Primary culture and identification about brain microvascular endothelial cells of rabbits

Objective:To establish a simple and efficient culture method of primary rabbit brain microvascular endothelial cells,provide important carriers and tool cells for the research of related cerebrovascular diseases.Methods:The cerebral cortexes of rabbits were collected aseptic and inoculated after cutting,passing through cell sieve,bovine serum albumin density gradient centrifugation,typeⅡcollagenase digestion,finally inoculated and cultured.The cultured cells were identified by cell morphological observation and angiogenesis experiment.Results:Under the inverted microscope,the cells were short fusiform or polygonal,and grew in clusters and adhere to the wall.After the cells were densely fused,they would be in a typical monolayer flat,“pebbled"mosaic arrangement.Tube formation test had the ability to form tubes structure.Conclusion:This method can successfully separate and cultivate primary rabbit brain microvascular endothelial cells.

原代大鼠骨髓间充质干细胞的改良培养及鉴定

目的:改良原代大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离培养方法。方法:基于“干细胞生态位”原理,采用全骨髓贴壁法结合骨片消化法分离培养原代大鼠BMSCs。通过细胞形态学观察、细胞表面标志物CD分子检测以及定向诱导分化实验对目的细胞进行鉴定。结果:所培养的细胞形态为细长梭形,其融合后呈典型的“涡旋状”紧密排列,且细胞增殖迅速,原代培养5~6 d即可达到融合状态,按1∶3比例连续传代到第8代时,细胞形态仍基本保持不变;第4代细胞的间充质干细胞表面标志物CD90、CD29、CD73以及造血干细胞表面标志物CD45、CD34、CD11b/c的阳性表达率分别为89.0%、98.3%、64.2%、3.5%、5.6%、24.7%;定向诱导分化实验表明目的细胞具有良好的成脂、成骨分化潜能。结论:本研究基于“干细胞生态位”原理,成功建立了一种高效稳定的原代大鼠BMSCs分离培养方法。

改良原代大鼠脑微血管内皮细胞的培养方法及鉴定

目的改良原代大鼠脑微血管内皮细胞分离培养方法。方法选取4~6周龄SD大鼠6只,经开颅取脑、漂洗剪碎、过筛、牛血清白蛋白密度梯度离心、Ⅱ型胶原酶及胶原酶-分散酶两次连续酶消化后进行原代培养。通过细胞形态学观察和第Ⅷ因子免疫细胞化学染色鉴定所培养的目的细胞。结果体外培养12~24 h后,细胞以贴壁的脑微血管段为中心,放射状向外周移行,并逐渐扩大成团簇状;细胞融合后则呈典型的单层、扁平、"铺路石样"镶嵌式排列。第Ⅷ因子免疫细胞化学染色检测,胞质呈棕红色,表达为阳性,阳性细胞率达99%以上。结论改良方法能够成功高效分离培养出原代大鼠脑微血管内皮细胞。

原代大鼠肾小球微血管内皮细胞的培养与鉴定

本研究旨在建立一种简便高效的原代大鼠肾小球微血管内皮细胞体外培养方法。摘取出生7~10天Sprague-Dawley大鼠的双侧肾脏,分离出肾皮质;经剪碎,连续过200目、300目筛网获得肾小球;Ⅳ型胶原酶消化15~20 min后,收集肾微血管球进行接种培养。通过细胞形态学观察、第Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色鉴定所培养的细胞。结果显示:肾微血管球呈不规则球形,无包囊,毛细血管袢结构清晰;静置培养3天后,有短梭形细胞从其周围爬出,并逐渐形成细胞集落,呈"岛屿状"分布;4~5天后细胞集落相互融合,6天后铺满皿底,呈典型的单层、铺路石样、镶嵌式排列。第Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色检测结果显示,胞质淡染成棕红色,第Ⅷ因子相关抗原表达为阳性,阳性率接近100%。以上结果提示,本研究将连续过筛法和胶原酶消化法结合,成功建立了简便高效的原代大鼠肾小球微血管内皮细胞体外培养方法,从而为开展糖尿病肾病的发生和发展机理研究提供了重要的工具细胞。

以海载道论《黄帝内经》“肠胃为海”

以发生学原理为指导,遵循中医"参应天地自然之象探索人之生命"的认知规律,结合中国传统海洋文化及儒道文化"水""空""变""化""和"等核心思想理念,运用取象比类思维方法,以海载道,将"海纳百川""海生万物""海泽万物""海有潮汐""海能自和"等天地自然之海象,类比于人之肠胃脏腑,揭示了《黄帝内经》"肠胃"具有纳物、化物、泽物的生理功能以及时空节律和维稳自和的生理特性。文章旨在补充和完善《黄帝内经》"肠胃为海"论的丰富内涵,进一步提高中医对人生命的认知理念,包括生命的本源、生命的中心、生命的本质、生命的调控以及生命的价值等。籍此针砭时弊,展望未来,倡生命繁荣与中医发展之屯道,贬任情返道之医风。