噬菌体法检测宿主菌的侵染条件研究

目的初步建立一种确定寄生菌被完全侵染的方法。方法以细胞噬菌体T4（简称T4）侵染大肠杆菌为模型，通过3种方法测定不同滴度的T4在5min内侵染模拟样品中大肠杆菌的效果。结果在T4〉1．00×10^8PFU／mL的条件下侵染后，样液在培养中吸光度逐渐下降；在同样条件下侵染并清洗掉游离T4后，样液经平板培养无菌落产生，经液体培养不变混浊，并产生少量T4。结论采用1．0×（10^8-10^9）PFU／mL的T4能够在5min内有效而完全侵染模拟样品中大肠杆菌。

利用T4快速检测T4宿主型大肠杆菌初探

【目的】建立一种定量检测噬菌体宿主菌的简捷方法。【方法】按体积比1∶9将4.4×109pfu/mL的T4工作液和已知活菌浓度的T4宿主型大肠杆菌工作液混合形成模拟样品,立即在37℃150 r/min下作用5 min完成侵染,接着采用离心、微滤分离技术清除样品中直径0.22μm以下的物质(包括游离T4),同时将颗粒物(包括受侵染的大肠杆菌)截留在微滤膜中。待受侵染大肠杆菌裂解后,用SM缓冲液将子代T4从微滤膜中洗滤出来,收集滤液得到转换样品。通过噬菌斑计数法测出转换样品子代T4数量,分析其与模拟样品T4宿主型大肠杆菌活菌数量的定量关系。【结果】模拟样品T4宿主型大肠杆菌活菌数的对数和转换样品子代T4数量的对数呈一元线性关系;参试菌株和试验条件决定着方程的斜率和截距。【结论】按照上述方法转换样品,并根据转换样品子代T4数量和上述一元线性关系,可以快速测定样品中T4宿主型大肠杆菌的活菌含量。