瓜蒌皮注射液及其中间体中17种氨基酸含量测定及其变化规律研究

目的测定瓜蒌皮注射液及其中间体中天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、瓜氨酸、精氨酸、丙氨酸、γ-氨基丁酸、酪氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、鸟氨酸、亮氨酸、赖氨酸、脯氨酸的含量,并分析其变化规律。方法OPA-FMOC在线衍生化分析采用Waters XBridge C_(18)色谱柱(4.6 mm×100 mm,3.5μm);流动相磷酸盐缓冲液-[甲醇-乙腈-水(45∶45∶10)],梯度洗脱;体积流量1 mL/min;柱温45℃;检测波长262、338 nm。主成分分析、热图分析对10道工序相应中间体的6批样品进行化学模式识别。结果17种氨基酸在各自范围内线性关系良好(R^(2)>0.9980),平均加样回收率83.4%~119.5%,RSD 0.91%~7.94%。相同工序不同批次样品较聚集,不同工序相应中间体聚为3组。醇沉和阳离子交换柱对氨基酸组成影响最大。结论本实验可为瓜蒌皮注射液质量控制的关键因素提供重要参考,以保证终产品的稳定性和均一性。

基于HPLC-ICP-MS的海螵蛸中不同砷形态含量及其转移率研究

建立了高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP-MS)测定海螵蛸药材中多种砷形态的分析方法,并研究了海螵蛸药材煎煮后砷及砷形态的转移率。样品采用0.02 mol/L乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)溶液超声提取60 min,以Dionex IonPac As7阴离子交换柱为色谱柱,2 mmol/L和100 mmol/L碳酸铵溶液为流动相进行梯度洗脱。结果显示,27批海螵蛸药材中均检出砷甜菜碱(As B)和砷胆碱(As C),其中26批检出二甲基砷(DMA),10批检出一甲基砷(MMA),1批检出微量亚砷酸(AsⅢ),并发现3个未知砷形态;海螵蛸药材水煎煮后砷及砷形态的平均转移率均大于50%,且存在个体差异。该方法准确度高,专属性好,明确了海螵蛸药材中砷形态的分布规律,并揭示了海螵蛸药材在煎煮过程中砷及砷形态的转移规律,可为海螵蛸药材的安全性评价奠定基础。

急支糖浆HPLC特征图谱建立及7种成分测定

目的建立急支糖浆HPLC特征图谱,并测定原儿茶酸、原儿茶醛、绿原酸、柚皮苷、新橙皮苷、甘草酸铵、白花前胡甲素的含量。方法该药物70%甲醇提取液的分析采用Waters Xbridge C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-2%冰乙酸,梯度洗脱;柱温25℃;检测波长254、280、325 nm。结果11批样品特征图谱中有11个共有峰。7种成分在各自范围内线性关系良好(R^(2)≥0.9995),平均加样回收率96.2%~100.4%,RSD 1.3%~2.7%。结论该方法简便准确,重复性好,可用于急支糖浆的质量控制。

液相色谱-串联质谱法同时测定三七中508种农药残留

采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)建立了可在20min内快速测定三七中508种农药残留的方法。样品经改良的QuEChERS方法提取,分散固相萃取法(d-SPE)净化后,在多反应监测(MRM)模式下进行LC-MS/MS分析,内标法定量。在优化实验条件下,508种农药均在0.005~0.4mg/L范围内线性关系良好,方法检出限(LOD)为0.005~0.1mg/kg;在100μg/kg加标水平下,除8种农药外,其余500种农药的回收率均在50.2%~117%之间,且相对标准偏差(RSD)均不大于15%;其中有468种农药的回收率为70%~120%。该方法样品前处理简单快速,灵敏度、准确度和精密度均符合农药多残留检测技术的要求,适用于三七中508种农药残留的快速筛查。

