农会与乡村“共生”社区建设--基于花莲寿丰乡农会的实地研究

以台湾地区的农民合作组织--农会为例,以帕特南社会资本理论为分析框架,阐述农会如何建立社团,培育社会资本,以及如何通过社团活动和集体行动,推动社会资本生产,引导村民参与乡村发展,构建“共生”社区。与内地农民专业合作社专注经济功能不同,台湾地区农会强调经济与社会功能的有机融合,在培养村民互助合作、公共精神的基础上,激发乡村内生发展动力,实现经济与社会的可持续发展。农会参与乡村发展的案例印证了全球范围内从“经济发展”到“人类发展”的理念转型。我国以人民为中心的新发展观正是“人类发展”理念的中国实践。

脐带间充质干细胞共培养对中性粒细胞存活和免疫功能的影响

目的本文旨在通过模拟中性粒细胞在骨髓内的发育和生存环境,在体外建立一种延长中性粒细胞寿命和维持其生物学活性的方法。方法建立间充质干细胞和人外周血中性粒细胞共培养体系,分别在共培养后的0 d、1 d、2 d、3 d收集中性粒细胞细胞,采用流式细胞术等技术检测其存活率,同时通过对中性粒细胞的趋化、吞噬、活性氧(reactive oxygen species,ROS)释放等功能进行分析,来明确共培养体系对中性粒细胞体外寿命和功能的影响;采用Western blot方法分析中性粒细胞中与细胞存活和凋亡相关的基因的表达情况。结果间充质干细胞共培养可以促进中性粒细胞中Mcl-1基因的持续表达,并抑制Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3的剪切活化,从而影响细胞内源性和外源性凋亡途径,与对照相比,显著延长了中性粒细胞的寿命(P<0.01);共培养体系培养3 d后,中性粒细胞仍能保持较好的趋化运动能力、吞噬能力和ROS释放等功能,与对照组相比,两者之间有显著性差异(P<0.01)。结论体外通过与间充质干细胞共培养,可以显著延长中性粒细胞寿命和维持其生物学功能,这为我们今后进一步优化中性粒细胞体外保存方法提供了理论和实验基础,同时也为提高粒细胞输注的有效性提供了新的思路。

Allogeneic donor-derived CD19 CAR-T therapy of relapsed B-cell acute lymphoblastic leukemia after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation

Objective To investigate the long term efficacy and side effects of a donor-derived CD19 chimeric antigen receptor (CAR) T-cell (HI19α-4-1BB-ζCAR-T) therapy in the treatment of patients with relapsed B-cell acute lymphoblastic leukemia (B-ALL) after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (allo-HSCT)

