NK4基因在人胰腺癌细胞中的表达及其生物学活性

目的 肝细胞生长因子通过其受体c met的激活 ,在调节肿瘤侵袭、转移和血管形成中具有重要作用。NK4不仅是肝细胞生长因子的拮抗剂 ,而且也是血管形成的抑制剂 ,阻断HGF/c met途径和肿瘤血管的形成可成为抗胰腺癌治疗的策略之一。为此 ,构建NK4基因真核细胞表达载体并进行转染研究 ,探讨NK4基因在胰腺癌细胞中的表达及其生物学活性。方法 对重组 pcDNA3/hNK4质粒转行酶切 ,将NK4基因克隆到真核表达载体pRC/CMV2 ,应用脂质体将重组 pRC/CMV2 hNK4质粒转入胰腺癌SW 1990细胞中 ,采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)及免疫印迹 (Westernblot)分别检测转染肿瘤细胞中NK4mRNA和蛋白的表达 ,并筛选出高转录和高表达的细胞克隆。以MTT法检测其细胞克隆表达产物对血管内皮细胞增殖的影响。结果 转导NK4基因的SW1990细胞可表达并分泌NK4,RT PCR扩增出预期的 45 3bp片段 ,Westernblot显示有 5 0 0 0 0的NK4蛋白 ,其上清液可显著抑制血管内皮细胞的生长 (0 .5 37± 0 .10 6和 1.15 2± 0 .12 8,0 .736± 0 .10 8和 1.16 1± 0 .110 ,P <0 .0 1)。结论 NK4基因对血管内皮细胞的生长具有抑制作用 。