超高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定保健食品中30种非法添加壮阳类化合物

建立了超高效液相色谱-三重四极杆质谱测定保健食品中30种壮阳类化合物的方法。采用Waters CORTECS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,2.7μm),以0.1%(体积分数)甲酸水溶液-含0.1%(体积分数)甲酸的乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,在电喷雾离子化正离子模式下,以多反应监测模式(MRM)检测。30种化合物在10~200μg/L范围内均呈良好的线性关系,相关系数均大于0.99;在0.1、0.2、1.0 mg/kg加标水平下的平均加标回收率为62.8%~135.2%,相对标准偏差均不大于14%(n=6);检出限为0.05 mg/kg,定量下限为0.1 mg/kg。该方法定性定量准确,操作简便,可为国家标准的建立提供参考。

血清发育内皮细胞基因-1、组织激肽释放酶结合蛋白对脓毒症患者病情严重程度及预后评估研究

目的探讨血清发育内皮细胞基因-1(Del-1)、组织激肽释放酶结合蛋白(KS)对脓毒症患者病情严重程度及预后的评估价值。方法选取2017年5月至2019年5月东台市人民医院重症医学科收治的120例脓毒症患者为研究对象,根据病情严重程度分为脓毒症组(n=77)和脓毒症休克组(n=43)。另选健康体检者60例为健康组。比较各组血清Del-1、KS差异。采用Pearson相关法分析血清Del-1、KS与序贯器官衰竭评分(SOFA)、急性生理与慢性健康评分(APACHEⅡ)的相关性;应用logistic回归分析脓毒症患者28 d死亡的危险因素;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析Del-1、KS对脓毒症患者28 d死亡的预测价值。结果脓毒症休克组及脓毒症组患者的血清Del-1水平均高于健康组,且脓毒症休克组高于脓毒症组患者;脓毒症休克组及脓毒症组患者血清KS水平均低于健康组,且脓毒症休克组低于脓毒症组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡组患者的血清Del-1水平高于存活组,KS水平低于存活组,差异有统计学意义(P<0.05)。脓毒症患者血清Del-1与SOFA评分、APACHEⅡ评分呈正相关,血清KS与SOFA评分、APACHEⅡ评分呈负相关。ROC曲线显示,血清Del-1及KS联合检测预测脓毒症患者死亡的曲线下面积、敏感度和特异度分别为0.912、0.909和0.771。结论脓毒症患者的血清Del-1、KS是评估脓毒症病情严重程度及不良预后的重要指标,两项联合检测有助于监测、评估脓毒症患者的病情变化及预后,对及时治疗脓毒症患者有指导意义。

干旱胁迫对刺槐品种抗氧化酶、光合特性及叶绿体超微结构的影响

为阐明刺槐无性系的抗旱机制,以盆栽的2年生刺槐新品种‘多彩青山’和‘紫艳青山’为试材,研究了不同土壤水分条件下(对照,田间持水量的70±5%;中度干旱胁迫处理,田间持水量的50±5%;重度干旱胁迫处理,田间持水量的30±5%)刺槐的形态指标、抗氧化酶活性、光合特性和叶绿体超微结构的变化。结果表明:干旱胁迫下‘多彩青山’和‘紫艳青山’的株高、地径、叶面积、地上部和地下部干重均比对照减小;叶片超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)均呈先上升后下降的趋势;丙二醛MDA含量随干旱胁迫程度的增加呈现逐渐上升的趋势。净光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)和气孔限制值(Ls)均比对照显著减少,胞间CO2浓度(Ci)显著增加,且重度干旱胁迫下变化趋势均比中度干旱胁迫明显,‘紫艳青山’的变化趋势均比‘多彩青山’明显。两个品种叶片叶绿体超微结构均受到不同程度的损伤,‘多彩青山’的叶绿体结构受损伤程度比‘紫艳青山’的轻。因此,干旱胁迫对‘多彩青山’和‘紫艳青山’的生长有显著抑制,抗氧化酶活性的增加是其重要的适应机制。而‘多彩青山’能够比‘紫艳青山’更好地通过提高抗氧化系统的酶活性,维持叶绿体中类囊体结构的稳定性,有着较强的抗旱性。