异基因造血干细胞移植治疗骨髓增生异常综合征伴原始细胞增多282例生存分析及WHO 2022分类不同亚型的生存比较

目的评估异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗骨髓增生异常综合征伴原始细胞增多(MDS-EB)的疗效和预后影响因素,比较WHO2022分类不同亚型患者的预后。方法纳入2006年10月至2022年12月在中国医学科学院血液病医院接受allo-HSCT的282例MDS-EB患者,按照WHO 2022诊断标准重新分类为骨髓增生异常肿瘤伴原始细胞增多1型/2型(MDS-IB1/IB2)(222例)、MDS伴纤维化(MDS-f)(41例)和伴双等位基因TP53突变的MDS(MDS-biTP53)(19例)三组,对其临床资料进行回顾性分析。结果①282例患者中位年龄46(15~66)岁,男191例,女91例,MDS-EB1118例(42%),MDS-EB2164例(58%)。②282例MDS-EB患者中256例(90.8%)移植后获得造血重建,原发植入功能不良11例(3.9%),继发植入功能不良15例(5.3%)。移植后100 d急性移植物抗宿主病(GVHD)累积发生率为(42.6±3.0)%,Ⅱ~Ⅳ度急性GVHD累积发生率为(33.0±2.8)%;移植后1年慢性GVHD累积发生率为(31.0±2.9)%。移植后128例(45.4%)患者发生巨细胞病毒(CMV)感染,63例(22.3%)患者发生菌血症,35例(12.4%)患者发生肺部真菌感染,17例(6.0%)患者发生EB病毒感染。③移植后中位随访时间为22.1(19.2~24.7)个月,3年总生存(OS)率、无病生存(DFS)率分别为71.9%(95%CI 65.7%~78.6%)、63.6%(95%CI 57.2%~70.7%),3年非复发死亡率(NRM)为17.9%(95%CI 13.9%~22.9%),3年累积复发率(CIR)为9.8%(95%CI 6.7%~13.7%)。影响移植后OS的独立危险因素包括单体核型(MK)(P=0.004,HR=3.26,95%CI 1.46~7.29)、造血干细胞移植合并症指数(HCI-CI)≥3分(P<0.001,HR=2.86,95%CI 1.72~4.75)、发生Ⅱ~Ⅳ度肠道急性GVHD(P<0.001,HR=5.94,95%CI 3.50~10.10)。④MDS-IB1/IB2组移植后3年OS率、DFS率均优于MDS-biTP53组[OS:72.0%(95%CI 63.4%~80.7%)对46.4%(95%CI 26.9%~80.1%),P=0.020;DFS:67.4%(95%CI 60.3%~75.3%)对39.7%(95%CI 22.3%~70.8%),P=0.015],3年CIR低于MDS-biTP53组[7.3%(95%CI 4.3%~11.4%)对26.9%(95%CI 9.2%~48.5%),P=0.004]。MDS-IB1/IB2组、MDS-f组、MDS-biTP53组移植后3年NRM分别为16.7%(95%CI 12.1%~22.1%)、20.5%(95%CI 9.4%~34.6%)、26.3%(95%CI 9.1%~47.5%)(P=0.690)。结论allo-HSCT是MDS-EB的有效治疗手段,单体核型、HCI-CI、Ⅱ~Ⅳ度肠道急性GVHD是影响患者OS的独立危险因素。WHO 2022分类有助于区分不同亚组患者allo-HSCT后疗效,allo-HSCT能够改善MDS-f患者的不良预后,但MDS-biTP53患者移植后复发风险较高。

