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Rac1在小鼠中性粒细胞抗白假丝酵母菌感染中的作用
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作者 赵赛男 章小缓 +2 位作者 李文卿 胡雁 michael glogauer 《中华口腔医学研究杂志(电子版)》 CAS 2012年第1期6-9,共4页
目的评价Rac1基因在小鼠抗白假丝酵母菌感染中的作用。方法 (1)β-actin作为内参,Western blot半定量法检测两种小鼠中性粒细胞Rac1蛋白表达量;(2)趋化实验用Zigmond法经甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(fMLP)诱导中性粒细胞移动,延时显... 目的评价Rac1基因在小鼠抗白假丝酵母菌感染中的作用。方法 (1)β-actin作为内参,Western blot半定量法检测两种小鼠中性粒细胞Rac1蛋白表达量;(2)趋化实验用Zigmond法经甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(fMLP)诱导中性粒细胞移动,延时显微镜观察中性粒细胞移动并拍照,细胞追踪软件分析小鼠中性粒细胞趋化功能;(3)fMLP诱导小鼠中性粒细胞过氧化物的产生应用异氨基苯二酰肼化学发光分析法通过微孔板发光检测仪检测过氧化物酶含量,采用细胞色素c还原法分析豆蔻酸-佛波醇-乙酸酯(PMA)引发中性粒细胞产生的过氧化物。结果假丝酵母菌耐受BALB/c小鼠中性粒细胞Rac1蛋白表达量高于假丝酵母菌易感CBA/CaH小鼠;BALB/c小鼠中性粒细胞趋化运动功能较CBA/CaH小鼠强(P<0.05);经fMLP和PMA诱导后,BALB/c小鼠中性粒细胞过氧化物的产生量高于CBA/CaH小鼠(P<0.05)。结论在小鼠中性粒细胞抗白假丝酵母菌感染过程中,Rac1能增强小鼠中性粒细胞的杀伤能力。 展开更多
关键词 中性粒细胞 RAC 趋化 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶
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表达双色荧光蛋白的RAW264.7单克隆细胞株的构建及鉴定
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作者 任蕾 王永强 michael glogauer 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期552-557,共6页
目的 利用慢病毒载体(pVSVG)构建表达双色荧光蛋白的单克隆RAW264.7细胞株及其功能鉴定,以期实时检测它们在破骨细胞形成过程中的表达及动态变化.方法 利用pVSVG构建表达双色荧光蛋白的单克隆RAW264.7细胞株,采用激光扫描共聚焦显微... 目的 利用慢病毒载体(pVSVG)构建表达双色荧光蛋白的单克隆RAW264.7细胞株及其功能鉴定,以期实时检测它们在破骨细胞形成过程中的表达及动态变化.方法 利用pVSVG构建表达双色荧光蛋白的单克隆RAW264.7细胞株,采用激光扫描共聚焦显微镜活细胞成像技术连续动态观察RAW264.7细胞在NF-κB受体激活蛋白配体诱导下向破骨细胞形成的过程.采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色(tartrate-resistant acid phosphatase staining,TRAP)及4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色对表达磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)与超正电荷的RAW264.7细胞株及破骨细胞进行功能鉴定.结果 联合转染的RAW264.7细胞株形态为圆形或椭圆形,为正常生长形态,且保留了良好的破骨细胞分化能力.超正电荷绿色荧光蛋白(+ 8-greenfluorescent protein,+8-GFP)主要表达在RAW细胞的质膜上,分布均匀;当破骨细胞形成后,+8-GFP在质膜上的荧光强度明显减弱;PS表达在RAW细胞的质膜上,但在破骨细胞形成后,PS不仅表达在质膜上,同时也分布在细胞质和细胞器上.活细胞成像观察发现破骨细胞融合可发生在贴壁状态下及单核与单核、单核与多核及多核与多核细胞之间,最终形成巨大的多核破骨细胞,因此破骨细胞的融合具有反复性.结论 成功构建可同时表达双色荧光蛋白的单克隆细胞株,为在三维空间进一步研究膜融合过程中的各种蛋白质和其他分子的构象改变,以及它们之间的相互作用方式提供了平台. 展开更多
关键词 破骨细胞 荧光蛋白 超正电荷 磷脂酰丝氨酸
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Neutrophil transcriptional profile changes during transii from bone marrow to sites of inflammation 被引量:3
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作者 Flavia S Lakschevitz Michelle B Visser +1 位作者 Chunxiang Sun michael glogauer 《Cellular & Molecular Immunology》 SCIE CAS CSCD 2015年第1期53-65,共13页
It has recently been established that neutrophils, the most abundant leukocytes, are capable of changes in gene expression during inflammatory responses. However, changes in the transcriptome as the neutrophil leaves ... It has recently been established that neutrophils, the most abundant leukocytes, are capable of changes in gene expression during inflammatory responses. However, changes in the transcriptome as the neutrophil leaves the bone marrow have yet to be described. We hypothesized that neutrophils are transcriptionally active cells that alter their gene expression profiles as they migrate into the vasculature and then into inflamed tissues. Our goal was to provide an overview of how the neutrophil's transcriptome changes as they migrate through different compartments using microarray and bio-informatic approaches. Our study demonstrates that neutrophils are highly plastic cells where normal environmental cues result in a site-specific neutrophil transcriptome. We demonstrate that neutrophil genes undergo one of four distinct expression change patterns as they move from bone marrow through the circulation to sites of inflammation: (i) continuously increasing; (ii) continuously decreasing; (iii) a down-up-down; and (iv) an up-down-up pattern. Additionally, we demonstrate that the neutrophil migration signaling network and the balance between anti-apoptotic and pro-apoptotic signaling are two of the main regulatory mechanisms that change as the neutrophil transits through compartments. 展开更多
关键词 fMLP signaling pathway MICROARRAY NEUTROPHIL TRANSCRIPTOME
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