MSCT与超声联合S-AMY、LPS检测对重症急性胰腺炎的诊断价值研究

目的分析MSCT与超声联合S-AMY、LPS检测对重症急性胰腺炎的诊断价值。方法选取本院2017年9月至2019年9月收治的MAP患者45例,SAP患者57例,另选取同期在本院进行体检的健康人群55例。对患者所得超声、MSCT图像,不同人群血清中S-AMY、LPS表达水平进行分析,并计算MSCT与超声联合S-AMY、LPS检测对SAP的诊断灵敏性、特异性、准确性。结果S-AMY、LPS在不同人群中表达水平存在差异,健康组血清中S-AMY、LPS表达水平明显低于MAP患者、SAP患者,其中SAP最高(P<0.05)。MSCT对SAP的诊断灵敏性、特异性、准确性分别为80.70%、77.19%、78.94%;超声分别为78.94%、75.43%、75.43%;S-AMY为分别85.96%、82.45%、80.70%;LPS分别为87.77%、85.96%、82.45%,四者单独检查两两之间比较差异无统计学意义(P>0.05),联合检查为分别98.24%、96.49%、100.00%,明显高于四者单独检查(P<0.05)。结论MSCT与超声联合S-AMY、LPS检测对SAP具有较高的诊断价值,可有效提高SAP检出率,有助于临床对患者病情进行准确全面评估。

苏合香质量标准的研究

目的研究苏合香质量标准。方法GC-MS法分析成分组成,TLC法定性鉴别肉桂酸肉桂酯,建立18批样品特征图谱,GC法测定肉桂酸-3-苯丙酯含量,《中国药典》方法测定酸值、皂化值、总肉桂酸含量。结果共鉴定出18种成分,其中以肉桂酸肉桂酯、肉桂酸-3-苯丙酯为主。TLC斑点清晰,重复性好。18批样品特征图谱中有8个特征峰。肉桂酸-3-苯丙酯在0.4~10 mg/mL范围内呈良好的线性关系(r=0.99995),平均加样回收率为102.1%,RSD为5.4%。结论该方法专属性强,准确可靠,可用于苏合香的质量控制。

痰热清注射液特征图谱建立及4种成分测定

目的 建立痰热清注射液(黄芩、金银花、连翘等)特征图谱,并测定野黄芩苷、黄芩苷、千层纸素-7-O-葡萄糖醛酸苷、白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷含量。方法 该药物的分析采用Diamonsil Plus C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脱;体积流量0.8 mL/min;柱温25℃;检测波长280 nm。以黄芩苷为内标,建立其他3种成分的相对校正因子,一测多评法计算其含量。结果 33批样品特征图谱中有12个共有峰,相似度均大于0.97。4种成分在各自范围内线性关系良好(r=1.000 0),平均加样回收率96.2%~102.4%,RSD 0.7%~1.8%。一测多评法所得结果(千层纸素-7-O-葡萄糖醛酸苷、白杨素-7-O-葡萄糖醛酸苷含量)与外标法接近。结论 该方法稳定可靠,可用于痰热清注射液的质量控制。

中药中农药残留防控的现状与建议

合理控制农药残留是中药产业的一项重要内容。经过多年努力,我国中药中农药残留的防控取得了一定的成效,但仍存在源头控制薄弱、技术人员缺乏、标准体系不完善等问题。本文对当前中药中农药残留的监测情况、防控水平、面临的困难和挑战等方面进行了系统的概述和剖析,为中药中农药残留科学合理的控制提出了切实有效的建议。

基于特征多肽的地龙鉴别与伪品保宁腔蚓检查方法的建立及应用

基于种属特异性多肽,采用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UHPLC-MS/MS)建立了地龙鉴别和伪品保宁腔蚓的检查方法,并应用于地龙及两种成方制剂的检测分析。采用CORTECS T3 C18色谱柱分离,以0.1%甲酸溶液-乙腈为流动相,梯度洗脱,采用ESI+离子源、多重反应监测(MRM)模式,同时监测3组离子对。结果表明,本方法具有良好的专属性,可以鉴定出广地龙、沪地龙、保宁腔蚓,鉴定结果与DNA条形码分子鉴定结果一致。掺伪检查研究表明,保宁腔蚓多肽M的检出限为1μg·g^(-1),广地龙中掺入1%保宁腔蚓时即可检出,方法灵敏度高。54批市售地龙样品中广地龙占比35%、沪地龙35%、保宁腔蚓15%,另外15%未检出任何目标离子,经DNA条形码分子鉴定发现这些样品主要来源为远盲蚓属,部分样品性状与沪地龙相似。成方制剂分析结果显示,3批小活络丸(3/6)未检出任何多肽离子,2批伸筋丹胶囊(2/4)中检出保宁腔蚓。本研究所建立的方法专属性好、灵敏度高、可行性强可以用于地龙及其相关制剂的质量控制研究中,对于提高质量标准、规范地龙药材市场具有重要意义。