英夫利西单克隆抗体预防小鼠自身免疫性肝炎的作用机制

目的观察英夫利西单克隆抗体对自身免疫性肝炎(AIH)的预防效果并探讨其作用机制。方法经鼠尾静脉注射刀豆蛋白A(Con-A)建立小鼠AIH模型。将40只小鼠随机分为预防组和对照组,每组20只。预防组Con-A注射前1 h经鼠尾静脉注射途径给予20 mg/kg英夫利西单克隆抗体,对照组注射200μL PBS。分别于Con-A或PBS注射后3、8、12和24 h取血清,通过比色法检测血清AST、ALT水平。通过ELISA法检测血清细胞因子IL-6、IL-1β、IFN-γ、IL-4、IL-17A、IL-10和趋化因子配体10(CXCL10)水平。于Con-A或PBS注射后12 h取肝组织标本进行H-E染色,通过流式细胞术检测浸润至肝脏的淋巴细胞,通过实时荧光定量PCR检测T盒子转录因子(TBX21)、GATA结合蛋白3(GATA3)、RAR相关孤儿受体C(RORC)和CXCL10基因mRNA的表达水平。通过蛋白质印迹法检测肝脏CXCL10表达水平。统计学方法采用单因素方差分析和配对t检验。结果预防组Con-A注射后8、12和24 h的血清ALT、AST、IL-1β、IFN-γ水平均低于对照组[(545.8±190.3)U/L比(865.8±237.7)U/L、(947.6±267.9)U/L比(1448.0±403.5)U/L和(508.6±131.1)U/L比(976.6±207.6)U/L;(620.7±132.0)U/L比(952.9±106.8)U/L、(801.6±212.0)U/L比(1424.8±236.0)U/L和(632.1±117.8)U/L比(1008.3±187.5)U/L;(31.38±10.12)ng/L比(48.12±11.53)ng/L、(39.34±11.40)ng/L比(60.00±14.17)ng/L和(29.49±8.22)ng/L比(46.89±5.50)ng/L;(432.93±66.82)ng/L比(674.66±97.88)ng/L、(655.09±169.17)ng/L比(937.90±166.36)ng/L和(263.40±54.97)ng/L比(410.74±86.64)ng/L],差异均有统计学意义(t=2.350、2.308、4.263,4.374、4.860、3.806,2.440、2.541、3.939,4.560、2.660、3.210;P均<0.05)。预防组Con-A注射后3、8、12和24 h的血清IL-6水平均低于对照组[(1075.79±303.77)ng/L比(1914.48±317.80)ng/L、(1945.97±271.85)ng/L比(2100.80±378.42)ng/L、(1578.60±504.54)ng/L比(2525.40±406.55)ng/L和(1020.64±280.03)ng/L比(1582.00±311.96)ng/L],差异均有统计学意义(t=4.266、2.903、3.267、2.994,P均<0.05)。预防组Con-A注射后3 h的血清CXCL10水平和肝脏组织CXCL10 mRNA相对表达量,以及Con-A注射后3和8 h肝脏组织中T-bet mRNA相对表达量均低于对照组[(1755.8±148.1)ng/L比(2102.0±334.0)ng/L,7.20±3.00比27.60±1.90,6.94±2.29比15.20±3.48和9.38±3.48比18.17±4.48],差异均有统计学意义(t=2.356、2.623、4.427、3.673,P均<0.05)。预防组与对照组Con-A注射后3、8、12和24 h的血清IL-4、IL-17A和IL-10水平,以及GATA3和RORC mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论英夫利西单克隆抗体在小鼠AIH模型中具有一定预防效果,其可能通过拮抗TNF-α减少肝脏CXCL10表达,使Th1和CD8+T淋巴细胞向肝脏浸润减少,同时通过减少炎性因子对T淋巴细胞的活化来降低T淋巴细胞对肝细胞的损伤而发挥预防作用。

异基因造血干细胞移植治疗骨髓增生异常综合征的新进展

骨髓增生异常综合征(MDS)是起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病,以病态造血,向急性髓细胞白血病(AML)转化风险高为主要表现。异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是目前唯一可治愈MDS的手段,但其疗效受到患者及治疗相关因素的影响。目前,学者围绕基因突变对MDS患者的预后价值、移植前是否桥接去甲基化药物(HMA)展开了深入研究。笔者拟通过对allo-HSCT治疗MDS的适应证与移植时机、影响MDS患者allo-HSCT疗效的因素、allo-HSCT后复发的预测和治疗等方面的研究新进展进行阐述,旨在为改善MDS患者allo-HSCT疗效提供新思路。

供者CD19 CAR-T细胞治疗急性B淋巴细胞白血病移植后复发九例临床观察

目的观察供者抗CD19嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)(HI19α-4-1BB-ζCAR-T)治疗急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后复发患者的疗效及安全性。方法对2017年7月至2020年5月期间9例allo-HSCT后复发B-ALL患者应用供者抗CD19 CAR-T细胞治疗,FCA方案(氟达拉滨+环磷酰胺+阿糖胞苷)预处理后回输供者CD3+T淋巴细胞,其中CAR-T细胞中位数1.79(0.86~3.53)×106/kg,观察疗效和不良反应。结果①输注CAR-T细胞后28~42 d,9例患者均获得MRD阴性的完全缓解。②所有患者发生细胞因子释放综合征(CRS),其中3级2例、2级4例、1级3例;4例患者出现免疫效应细胞相关的神经毒性(ICANS),2级1例、1级3例;1例患者发生急性Ⅳ度移植物抗宿主病(GVHD),上述不良反应经治疗均控制。③4例患者再次复发,中位复发时间为CAR-T细胞治疗后8.6(4.6~19.3)个月,2例化疗后病情进展死亡,1例接受二次移植14个月后复发死亡,1例接受CD22 CAR-T细胞治疗后完全缓解,现6例患者无病存活,植入分析为完全供者嵌合体,中位无白血病生存(LFS)期18.1个月,预期1年、2年LFS率分别为63.5%、50.8%。④中位随访25.1(6.9~36.7)个月,预期2年、2.5年总生存(OS)率分别为87.5%、52.5%。结论供者抗CD19 CAR-T细胞治疗allo-HSCT后复发的B-ALL的缓解率高,不良反应可耐受,半数患者可无病生存2年以上,长期疗效有待进一步观察。

