定量检测绿色荧光蛋白-轻链蛋白3转基因小鼠角质形成细胞自噬水平

目的 探索一种高通量定量检测细胞自噬小体数量的方法。方法 将绿色荧光蛋白？轻链蛋白3（GFP？LC3）转基因小鼠的角质形成细胞分为对照组（不接受照射或饥饿处理）、饥饿组（给予饥饿处理）、20 J/cm^2长波紫外线（UVA）照射组和40 J/cm^2 UVA照射组。处理后6 h，将细胞固定后在共聚焦显微镜下采集图片。用ImageJ软件编辑宏指令对细胞内GFP？LC3绿色荧光点及细胞进行自动计数，并比较不同组间自噬水平。结果 利用ImageJ软件编辑的宏指令可以成功识别并计数荧光图片中的自噬小体。在测试计算机上分析一张420万像素的图片仅需不到0.6 s。饥饿组、20 J/cm^2 UVA照射组和40 J/cm^2 UVA照射组平均自噬小体数量高于对照组，未加胃抑素A时各组间比较，F = 5.01，P 〈 0.05；加入胃抑素A时各组间比较，F = 20.05，P 〈 0.05。该方法可以成功区分饥饿组、UVA照射组和对照组的自噬水平差异。结论 成功为自噬研究提供了一种新的高通量定量检测方法，该方法能够快速准确地检测细胞自噬荧光点。