亲水作用色谱-串联质谱法同时测定瓜蒌皮注射液中35种化合物

采用亲水作用色谱-串联质谱的动态多重反应监测模式建立瓜蒌皮注射液中35种化合物的同时定量分析方法。采用ACQUITY XBridge Amide色谱柱分离,以20 mmol·L^(-1)甲酸铵水溶液(pH 3.0)为流动相A,20 mmol·L^(-1)甲酸铵溶液(pH 3.0)∶乙腈(1∶9)混合溶液为流动相B,进行梯度洗脱,采用外标法定量。结果表明,35种化合物在各自浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数(R2)>0.9980,方法回收率范围为77.6%~118.5%。采用建立好的方法测定了10批样品,结果表明瓜蒌皮注射液中γ-氨基丁酸、葫芦巴碱、丙氨酸、苏氨酸、高丝氨酸、瓜氨酸、亮氨酸等成分含量较高,而烟酰胺、甲基琥珀酸、胞嘧啶、胆碱等成分含量较低。本研究为瓜蒌皮注射液的药效物质基础和质量标准提升研究提供了重要参考。

QuEChERS-超高效液相色谱串联质谱法定性筛查中药材熊胆粉中169种兽药残留

建立了QuEChERS-超高效液相色谱串联质谱法定性筛查中药材熊胆粉中多种兽药残留,包括β-受体激动剂与拮抗剂、抗生素(青霉素类、头孢菌素类、磺胺类、喹诺酮类、氯霉素类、四环素类、硝基咪唑类、大环内酯类、聚醚类等)、抗病毒药、驱虫药、甾体激素、非甾体抗炎药和镇静剂等169种兽药残留。样品经Na2EDTA-McIlvaine缓冲液和5%甲酸乙腈提取,经分散固相萃取法净化,以超高效液相色谱串联三重四极杆质谱法测定,通过离子丰度比定性判定。169种化合物检出限为1~1 000μg·kg-1。本方法简便快速,已应用于实际样品的测定,并可扩展至其他类似药材基质的检测。

基于胆酸类成分的牛胆粉质量控制与掺伪检测研究

目的建立基于胆酸类成分的牛胆粉质量控制方法,对市售牛胆粉的质量进行评价,分析可能存在的摻伪情况。方法建立同时测定牛、羊、猪、鸡、鸭等动物胆粉中胆酸类成分含量的方法,对自制样品与企业收集样品分别进行研究,以自制样品为主要依据,考察牛胆粉与猪、羊等动物胆粉的差异及含量规律,评价企业收集样品的质量及可能存在的掺伪情况。结果建立了HPLC-ELSD法同时测定牛、羊、猪、鸡、鸭等动物胆粉中12种胆酸类成分含量的方法。分析23批自制动物胆粉的测定结果,明确了牛胆粉与其他动物胆粉中胆酸类成分的含量差异;分析23批企业收集牛胆粉样品的测定结果,发现了牛胆粉中可能掺杂羊胆粉、胆酸下脚料两种主要掺伪情况。23批企业收集样品中仅8批符合规定,合格率仅34.8%,品种质量亟须加强提升和监管。结论研究建立的方法可有效控制牛胆粉的质量,识别牛胆粉中可能存在的掺伪情况,为提高牛胆粉的质量标准及加强市场监管提供了参考和依据。