AGM-S3基质细胞共培养对中性粒细胞自发凋亡及其免疫功能的影响

AGM-S3细胞是从小鼠主动脉–性腺–中肾区(aorta-gonad-mesonephros, AGM)分离的细胞系。该文通过建立体外AGM-S3基质细胞共培养体系,以揭示AGM-S3细胞对终末分化中性粒细胞存活和功能的影响。结果表明, AGM-S3细胞共培养显著延迟了中性粒细胞的死亡(半衰期从20 h延长到48 h),同时维持中性粒细胞正常的趋化、吞噬和活性氧释放功能。进一步研究表明,AGM-S3细胞可能通过分泌细胞因子(如IL-6、MCP-1和IL-1α等)激活中性粒细胞促存活信号通路(比如Akt),促进Mcl-1和Bcl-xl持续表达,且抑制Caspase-3分子活化。在腹膜炎小鼠模型中,将体外共培养24 h的中性粒细胞从尾静脉输注到小鼠体内,其可以正常募集到炎症部位。研究结论提示,AGM-S3细胞可以维持终末分化中性粒细胞的存活和功能,而且这些中性粒细胞在移植到小鼠体内后具有正常的免疫活性。该研究将为今后针对粒缺和难治性感染病人的输注,以及中性粒细胞功能修饰等研究提供新的策略和实验依据。

TNF-α小分子抑制剂C87的纳米药物制备及其体内外活性研究

该研究首先制备并表征包载TNF-α小分子抑制剂C87的纳米粒子,进而评价其在L929细胞和小鼠自身免疫性肝损伤模型中抑制TNF-α细胞毒性的作用。采用纳米沉淀法制备载C87的纳米粒子(C87 NP),并对其理化性质及体外释放行为进行表征;在L929细胞中用MTT法分析C87 NP拮抗TNF-α细胞毒作用的效果;经尾静脉注射刀豆蛋白A(ConA)诱导小鼠发生自身免疫性肝损伤,采用C87 NP预给药方式,防治小鼠自身免疫性肝损伤;使用LEGENDplex^(TM)分析小鼠血清中13种细胞因子的表达水平;流式细胞术分析肝和脾中T细胞及亚群、NK细胞等的分布、比例和数量。制备出的C87 NP具有较高(34.4%)的载药量,且稳定性好,其包封率为48.1%,C87 NP平均粒径为82.57 nm,多分散系数为0.115,呈电中性,透射电镜结果显示其为球形结构;该纳米粒子可在体外持续缓慢释放C87,持续时间不少于8 h;C87 NP可以在体外抑制TNF-α对L929细胞的杀伤能力(IC_(50)=9.13 μmol/L),并呈浓度依赖性;动物实验结果显示,C87 NP治疗组小鼠的存活率为66.7%,进一步的生化和病理分析结果表明,ConA小鼠尾静脉给药12 h后,C87 NP预防性给药能显著降低血清中ALT、AST与部分细胞因子的水平(P<0.01),减轻肝损伤,减少CD4^(+)T、CD8^(+)T、NK细胞等对肝脾的浸润(P<0.01),提高脾脏Treg细胞比例(P<0.05)。该研究成功制备出纳米药物C87 NP,且C87 NP在体内外具有良好的抑制TNF-α细胞毒性的作用,这为小分子药物C87今后在临床上的应用奠定了基础。