PDLLA-T_3对体外培养雪旺细胞影响的实验研究

目的观察甲状腺激素人工神经(PDLLA-T3)对体外培养雪旺细胞的影响。方法体外纯化、培养雪旺细胞后,在雪旺细胞培养板中加入PDLLA-T3(C组),混合培养6d,实验采用MTT法每天观察细胞活性的高低,用血球计数板对雪旺细胞进行计数,并用ELISA方法测定每天培养液中NGF含量的变化。另有不含T3的支架材料PDLLA(B组)、空白组(A组)作为实验对照组。结果培养的雪旺细胞纯度达到94.63%。PDLLA-T3比PDLLA和空白组明显增加雪旺细胞的数量,提高细胞活性,刺激雪旺细胞产生更多的NGF。结论PDLLA-T3和雪旺细胞有较好的组织相容性,对培养的雪旺细胞有较好的正性促进作用,是一种良好的组织工程支架。

逆行示踪法观察甲状腺激素人工神经桥接大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的:用逆行示踪方法观察新构建的甲状腺激素人工神经(PDLLA-T3)是否能桥接大鼠坐骨神经缺损。方法:PDLLA-T3连接大鼠坐骨神经1 cm缺损后,分别于2周、1个月、2个月三个时相点观察,在神经根远段注射30％辣根过氧化物酶水溶液,3天后收集相应脊髓段进行TMB成色反应,计数阳性细胞。结果:1个月后在脊髓前脚可见有阳性细胞,平均仅有5-7个,胞体较小。2个月时,实验组阳性细胞增多,每张切片上可以看到大约10个左右的阳性细胞,胞体大,着色深,较正常组少。结论:PDLLA-T3人工神经成功桥接了大鼠坐骨神经缺损,周围神经与神经元胞体间的联系和轴浆运输得到有效恢复。

甲状腺激素人工神经支架的构建

目的用聚乳酸(P LA)构建一种含有甲状腺激素(T3),并具有纵行排列管经三维立体结构的神经组织工程支架,观察支架中T3溶出度的变化及其对大鼠血清T3的影响。方法按每毫克消旋聚乳酸(PDLLA)中含35ngT3的比例将T3混合在PDLLA中,采用热致相分离法制备三维立体支架,支架内表面涂附纤维粘连蛋白,做扫描电镜观察。同时用放射免疫测定法测定T3溶出度。将材料埋入大鼠体内,分别在1-7天,2、4、8周10个时象点检测大鼠血清T3的浓度,并比较该材料对大鼠血清T3的影响。结果构建的支架材料具有管状纵行排列的立体结构,孔径60-100μm之间。材料每天释放0.96-1.80ngT3,植入体内后大鼠体内的T3浓度均在0.87-1.03ng/m l范围。结论用热致相分离法制备的P LA三维立体支架有良好的立体构型,类似周围神经结构。材料的T3能平稳地释放,植入体内后大鼠体内的血清T3浓度均在正常范围内,对大鼠血清T3浓度无影响。

银染法观察甲状腺激素人工神经促进周围神经再生的研究

目的 用Bielschowsky神经纤维银染法观察再生有髓神经通过PDLLA T3 支架材料的情况及大鼠有髓再生神经纤维的数量。方法 SD大鼠 5 4只 ,分成PDLLA T3 、PDLLA组和自体移植组 3组 ,同只大鼠右侧坐骨神经为正常对照。培养新生大鼠坐骨神经的雪旺细胞 ,将其种植在PDLLA T3 和PDLLA材料上备用 ,每只大鼠左侧坐骨神经经手术造成 1cm缺损 ,然后分别用以上 3组材料进行移植修复 ,在伤后 2周、1个月、2个月 3个时相点收集标本进行神经银染 ,染色结果通过图象分析仪进行分析 ,统计数据行t检验。结果 伤后 2周时各组均见新生的神经纤维通过神经移植段 ,各组之间无显著性差异 ,直到伤后 1个月 ,2个月后 ,PDLLA T3 组好于PDLLA组 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5。自体移植组髓神经增加明显 ,高于其他 2组 ,差异有显著性 ,P <0 .0 5 ,但低于正常值。结论 Bielschowsky神经纤维银染法观察大鼠神经再生效果满意 ,新生的神经纤维可以通过PDLLA T3 ,效果好于PDLLA。