Grb2抑制剂对K562细胞生长增生的影响

目的 探讨针对Grb2-SH3的抑制剂peptidimer-c对K562细胞生长增生的影响.方法 应用N端基团保护的Fmoc化学,固相合成针对Grb2-SH3的二聚肽peptidimer-c,高压液相色谱技术(HPLC)分析肽的纯度,质谱法分析肽的结构,应用pull-down实验,观察peptidimer-c与K562细胞裂解物中Grb2分子的结合.应用锥虫蓝拒染法、WST-1法、克隆形成法观察peptidimer-c对K562细胞生长的抑制.通过克隆形成实验,探讨peptidimer-c与常用的CML治疗药物甲磺酸伊马替尼(商品名:格列卫)、羟基脲及阿糖胞苷联合应用的合并效应.结果 HPLC图谱上只见一样品峰而无其他杂峰.质谱分析显示,所合成的化合物与设计的肽是一致的.pull-down结果显示,peptidimer-c可与K562细胞中的Grb2分子特异性结合.锥虫蓝计数法结果提示,peptidimer-c可明显抑制K562细胞的生长,且在加药后短时间内(3～6h)即有明显作用,其对K562增生的抑制呈浓度依赖型,而非时间依赖型.WST-1检测结果显示,peptidimer-c杀伤K562细胞的半致死剂量为(17±2)μmol/L.几种化合物对K562克隆形成抑制的半致死剂量分别为:peptidimer-c(3.9±0.9)μmol/L,伊马替尼(0.03±0.02)μmol/L,羟基脲(15±7)μmol/L,阿糖胞苷(0.014±0.012)μmol/L.peptidimer-c分别与伊马替尼、阿糖胞苷、羟基脲联合应用时,对K562克隆形成抑制均表现为相加作用或协同作用,其中1.5 μmol/L peptidimer-c与0.05 μmol/L伊马替尼联合应用,表现协同作用,1.5 μmol/L peptidimer-c与0.006 μmol/L阿糖胞苷或0.01 μmol/L阿糖胞苷联用,也显示协同抑制效应.结论 peptidimer-c能有效抑制K562细胞的生长和增生.与其他类型的药物合用,表现为相加或协同效应,可提高抗肿瘤效应.