)和1-甲基-D-色氨酸组(1-MT,IDO阻断剂)(G&P+1-MT),给予对应处理18 h后,采用免疫荧光法检测神经元突触相关蛋白SYN、PSD-95、NR2A和NR2B表达水平;采用ELISA法检测炎症因子白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α及TRP/KYN代谢通路中相关因子[TRP、KYN、犬尿喹啉酸(KYNA)和喹啉酸(QUIN)]水平。结果(i)体内研究结果表明,ZGJTJYF-M和ZGJTJYF-L可显著改善DD大鼠的血糖升高状态(P<0.01,P<0.05),ZGJTJYF-H、ZGJTJYF-M和ZGJTJYF-L均显著增加其自主活动能力和学习记忆能力(P<0.01,P<0.01,P<0.05);同时,ZGJTJYF-M可有效升高大鼠海马中5-HT和TRP水平(P<0.01),降低KYN和IDO水平(P<0.01),并能显著提高海马神经元中SYN和PSD-95的表达水平(P<0.01),抑制海马内NR2A和NR2B异常活化(P<0.01)。(ii)体外研究结果表明,ZGJTJYF含药血清可显著提高海马神经元中SYN和PSD-95的表达水平(P<0.01);有效降低IL-1β(P<0.01)、IL-6(P<0.05)、TNF-α(P<0.01)、IDO(P<0.05)、KYN(P<0.05)和QUIN的水平(P<0.01),升高TRP和KYNA的水平(P<0.01);并对DD环境下神经元中的NR2A和NR2B异常活化具有显著的抑制作用(P<0.05)。结论中药复方ZGJTJYF可通过抑制大鼠海马中IDO表达,调节TRP/KYN代谢途径,有效改善海马中的5-HT不足,对DD导致的海马神经元损伤具有良好的保护作用,是防治DD的有效潜在治疗药物。

左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁症环境下模型大鼠海马神经元凋亡相关蛋白的影响

目的探讨左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁症(DD)环境下海马神经元凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-8的调控作用。方法采用受孕18 d SD大鼠胎鼠进行海马神经元原代培养,葡萄糖联合皮质酮干预构建DD模拟环境。将培养的海马神经元随机分为正常组、空白血清组、模型组、阳性药(二甲双胍+氟西汀)药物血清组和待测药(左归降糖解郁方)药物血清组,正常组和模型组给予等量培养液,其余组给予相应体积分数10%药物血清或空白血清,造模干预18 h后,Hoechst荧光染色检测海马神经元凋亡;高内涵分析技术检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Caspase-8的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠海马神经元树突断裂或减少,神经网络连接降低,细胞存在明显的浓染、破碎、光点分布不均现象,Bcl-2蛋白表达显著下降(P<0.05),Bax和Caspase-8蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,阳性药药物血清组和待测药药物血清组大鼠海马神经元网络连接显著恢复,Hoechst荧光染色可见细胞核明显均匀化,局部亮点明显减少,Bcl-2蛋白表达水平显著上调(P<0.05,P<0.01),Bax和Caspase-8蛋白表达水平显著下调(P<0.05,P<0.01)。结论左归降糖解郁方对模型大鼠海马神经元凋亡的保护作用可能与调控海马神经元Bcl-2,Bax和Caspase-8的表达有关。

混合设计新序列在药物可互换性中的探究

目的提出一种混合设计新序列(TTRR、RRTT、RTTR、TRRT)来探究其在药物可互换性方面的适用情况。方法基于Chow等提出的药物可交换标准(SCDI)为评价标准,考虑药物个体间变异,探索新序列在药物可互换性中的适用情况,并和常用序列(TRTR、RTRT)进行比较。结果通过计算机对不同情境的模拟,发现新序列大体上呈现一致趋势并且在药物可互换关键部分σWR、σD等变动时,本研究提出的新序列表现出比常用序列更加敏感的特点。结论虽然新序列比常用序列在药物可互换中对于变异变动时更加敏感,但多出的两个序贯使得其在样本量方面表现欠佳。