混合型固相萃取-UHPLC/MS/MS法测定银杏酮酯滴丸中银杏酸含量

建立了超高效液相色谱串联三重四极杆质谱测定银杏酮酯滴丸中银杏酸的方法。采用混合型强阴离子反相吸附固相萃取净化样品, Waters Cortecs T3色谱柱(50 mm×2.1mm,2.7μm),以乙腈-甲醇-1%冰醋酸溶液(44∶44∶12)为流动相,在电喷雾离子化负离子模式下,以多反应监测方式(MRM)检测。银杏酸C13∶0、C15∶1、C17∶1分别在0.2~200、2~200和4~200μg·L^(-1)范围内成良好线性关系,相关系数均大于0.999;在50、250和600μg·kg^(-1)加标水平下的平均加样回收率为70.8%~95.1%,相对标准偏差(RSD)为0.7%~8.6%;定量限分别为1、10、20μg·kg^(-1)。本方法可应用于复杂基质样品的银杏酸测定。

痰热清注射液中可见异物成因及检查方法探讨

目的收集痰热清注射液样品,了解其可见异物的基本情况,从而对其可见异物的成因及检查方法进行探讨研究。方法对收集到的不同生产年份、不同生产批号的痰热清注射液样品,分别采用灯检法及光散射法进行可见异物检查,汇总检测结果,并予以数据分析;同时考察了痰热清注射液的可见异物成因中外源性因素(如光照、高温等)及内源性因素(如p H值、辅料等)的影响。结果市面上流通的痰热清注射液样品可见异物检查的阳性检出率较低。外源性因素对痰热清注射液的可见异物指标基本没有影响,而内源性因素中p H值对痰热清注射液的可见异物有显著影响。结论痰热清注射液作为独家生产品种,其生产企业在可见异物控制方面措施有效,质量控制比较成功。另外,灯检法和光散射法应用于痰热清注射液的可见异物检查需要进一步进行考察对比。

一种他达拉非衍生物的的发现与鉴定

采用超高效液相色谱串联四级杆-飞行时间高分辨质谱(UHPLC/Q-TOF HRMS)法,从两种宣称具有缓解疲劳、增强免疫力的保健食品中发现了一种他达拉非衍生物。该化合物与2-羟丙基去甲他达拉非的质谱图特征非常相似,但保留时间却略有差异。采用制备液相色谱仪对该衍生物进行分离纯化,经质谱和氢核磁共振分析鉴定为3-羟丙基去甲他达拉非(3-hydroxypropylnortadalafil),为国内首次报道。

基于纳升高效液相色谱-四极杆-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱技术研究广地龙中的蛋白质

该文以新鲜广地龙(来源钜蚓科动物参环毛蚓Pheretima aspergillum)为研究对象,采用SDS-PAGE法对广地龙总蛋白进行分离,并进行胶内酶切,利用纳升高效液相色谱-四极杆-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱技术研究广地龙中的蛋白质。采用Proteome Discoverer软件,检索环节动物门蛋白数据库(Annelida. fasta)鉴定蛋白。结果共鉴定到386个蛋白质,包括珠蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、纤溶活性蛋白等,大多数蛋白质与细胞结构、能量供给有关,纤溶活性蛋白、胍乙基磷酸丝氨酸蛋白酶可能与抗凝血或溶栓活性有关。利用PANTHER对蛋白进行基因本体功能分类,KEGG进行代谢通路富集分析,发现涉及多种信号转导通路,包括代谢途径、碳代谢通路,氨基酸的生物合成通路,糖酵解/糖异生通路,柠檬酸循环等54种。该研究为阐明广地龙的蛋白物质基础以及其功能研究提供了实验依据。

混合型固相萃取-亲水作用色谱串联质谱法测定熊胆粉中7种氨基糖苷类抗生素残留量

建立了亲水作用色谱串联三重四极杆质谱测定熊胆粉中7种氨基糖苷类抗生素的方法。采用混合型弱阳离子交换反相吸附固相萃取净化样品,Waters ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱(100 mm×3.0 mm,1.7μm),以0.2%甲酸水溶液-0.2%甲酸乙腈溶液为流动相,梯度洗脱,在电喷雾离子化正离子模式下,以多反应监测方式(MRM)检测。大观霉素、链霉素、丁胺卡那霉素、卡那霉素、妥布霉素、安普霉素、新霉素在各自浓度范围内均呈良好线性关系,相关系数均在0.99以上;三水平平均加样回收率为61.3%~127.3%,相对标准偏差(RSD)为0.1%~1.9%;定量限为0.2~1.0 mg·kg^(-1)。本方法已应用于实际样品的测定。